pSAT4A-cEYFP-N1 植物双分子荧光质粒

基本信息
名称：pSAT4A-cEYFP-N1 植物双分子荧光质粒
别称: pSAT4A-cEYFP-N1

启动子:	35S
复制子:	pUC
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	植物
载体用途：	双分子荧光
基因种属：	空载体
基因类型：	BIFC
原核抗性：	Amp
筛选标记：
荧光蛋白：

质粒简介
 pSAT4A-cEYFP-N1质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4031 bp ds-DNA     circular SYN 26-SEP-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4031)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Sep 26, 2017 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4031
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     misc_feature    413..1158
                     /label=3×CaMV 35S promoter
     misc_feature    1299..1355
                     /label=MCS
                     /note="multiple cloning site"
     misc_feature    1356..1567
                     /label=cEYFP
     misc_feature    1574..1784
                     /label=CaMV 35S terminator
     rep_origin      complement(2212..2800)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(2971..3831)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(3832..3936)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
       61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
      121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc
      181 accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc
      241 attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat
      301 tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt
      361 tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgccgg cgcgccaccg gtcaacatgt
      421 ggagcacgac acacttgtct actccaaaaa tatcaaagat acagtctcag aagaccaaag
      481 ggcaattgag acttttcaac aaagggtaat atccggaaac ctcctcggat tccattgccc
      541 agctatctgt cactttattg tgaagatagt ggaaaaggaa ggtggctcct acaaatgcca
      601 tcattgcgat aaaggaaagg ccatcgttga agatgcctct gccgacagtg gtcccaaaga
      661 tggaccccca cccacgagga gcatcgtgga aaaagaagac gttccaacca cgtcttcaaa
      721 gcaagtggat tgatgtgata acatggtgga gcacgacaca cttgtctact ccaaaaatat
      781 caaagataca gtctcagaag accaaagggc aattgagact tttcaacaaa gggtaatatc
      841 cggaaacctc ctcggattcc attgcccagc tatctgtcac tttattgtga agatagtgga
      901 aaaggaaggt ggctcctaca aatgccatca ttgcgataaa ggaaaggcca tcgttgaaga
      961 tgcctctgcc gacagtggtc ccaaagatgg acccccaccc acgaggagca tcgtggaaaa
     1021 agaagacgtt ccaaccacgt cttcaaagca agtggattga tgtgatatct ccactgacgt
     1081 aagggatgac gcacaatccc actatccttc gcaagaccct tcctctatat aaggaagttc
     1141 atttcatttg gagaggacgt cgagagttct caacacaaca tatacaaaac aaacgaatct
     1201 caagcaatca agcattctac ttctattgca gcaatttaaa tcatttcttt taaagcaaaa
     1261 gcaattttct gaaaattttc accatttacg aacgatagag atctcgagct caagcttcga
     1321 attctgcagt cgacggtacc gcgggcccgg gatcctgggc agcgtgcagc tcgccgacca
     1381 ctaccagcag aacaccccca tcggcgacgg ccccgtgctg ctgcccgaca accactacct
     1441 gagctaccag tccgccctga gcaaagaccc caacgagaag cgcgatcaca tggtcctgct
     1501 ggagttcgtg accgccgccg ggatcactct cggcatggac gagctgtaca agtgaagatc
     1561 cacctagtct agagtccgca aaaatcacca gtctctctct acaaatctat ctctctctat
     1621 ttttctccag aataatgtgt gagtagttcc cagataaggg aattagggtt cttatagggt
     1681 ttcgctcatg tgttgagcat ataagaaacc cttagtatgt atttgtattt gtaaaatact
     1741 tctatcaata aaatttctaa ttcctaaaac caaaatccag tgacgcggcc gcggcgcgcc
     1801 gtaatcatgg tcatagctgt ttcctgtgtg aaattgttat ccgctcacaa ttccacacaa
     1861 catacgagcc ggaagcataa agtgtaaagc ctggggtgcc taatgagtga gctaactcac
     1921 attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca
     1981 ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc
     2041 ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc
     2101 aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc
     2161 aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag
     2221 gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc
     2281 gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt
     2341 tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct
     2401 ttctcaatgc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg
     2461 ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct
     2521 tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat
     2581 tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg
     2641 ctacactaga aggacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa
     2701 aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt
     2761 ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc
     2821 tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt
     2881 atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta
     2941 aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat
     3001 ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac
     3061 tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg
     3121 ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag
     3181 tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt
     3241 aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt
     3301 gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt
     3361 tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt
     3421 cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct
     3481 tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt
     3541 ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac
     3601 cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa
     3661 actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa
     3721 ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca
     3781 aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct
     3841 ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga
     3901 atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc
     3961 tgacgtctaa gaaaccatta ttatcatgac attaacctat aaaaataggc gtatcacgag
     4021 gccctttcgt c
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1704/pcDNA4-V5-HisA哺乳表达质粒

P1039/pCDNA4-His-MaxB哺乳表达质粒

P1326/pCDNA4-Myc-HisB哺乳表达质粒

P1128/pCDNA4-To-Myc-HisB哺乳表达质粒

P0345/pCDNA6-Myc-HisB哺乳表达质粒

P0816/pCMV-Myc-N哺乳表达质粒

P0817/pCMV-Myc-C哺乳表达质粒

P1040/pCMV-HA-N哺乳表达质粒

P0818/pCMV-HA-C哺乳表达质粒

P0860/pCMV-FLAG-N哺乳表达质粒