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- Xybio
- 上海
- P0657
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pA7-CFP
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pA7-CFP植物荧光质粒
别称: pA7-CFP
| 启动子: | 35s |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒分类: | 植物系列，蛋白过表达载体 |
| 质粒大小: | 4900bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 植物细胞 |
| 5'测序引物: | 35S:GACGCACAATCCCACTATCC |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 植物 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： | 青色 |
质粒简介
pA7-CFP质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3221/pRE112/SM10 λpir质粒菌种 |
| P1908/pEX18TC大肠自杀质粒 |
| P0663/pEX18GM大肠自杀质粒菌种 |
| P4536/pEX18GM质粒菌种 |
| P0423/pKOV大肠自杀质粒 |
| P4537/pKOV质粒菌种 |
| P4951/pMo130-TelR大肠自杀质粒 |
| P2143/pFLP3大肠自杀质粒 |
| P2498/PCMT-flp大肠敲除质粒 |
| P0329/R6K-Box大肠敲除质粒菌种 |
| P3833/R6K-Box质粒菌种 |
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文献和实验步骤 1. 载体的构建 pA7- CFP- AtCOP1，pA7-AtCRY1-YFP pA7- CFP-OsCOPl，pA7-OsCRY1b-YFP 中间载体pA7-CFP和pA7-YFP为本实验室构建。将AtCOPl(引物为AtCOP1XhoI5' 和AtCOP1 SpeI3')和AtCRYl(引物为AtCRY1XhoI5'和AtCCT1SpeI3')分别用高保真聚合酶(pfu ultra)进行PCR扩增，纯化PCR产物，用XhoI/SpeI双酶
1. CUT&Tag 适用于什么物种？如果需要做植物 CUT&Tag ，需要怎么操作？ CUT&Tag 适用于哺乳动物细胞的蛋白-DNA 互作研究，酵母、植物等细胞需要经过(破除细胞壁或者提取细胞核)来进行实验。CUT&Tag 在哺乳动物细胞系上的应用比较成熟，动物组织经过处理得到悬浮单个细胞同样可以进行实验。植物进行 CUT&Tag 操作可以参照 Low-input chromatin profiling in Arabidopsis
。 1巴为 10-6 达因·厘米 -2 ，帕：是帕斯卡（ pascal）的简称，为压强的国际单位。植物细胞水势时常用 Mpa。 1Mpa=106 pa= 10巴 =9.87标准大气压。）
