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- Xybio
- 上海
- P0258
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid #8453;pLKO.1 Puro
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pLKO.1-Puro慢病毒干扰质粒
别称: Plasmid #8453;pLKO.1 Puro
| 启动子: | U6 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal, |
| 质粒分类: | 病毒系列，慢病毒干扰载体 |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | LB，37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 5'测序引物: | U6:ATGGACTATCATATGCTTACCGTA |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 质粒宿主： | 哺乳细胞,慢病毒 |
|---|---|
| 质粒用途： | 基因沉默 |
| 片段类型： | shRNA |
| 片段物种： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Puro |
| 荧光标记： |
质粒简介
pLKO.1-Puro is a cloning vector of shRNA, originally derived from HIV-1. It contains all the necessary cis-elements for packaging, reverse transcription, and integration for subsequent production of the lentiviral particles.
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0068/pQE-30Xa大肠表达质粒 |
| P4200/pQE-30 UA大肠表达质粒 |
| P0069/pQE-31大肠表达质粒 |
| P0070/pQE-32大肠表达质粒 |
| P0864/pQE-60大肠表达质粒 |
| P1221/PQE-70大肠表达质粒 |
| P0071/pQE-80L大肠表达质粒 |
| P2188/pQE-82L大肠表达质粒 |
| P0072/pCold I大肠表达质粒 |
| P0073/pCold II大肠表达质粒 |
| P0074/pCold III大肠表达质粒 |
| P0075/pCold IV大肠表达质粒 |
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文献和实验【求助】怎样判断在一个细胞中同时了导入两个含GFP标记的慢病毒过表达载体？感谢高手指点！
)，但这样我又担心导进去后基因不一定都表达，担心会不会受其他调控表达的机制的影响，比如甲基化等表观遗传学的影响。 希望哪位高手能为在下指点迷津，非常感激！ kinguangjun 你好！你可以一个慢病毒过表达载体用GFP，另一个慢病毒过表达载体用RFP来标记，这样就可以解决你的问题。 zhujoker 你其实可以使用一个带GFP的，一个带PURO抗性的载体不就ok了？两个放在一起也是可以的，其实应该说是更好，因为其表达
一、材料和试剂 1. Hairpin-pLKO.1vector（OpenBiosystems） 2. Packagingvectors:第二代包装质粒包含gag,pol,和rev基因（pCMV-dR8.91或pCMV-dR8.74psPAX2）和包被质粒（pMD2.G）（Addgene） 3. 脂质体2000（Invitrogen） 4.OptiMEM无血清培养基（Invitrogen） 5. 293T包装细胞（ATCC）
，但是你只是为了表达miRNA，没必要。 2、载体很多，比如AMBION的pSilencer 4.1，pLKo.1等等，必须是慢病毒的表达载体。感受态倒没什么限制。 3、退火后直接连慢病毒载体，不需要酶切。当然载体是需要酶切的。化学合成的时候就是直接合成酶切后的位点，而不是完全的酶切位点。 丁坚 加我qq 2582634920 不死圣斗士 设计miRNA的成熟体 然后连接到慢病毒载体上 应该采用什么设计方法呢 我是菜鸟
