pDC315腺病毒质粒

基本信息
名称：pDC315腺病毒质粒
别称: pDC315

启动子:	MCMV promoter
复制子:	pUC ori
终止子:	SV40 poly(A) signal
质粒分类:	病毒系列质粒；慢病毒类质粒；病毒表达质粒
质粒大小:	3913bp
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	Stbl3
培养条件:	37度
5'测序引物:	pDC315-F：acgtgggtataagaggcg
3'测序引物:	pDC315-R：cgatgctagacgatccag

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞,腺病毒
载体用途：	蛋白表达
基因种属：
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
   pDC315质粒是一种真核表达质粒载体，将目的基因插入多克隆位点，转染细胞即可进行表达。 带有目的基因的 pDC315 可以通过插入位点两侧的酶切位点以及目的基因内部的特异酶切位点进行鉴定。
              1． Ampr : 为质粒在 E.coli（如 DH5α）中扩增提供氨苄抗性（终浓度 100µg/ml）。 
              2． ori：质粒在 E.coli 中的复制起点。
              3． Ad：Ad 序列，主要由 Ad 可以与 Ad 基因组质粒发生同源重组。
              4． ITR：Ad 反向末端重复序列，是 Ad 基因组的包装识别信号。
              5． MCMV：来自小鼠 CMV 病毒的立早启动子。
              6． SV40 polyA：来自 SV40 病毒 T 抗原的 mRNA 加尾信号。
              7． loxP：真核重组酶（Cre）的重组识别序列。
质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                3913 bp ds-DNA     circular SYN 18-SEP-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3913)
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Sep 18, 2017 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3913
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     misc_feature    complement(2..102)
                     /label=ITR
     misc_signal     190..340
                     /label=Ad5 Psi
                     /note="packaging signal for adenovirus serotype 5"
     misc_feature    469..991
                     /label=MCMV promoter
     misc_feature    993..1028
                     /label=MCS
     polyA_signal    1029..1188
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     protein_bind    1190..1223
                     /label=loxP
                     /bound_moiety="Cre recombinase"
                     /note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core 
                     sequence (GCATACAT)."
     rep_origin      complement(1647..2235)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(2406..3266)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(3267..3371)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     misc_feature    3454..453
                     /label=Ad
     misc_feature    3823..1
                     /label=ITR
ORIGIN
        1 ttcatcaata atatacctta ttttggattg aagccaatat gataatgagg gggtggagtt
       61 tgtgacgtgg cgcggggcgt gggaacgggg cgggtgacgt agtagtgtgg cggaagtgtg
      121 atgttgcaag tgtggcggaa cacatgtaag cgacggatgt ggcaaaagtg acgtttttgg
      181 tgtgcgccgg tgtacacagg aagtgacaat tttcgcgcgg ttttaggcgg atgttgtagt
      241 aaatttgggc gtaaccgagt aagatttggc cattttcgcg ggaaaactga ataagaggaa
      301 gtgaaatctg aataattttg tgttactcat agcgcgtaat atttgtctag ggccgcgggg
      361 actttgaccg tttacgtgga gactcgccca ggtgtttttc tcaggtgttt tccgcgttcc
      421 gggtcaaagt tggcgtttta ttattatagt cagntctaga gatatactga gtcattaggg
      481 actttccaat gggttttgcc cagtacataa ggtcaatagg ggtgaatcaa caggaaagtc
      541 ccattggagc caagtacact gagtcaatag ggactttcca ttgggttttg cccagtacaa
      601 aaggtcaata gggggtgagt caatgggttt ttcccattat tggcacgtac ataaggtcaa
      661 taggggtgag tcattgggtt tttccagcca tttaattaaa acgccatgta ctttcccacc
      721 attgacgtca atgggctatt gaaactaatg caacgtgacc tttaaacggt actttcccat
      781 agctgattaa tgggaaagta ccgttctcga gccaatacac gtcaatggga agtgaaaggg
      841 cagccaaaac gtaacaccgc cccggttttc ccctggaaat tccatattgg cactcattct
      901 attggctgag ctgcgttcta cgtgggtata agaggcgcga ccagcgtcgg taccgtcgca
      961 gtcttcggtc tgaccaccgt agaacgcaga tcgaattcaa gctgctagca aggatccagc
     1021 ttgtcgactt cgagcaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc
     1081 atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa
     1141 ctcatcaatg tatcttatca tgtctggatc gtctagcatc gaagatccaa taacttcgta
     1201 tagcatacat tatacgaagt tataagtagc ttggcgtaat catggtcata gctgtttcct
     1261 gtgtgaaatt gttatccgct cacaattcca cacaacatac gagccggaag cataaagtgt
     1321 aaagcctggg gtgcctaatg agtgagctaa ctcacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc
     1381 gctttccagt cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg
     1441 agaggcggtt tgcgtattgg gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg
     1501 gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca
     1561 gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac
     1621 cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac
     1681 aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg
     1741 tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac
     1801 ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc aatgctcacg ctgtaggtat
     1861 ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag
     1921 cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac
     1981 ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt
     2041 gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaaggac agtatttggt
     2101 atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc
     2161 aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga
     2221 aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac
     2281 gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc
     2341 cttttaaatt aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta tatatgagta aacttggtct
     2401 gacagttacc aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct atttcgttca
     2461 tccatagttg cctgactccc cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg cttaccatct
     2521 ggccccagtg ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac cggctccaga tttatcagca
     2581 ataaaccagc cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc
     2641 atccagtcta ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta gttcgccagt taatagtttg
     2701 cgcaacgttg ttgccattgc tacaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct
     2761 tcattcagct ccggttccca acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa
     2821 aaagcggtta gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta
     2881 tcactcatgg ttatggcagc actgcataat tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc
     2941 ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat gcggcgaccg
     3001 agttgctctt gcccggcgtc aacacgggat aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa
     3061 gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct caaggatctt accgctgttg
     3121 agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc ttttactttc
     3181 accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg
     3241 gcgacacgga aatgttgaat actcatactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat
     3301 cagggttatt gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata
     3361 ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc
     3421 atgacattaa cctataaaaa taggcgtatc actctaggca aaatagcacc ctcccgctcc
     3481 agaacaacat acagcgcttc acagcggcag cctaacagtc agccttacca gtaaaaaaga
     3541 aaacctatta aaaaaacacc actcgacacg gcaccagctc aatcagtcac agtgtaaaaa
     3601 agggccaagt gcagagcgag tatatatagg actaaaaaat gacgtaacgg ttaaagtcca
     3661 caaaaaacac ccagaaaacc gcacgcgaac ctacgcccag aaacgaaagc caaaaaaccc
     3721 acaacttcct caaatcgtca cttccgtttt cccacgttac gtaacttccc attttaagaa
     3781 aactacaatt cccaacacat acaagttact ccgccctaaa acctacgtca cccgccccgt
     3841 tcccacgccc cgcgccacgt cacaaactcc accccctcat tatcatattg gcttcaatcc
     3901 aaaataaggt ata
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2472/pENTR223-ATG7人源基因质粒

P2473/pENTR223-C1orf107-T2251G人源基因质粒

P2474/pENTR223-CPT1A人源基因质粒

P2475/pENTR223-YY1AP1人源基因质粒

P2476/pENTR223-PFKM人源基因质粒

P2477/pENTR223-ZNF432-A1943人源基因质粒

P2478/pENTR223-FES人源基因质粒

P2479/pENTR223-PIGQ人源基因质粒

P2480/pENTR223-RARS人源基因质粒

P2481/pENTR223-MAN1B1人源基因质粒

P2482/pENTR223-HSPA2人源基因质粒