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- Xybio
- 上海
- P0358
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pEE6.4
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pEE6.4哺乳抗体质粒
别称:pEE6.4
| 启动子: | hCMV |
|---|---|
| 复制子: | Pee6 |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，抗体表达载体 |
| 质粒大小: | 5067bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达,抗体表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
Lonza生物公司的Glutamine Synthetase(GS, 谷氨酰胺合成酶)基因表达系统载体pEE6.4载体，利用谷氨酰胺合成酶筛选标记，能够高水平的在哺乳细胞内表达目的基因。GS酶是生物体内以谷氨酸和氨为底物合成谷氨酰胺的酶。GS酶的活性能够被甲硫氨酸砜亚胺（methionine sulphoximine，MSX）选择性的抑制。一些哺乳动物细胞，例如小鼠骨髓瘤细胞(NSO细胞系)无法表达GS，所以在不添加谷氨酰胺的情况下， 细胞将无法生长。对于这些细胞系，在无谷氨酰胺的培养基内，一个转染的GS基因可以作为一个筛选标记。其他的一些细胞系，例如CHO-KI，能够产生内源 性的GS酶。对于这些细胞，在无谷氨酰胺培养基内，在高水平足够抑制GS酶合成的MSX（甲硫氨酸砜亚胺）的作用下，可以对细胞的生长提供一个选择压力。
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2894/pENTR223-AP2M1（2同义突变）人源基因质粒 |
| P2895/pENTR223-SETDB1人源基因质粒 |
| P2896/pENTR223-SLC18A1（1-1146bp）人源基因质粒 |
| P2897/pENTR223-ZMYND10人源基因质粒 |
| P2898/pENTR223-HDAC3（1同义突变）人源基因质粒 |
| P2899/pENTR223-KRT18-T502C人源基因质粒 |
| P2900/pENTR223-DCAF15（493-1803bp）人源基因质粒 |
| P2901/pENTR223-ASTN2-C1262T人源基因质粒 |
| P2902/pENTR223-SLC30A4人源基因质粒 |
| P2903/pENTR223-CLASP2人源基因质粒 |
| P2904/pENTR223-KLHDC3人源基因质粒 |
| P2905/pENTR223-KRR1-T617C人源基因质粒 |
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文献和实验为非溶性蛋白，也可被单克隆抗体柱层析，重新还原的产物可以被抗Derpl血清识别，其结合率优于pGEX克隆产物。为了减少繁琐，表达更好的重组蛋白，有人尝试以Der p1的原酶和酶原放人同一酵母载体表达，效果良好。 3．哺乳动物表达 构建一个扩大的载体PEE6．HCMV．GS，从中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达Derpl和Derp2。人巨细胞病毒(CMV)启动子(ACMD)和谷胱甘肽合成酶基因，通过放大质粒拷贝数增加细胞内酶高效表达，以控制抗代谢产物硫代
CR。 多数B细胞表面有CR，除B细胞外，单核 -巨噬细胞、中性粒细胞、K细胞、哺乳类动物血小板、人及灵长类红细胞上均有补体受体。B细胞的补体受体与其活化有关，补体受体也能促进吞噬细胞的吞噬作用。此外，如免疫粒附作用以及抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用也与补体有关。
1、不同鼠群的管理不同的鼠群，管理方式、方法或要求是不同的。核心种鼠群担负着为生产鼠群提供种鼠的任务。管理上要求比较细致。当采用一种公鼠与五只种母鼠循环配种时，种公鼠与种母鼠在同一鼠罐中同居10天，然后将怀孕种母鼠单罐饲养，再使种公鼠与另一鼠罐的种母鼠同居10天。依此类推，循环往复进行。根据需要和培育方向，有计划地配种、留种。留种时按1：1的比例进行选留，多余仔鼠予以淘汰。选留的仔鼠，要延长哺乳期至23天，离乳时体重要求达13克以上。保证向生产种鼠群提供优质后代。生产种鼠群交配繁殖频繁，尤其种
