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- Xybio
- 上海
- P1715
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#53188
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：phU6-gRNA哺乳编辑质粒
别称: Plasmid#53188
质粒属性
质粒简介
phU6-gRNA是一个哺乳细胞gRNA表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3515 bp ds-DNA circular SYN 30-NOV-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3515
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin complement(3..458)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 696..936
/label=U6 promoter
/note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"
misc_RNA 963..1038
/label=gRNA scaffold
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
rep_origin complement(1535..2123)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2200..2994)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter complement(3029..3386)
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3043..3178
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
promoter complement(3388..3492)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc
61 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga
121 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc
181 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc
241 ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag
301 cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa
361 agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac
421 cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgccat tcaggctgcg
481 caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta ttacgccagc tggcgaaagg
541 gggatgtgct gcaaggcgat taagttgggt aacgccaggg ttttcccagt cacgacgttg
601 taaaacgacg gccagtgagc gcgcgtaata cgactcacta tagggcgaat tgggtacccg
661 tctcacaggc ggatcgatcc aaggtcgggc aggaagaggg cctatttccc atgattcctt
721 catatttgca tatacgatac aaggctgtta gagagataat tggaattaat ttgactgtaa
781 acacaaagat attagtacaa aatacgtgac gtagaaagta ataatttctt gggtagtttg
841 cagttttaaa attatgtttt aaaatggact atcatatgct taccgtaact tgaaagtatt
901 tcgatttctt ggctttatat atcttgtgga aaggacgaaa caccgggtct tcgagaagac
961 ctgttttaga gctagaaata gcaagttaaa ataaggctag tccgttatca acttgaaaaa
1021 gtggcaccga gtcggtgctt tttttctccg ctgagcgtac tgagacgccg cggtggagct
1081 ccagcttttg ttccctttag tgagggttaa ttgcgcgctt ggcgtaatca tggtcatagc
1141 tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca caacatacga gccggaagca
1201 taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct
1261 cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac
1321 gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc
1381 tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt
1441 tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg
1501 ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg
1561 agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat
1621 accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta
1681 ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct
1741 gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc
1801 ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa
1861 gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg
1921 taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaaggacag
1981 tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt
2041 gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta
2101 cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc
2161 agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgat cagaagaact cgtcaagaag
2221 gcgatagaag gcgatgcgct gcgaatcggg agcggcgata ccgtaaagca cgaggaagcg
2281 gtcagcccat tcgccgccaa gctcttcagc aatatcacgg gtagccaacg ctatgtcctg
2341 atagcggtcc gccacaccca gccggccaca gtcgatgaat ccagaaaagc ggccattttc
2401 caccatgata ttcggcaagc aggcatcgcc atgggtcacg acgagatcct cgccgtcggg
2461 catgctcgcc ttgagcctgg cgaacagttc ggctggcgcg agcccctgat gctcttcgtc
2521 cagatcatcc tgatcgacaa gaccggcttc catccgagta cgtgctcgct cgatgcgatg
2581 tttcgcttgg tggtcgaatg ggcaggtagc cggatcaagc gtatgcagcc gccgcattgc
2641 atcagccatg atggatactt tctcggcagg agcaaggtga gatgacagga gatcctgccc
2701 cggcacttcg cccaatagca gccagtccct tcccgcttca gtgacaacgt cgagcacagc
2761 tgcgcaagga acgcccgtcg tggccagcca cgatagccgc gctgcctcgt cttgcagttc
2821 attcagggca ccggacaggt cggtcttgac aaaaagaacc gggcgcccct gcgctgacag
2881 ccggaacacg gcggcatcag agcagccgat tgtctgttgt gcccagtcat agccgaatag
2941 cctctccacc caagcggccg gagaacctgc gtgcaatcca tcttgttcaa tcatgcgaaa
3001 cgatcctcat cctgtctctt gatcgatctt tgcaaaagcc taggcctcca aaaaagcctc
3061 ctcactactt ctggaatagc tcagaggccg aggcggcctc ggcctctgca taaataaaaa
3121 aaattagtca gccatggggc ggagaatggg cggaactggg cggagttagg ggcgggatgg
3181 gcggagttag gggcgggact atggttgctg actaattgag atgcatgctt tgcatacttc
3241 tgcctgctgg ggagcctggg gactttccac acctggttgc tgactaattg agatgcatgc
3301 tttgcatact tctgcctgct ggggagcctg gggactttcc acaccctaac tgacacacat
3361 tccacagctg gttctttccg cctcaggact cttccttttt caatattatt gaagcattta
3421 tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat
3481 aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccac
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：phU6-gRNA哺乳编辑质粒
别称: Plasmid#53188
| 启动子: | hU6 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 基因敲除 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
phU6-gRNA是一个哺乳细胞gRNA表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3515 bp ds-DNA circular SYN 30-NOV-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3515
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin complement(3..458)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 696..936
/label=U6 promoter
/note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"
misc_RNA 963..1038
/label=gRNA scaffold
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
rep_origin complement(1535..2123)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2200..2994)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter complement(3029..3386)
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3043..3178
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
promoter complement(3388..3492)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc
61 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga
121 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc
181 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc
241 ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag
301 cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa
361 agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac
421 cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgccat tcaggctgcg
481 caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta ttacgccagc tggcgaaagg
541 gggatgtgct gcaaggcgat taagttgggt aacgccaggg ttttcccagt cacgacgttg
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661 tctcacaggc ggatcgatcc aaggtcgggc aggaagaggg cctatttccc atgattcctt
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1021 gtggcaccga gtcggtgctt tttttctccg ctgagcgtac tgagacgccg cggtggagct
1081 ccagcttttg ttccctttag tgagggttaa ttgcgcgctt ggcgtaatca tggtcatagc
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1561 agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat
1621 accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta
1681 ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct
1741 gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc
1801 ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa
1861 gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg
1921 taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaaggacag
1981 tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt
2041 gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta
2101 cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc
2161 agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgat cagaagaact cgtcaagaag
2221 gcgatagaag gcgatgcgct gcgaatcggg agcggcgata ccgtaaagca cgaggaagcg
2281 gtcagcccat tcgccgccaa gctcttcagc aatatcacgg gtagccaacg ctatgtcctg
2341 atagcggtcc gccacaccca gccggccaca gtcgatgaat ccagaaaagc ggccattttc
2401 caccatgata ttcggcaagc aggcatcgcc atgggtcacg acgagatcct cgccgtcggg
2461 catgctcgcc ttgagcctgg cgaacagttc ggctggcgcg agcccctgat gctcttcgtc
2521 cagatcatcc tgatcgacaa gaccggcttc catccgagta cgtgctcgct cgatgcgatg
2581 tttcgcttgg tggtcgaatg ggcaggtagc cggatcaagc gtatgcagcc gccgcattgc
2641 atcagccatg atggatactt tctcggcagg agcaaggtga gatgacagga gatcctgccc
2701 cggcacttcg cccaatagca gccagtccct tcccgcttca gtgacaacgt cgagcacagc
2761 tgcgcaagga acgcccgtcg tggccagcca cgatagccgc gctgcctcgt cttgcagttc
2821 attcagggca ccggacaggt cggtcttgac aaaaagaacc gggcgcccct gcgctgacag
2881 ccggaacacg gcggcatcag agcagccgat tgtctgttgt gcccagtcat agccgaatag
2941 cctctccacc caagcggccg gagaacctgc gtgcaatcca tcttgttcaa tcatgcgaaa
3001 cgatcctcat cctgtctctt gatcgatctt tgcaaaagcc taggcctcca aaaaagcctc
3061 ctcactactt ctggaatagc tcagaggccg aggcggcctc ggcctctgca taaataaaaa
3121 aaattagtca gccatggggc ggagaatggg cggaactggg cggagttagg ggcgggatgg
3181 gcggagttag gggcgggact atggttgctg actaattgag atgcatgctt tgcatacttc
3241 tgcctgctgg ggagcctggg gactttccac acctggttgc tgactaattg agatgcatgc
3301 tttgcatact tctgcctgct ggggagcctg gggactttcc acaccctaac tgacacacat
3361 tccacagctg gttctttccg cctcaggact cttccttttt caatattatt gaagcattta
3421 tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat
3481 aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccac
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2376/pECMV-3×FLAG-MRP4(2364-3837bp)人源基因质粒 |
| P2377/pEGFP-C3-ATG5人源基因质粒 |
| P2412/pECMV-3×FLAG-MAPK15人源基因质粒 |
| P2413/pECMV-3×FLAG-MS4A3人源基因质粒 |
| P2414/pECMV-3×FLAG-C19orf36人源基因质粒 |
| P2415/pECMV-3×FLAG-TIGIT人源基因质粒 |
| P2416/pECMV-3×FLAG-STXBP1人源基因质粒 |
| P2417/pECMV-3×FLAG-HDAC7人源基因质粒 |
| P2418/pECMV-3×FLAG-CXCR4人源基因质粒 |
| P2961/pECMV-3×FLAG-GUCY2C人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
Cell Rep：上海科技大学季泉江团队开发出高效微型 CRISPR-SpaCas12f1 基因编辑系统
。同时，研究人员发现 SpaCas12f1 的 tracrRNA 具有独特的 head-to-toe 的发夹结构，这是限制 SpaCas12f1 在哺乳动物细胞有效编辑的主要因素。通过对 RNA 二级结构预测及小 RNA 测序结果分析，研究人员设计了五种策略，系统地工程化向导 RNA，成功地获得了高效的引导 RNA，gRNA_MS13，从而实现 CRISPR-SpaCas12f1 高效哺乳动物细胞编辑。 这项研究扩展了微型 CRISPR 核酸酶工具库，并为基因治疗和工程化微型 CRISPR 系统提供
最近 CRISPR/Cas9 基因敲除技术可谓风靡全世界的实验室，CRISPR 被称为规律成簇间隔短回文重复，其实际上就是一种基因编辑器，是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统。后来，研究人员发现，它似乎是一种精确的万能基因武器，可以用来删除、添加、激活或抑制其他生物体的目标基因。由于其相对于前几代基因敲除技术而言更为简便高效。所以一经问世便受到科研界的热捧。利用 Cas9 质粒建立 knock-out 细胞系实验过程主要有以下几步：1. 确定待敲除基因的靶位点；2. 设计识别靶位点识别的一对
Nature 子刊：迈出基因组重编码制备抗病毒人类细胞系的第一步
，初步证明了 TAG 转换为 TAA 在人类基因组中的可行性，同时创造了一次递送在人类基因组中数十个非重复位点同步碱基编辑的记录，为哺乳动物基因组的大规模工程化改造提供了一个工作框架。此外， GRIT 软件也可以被开发成一个新的计算机辅助设计 (CAD) 平台，用于设计编写大规模的基因组。 该研究迈出了基因组重编码制备抗多种天然病毒人类细胞系的第一步，为哺乳动物基因组多重复合编辑和 GP-write 路线图的制定奠定了基础。 虽然读取 DNA 密码的技术不断进步，但科学家们编写 DNA 密码
phU6-gRNA哺乳编辑质粒
￥100 - 1000
