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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
Plasmid#53186
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:phH1-gRNA哺乳编辑质粒
别称: Plasmid#53186
| 启动子: | hH1 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主: | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途: | 基因敲除 |
| 基因种属: | |
| 基因类型: | |
| 原核抗性: | Kan |
| 真核抗性: | Neo/G418 |
| 荧光蛋白: |
质粒简介
phH1-gRNA是一个哺乳细胞gRNA表达基因编辑质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3451 bp ds-DNA circular SYN 07-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3451
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 1..215
/label=H1 promoter
/note="human H1 RNA promoter"
misc_RNA 242..317
/label=gRNA scaffold
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
rep_origin complement(803..1391)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(1468..2262)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter complement(2297..2654)
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2311..2446
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
promoter complement(2656..2760)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
rep_origin complement(2786..3241)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 gaacgctgac gtcatcaacc cgctccaagg aatcgcgggc ccagtgtcac taggcgggaa
61 cacccagcgc gcgtgcgccc tggcaggaag atggctgtga gggacagggg agtggcgccc
121 tgcaatattt gcatgtcgct atgtgttctg ggaaatcacc ataaacgtga aatgtctttg
181 gatttgggaa tcttataagt tctgtatgag accactcttt cccaggtctt cgagaagacc
241 tgttttagag ctagaaatag caagttaaaa taaggctagt ccgttatcaa cttgaaaaag
301 tggcaccgag tcggtgcttt ttttggtctg agacgccgcg gtggagctcc agcttttgtt
361 ccctttagtg agggttaatt gcgcgcttgg cgtaatcatg gtcatagctg tttcctgtgt
421 gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc cggaagcata aagtgtaaag
481 cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt
541 tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag
601 gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg
661 ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat
721 caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta
781 aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa
841 atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc
901 cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt
961 ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca
1021 gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg
1081 accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat
1141 cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta
1201 cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct
1261 gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac
1321 aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa
1381 aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa
1441 actcacgtta agggattttg gtcatgatca gaagaactcg tcaagaaggc gatagaaggc
1501 gatgcgctgc gaatcgggag cggcgatacc gtaaagcacg aggaagcggt cagcccattc
1561 gccgccaagc tcttcagcaa tatcacgggt agccaacgct atgtcctgat agcggtccgc
1621 cacacccagc cggccacagt cgatgaatcc agaaaagcgg ccattttcca ccatgatatt
1681 cggcaagcag gcatcgccat gggtcacgac gagatcctcg ccgtcgggca tgctcgcctt
1741 gagcctggcg aacagttcgg ctggcgcgag cccctgatgc tcttcgtcca gatcatcctg
1801 atcgacaaga ccggcttcca tccgagtacg tgctcgctcg atgcgatgtt tcgcttggtg
1861 gtcgaatggg caggtagccg gatcaagcgt atgcagccgc cgcattgcat cagccatgat
1921 ggatactttc tcggcaggag caaggtgaga tgacaggaga tcctgccccg gcacttcgcc
1981 caatagcagc cagtcccttc ccgcttcagt gacaacgtcg agcacagctg cgcaaggaac
2041 gcccgtcgtg gccagccacg atagccgcgc tgcctcgtct tgcagttcat tcagggcacc
2101 ggacaggtcg gtcttgacaa aaagaaccgg gcgcccctgc gctgacagcc ggaacacggc
2161 ggcatcagag cagccgattg tctgttgtgc ccagtcatag ccgaatagcc tctccaccca
2221 agcggccgga gaacctgcgt gcaatccatc ttgttcaatc atgcgaaacg atcctcatcc
2281 tgtctcttga tcgatctttg caaaagccta ggcctccaaa aaagcctcct cactacttct
2341 ggaatagctc agaggccgag gcggcctcgg cctctgcata aataaaaaaa attagtcagc
2401 catggggcgg agaatgggcg gaactgggcg gagttagggg cgggatgggc ggagttaggg
2461 gcgggactat ggttgctgac taattgagat gcatgctttg catacttctg cctgctgggg
2521 agcctgggga ctttccacac ctggttgctg actaattgag atgcatgctt tgcatacttc
2581 tgcctgctgg ggagcctggg gactttccac accctaactg acacacattc cacagctggt
2641 tctttccgcc tcaggactct tcctttttca atattattga agcatttatc agggttattg
2701 tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg
2761 cacatttccc cgaaaagtgc cacctaaatt gtaagcgtta atattttgtt aaaattcgcg
2821 ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct
2881 tataaatcaa aagaatagac cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg gaacaagagt
2941 ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta tcagggcgat
3001 ggcccactac gtgaaccatc accctaatca agttttttgg ggtcgaggtg ccgtaaagca
3061 ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga tttagagctt gacggggaaa gccggcgaac
3121 gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct ggcaagtgta
3181 gcggtcacgc tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct acagggcgcg
3241 tcccattcgc cattcaggct gcgcaactgt tgggaagggc gatcggtgcg ggcctcttcg
3301 ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca
3361 gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagtg agcgcgcgta atacgactca
3421 ctatagggcg aattgggtac ccgtctcacc t
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P2359/pENTR223-SLC25A6-C408T人源基因质粒 |
| P2360/pENTR223-DIMT1-A405G人源基因质粒 |
| P2361/pENTR223-CIAPIN1-C810A人源基因质粒 |
| P2362/pENTR223-MRPL4人源基因质粒 |
| P2363/pENTR223-DECR2人源基因质粒 |
| P2364/pENTR223-GNB3人源基因质粒 |
| P2365/pENTR223-FAM118B人源基因质粒 |
| P2366/pENTR223-EIF2S2人源基因质粒 |
| P2367/pENTR223-FOXA3-G8T人源基因质粒 |
| P2368/pENTR223-HDAC11人源基因质粒 |
| P2369/pENTR223-RDH11人源基因质粒 |
| P2370/pENTR223-GNB1L人源基因质粒 |
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文献和实验Cell Rep:上海科技大学季泉江团队开发出高效微型 CRISPR-SpaCas12f1 基因编辑系统
。同时,研究人员发现 SpaCas12f1 的 tracrRNA 具有独特的 head-to-toe 的发夹结构,这是限制 SpaCas12f1 在哺乳动物细胞有效编辑的主要因素。通过对 RNA 二级结构预测及小 RNA 测序结果分析,研究人员设计了五种策略,系统地工程化向导 RNA,成功地获得了高效的引导 RNA,gRNA_MS13,从而实现 CRISPR-SpaCas12f1 高效哺乳动物细胞编辑。 这项研究扩展了微型 CRISPR 核酸酶工具库,并为基因治疗和工程化微型 CRISPR 系统提供
最近 CRISPR/Cas9 基因敲除技术可谓风靡全世界的实验室,CRISPR 被称为规律成簇间隔短回文重复,其实际上就是一种基因编辑器,是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统。后来,研究人员发现,它似乎是一种精确的万能基因武器,可以用来删除、添加、激活或抑制其他生物体的目标基因。由于其相对于前几代基因敲除技术而言更为简便高效。所以一经问世便受到科研界的热捧。利用 Cas9 质粒建立 knock-out 细胞系实验过程主要有以下几步:1. 确定待敲除基因的靶位点;2. 设计识别靶位点识别的一对
Nature 子刊:迈出基因组重编码制备抗病毒人类细胞系的第一步
,初步证明了 TAG 转换为 TAA 在人类基因组中的可行性,同时创造了一次递送在人类基因组中数十个非重复位点同步碱基编辑的记录,为哺乳动物基因组的大规模工程化改造提供了一个工作框架。此外, GRIT 软件也可以被开发成一个新的计算机辅助设计 (CAD) 平台,用于设计编写大规模的基因组。 该研究迈出了基因组重编码制备抗多种天然病毒人类细胞系的第一步,为哺乳动物基因组多重复合编辑和 GP-write 路线图的制定奠定了基础。 虽然读取 DNA 密码的技术不断进步,但科学家们编写 DNA 密码











