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phH1-gRNA哺乳编辑质粒

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  • 上海
  • P1818
  • 2025年07月16日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20

    • 保质期

      2年

    • 英文名

      Plasmid#53186

    • 库存

      100

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 规格

      干粉/液体

    基本信息
    名称:phH1-gRNA哺乳编辑质粒
    别称: Plasmid#53186
    启动子: hH1
    复制子: pUC
    原核抗性: Kan
    筛选标记: G418
    克隆菌株: DH5a
    培养条件: 37度


    质粒属性
    载体宿主: 哺乳细胞
    载体用途: 基因敲除
    基因种属:  
    基因类型:  
    原核抗性: Kan
    真核抗性: Neo/G418
    荧光蛋白:


    质粒简介
     phH1-gRNA是一个哺乳细胞gRNA表达基因编辑质粒。

    质粒图谱
    产品细节图片1

    质粒序列
    LOCUS       Exported                3451 bp ds-DNA     circular SYN 07-JAN-2018
    DEFINITION  synthetic circular DNA
    FEATURES             Location/Qualifiers
         source          1..3451
                         /organism="synthetic DNA construct"
                         /mol_type="other DNA"
         promoter        1..215
                         /label=H1 promoter
                         /note="human H1 RNA promoter"
         misc_RNA        242..317
                         /label=gRNA scaffold
                         /note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes 
                         CRISPR/Cas9 system"
         rep_origin      complement(803..1391)
                         /direction=LEFT
                         /label=ori
                         /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                         replication"
         CDS             complement(1468..2262)
                         /codon_start=1
                         /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                         /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                         /label=NeoR/KanR
                         /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                         (Geneticin(R))"
                         /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                         VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                         SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                         GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                         LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
         promoter        complement(2297..2654)
                         /label=SV40 promoter
                         /note="SV40 enhancer and early promoter"
         rep_origin      2311..2446
                         /label=SV40 ori
                         /note="SV40 origin of replication"
         promoter        complement(2656..2760)
                         /gene="bla"
                         /label=AmpR promoter
         rep_origin      complement(2786..3241)
                         /direction=LEFT
                         /label=f1 ori
                         /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                         indicates direction of (+) strand synthesis"
    ORIGIN
            1 gaacgctgac gtcatcaacc cgctccaagg aatcgcgggc ccagtgtcac taggcgggaa
           61 cacccagcgc gcgtgcgccc tggcaggaag atggctgtga gggacagggg agtggcgccc
          121 tgcaatattt gcatgtcgct atgtgttctg ggaaatcacc ataaacgtga aatgtctttg
          181 gatttgggaa tcttataagt tctgtatgag accactcttt cccaggtctt cgagaagacc
          241 tgttttagag ctagaaatag caagttaaaa taaggctagt ccgttatcaa cttgaaaaag
          301 tggcaccgag tcggtgcttt ttttggtctg agacgccgcg gtggagctcc agcttttgtt
          361 ccctttagtg agggttaatt gcgcgcttgg cgtaatcatg gtcatagctg tttcctgtgt
          421 gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc cggaagcata aagtgtaaag
          481 cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt
          541 tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag
          601 gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg
          661 ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat
          721 caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta
          781 aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa
          841 atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc
          901 cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt
          961 ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca
         1021 gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg
         1081 accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat
         1141 cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta
         1201 cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct
         1261 gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac
         1321 aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa
         1381 aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa
         1441 actcacgtta agggattttg gtcatgatca gaagaactcg tcaagaaggc gatagaaggc
         1501 gatgcgctgc gaatcgggag cggcgatacc gtaaagcacg aggaagcggt cagcccattc
         1561 gccgccaagc tcttcagcaa tatcacgggt agccaacgct atgtcctgat agcggtccgc
         1621 cacacccagc cggccacagt cgatgaatcc agaaaagcgg ccattttcca ccatgatatt
         1681 cggcaagcag gcatcgccat gggtcacgac gagatcctcg ccgtcgggca tgctcgcctt
         1741 gagcctggcg aacagttcgg ctggcgcgag cccctgatgc tcttcgtcca gatcatcctg
         1801 atcgacaaga ccggcttcca tccgagtacg tgctcgctcg atgcgatgtt tcgcttggtg
         1861 gtcgaatggg caggtagccg gatcaagcgt atgcagccgc cgcattgcat cagccatgat
         1921 ggatactttc tcggcaggag caaggtgaga tgacaggaga tcctgccccg gcacttcgcc
         1981 caatagcagc cagtcccttc ccgcttcagt gacaacgtcg agcacagctg cgcaaggaac
         2041 gcccgtcgtg gccagccacg atagccgcgc tgcctcgtct tgcagttcat tcagggcacc
         2101 ggacaggtcg gtcttgacaa aaagaaccgg gcgcccctgc gctgacagcc ggaacacggc
         2161 ggcatcagag cagccgattg tctgttgtgc ccagtcatag ccgaatagcc tctccaccca
         2221 agcggccgga gaacctgcgt gcaatccatc ttgttcaatc atgcgaaacg atcctcatcc
         2281 tgtctcttga tcgatctttg caaaagccta ggcctccaaa aaagcctcct cactacttct
         2341 ggaatagctc agaggccgag gcggcctcgg cctctgcata aataaaaaaa attagtcagc
         2401 catggggcgg agaatgggcg gaactgggcg gagttagggg cgggatgggc ggagttaggg
         2461 gcgggactat ggttgctgac taattgagat gcatgctttg catacttctg cctgctgggg
         2521 agcctgggga ctttccacac ctggttgctg actaattgag atgcatgctt tgcatacttc
         2581 tgcctgctgg ggagcctggg gactttccac accctaactg acacacattc cacagctggt
         2641 tctttccgcc tcaggactct tcctttttca atattattga agcatttatc agggttattg
         2701 tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg
         2761 cacatttccc cgaaaagtgc cacctaaatt gtaagcgtta atattttgtt aaaattcgcg
         2821 ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct
         2881 tataaatcaa aagaatagac cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg gaacaagagt
         2941 ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta tcagggcgat
         3001 ggcccactac gtgaaccatc accctaatca agttttttgg ggtcgaggtg ccgtaaagca
         3061 ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga tttagagctt gacggggaaa gccggcgaac
         3121 gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct ggcaagtgta
         3181 gcggtcacgc tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct acagggcgcg
         3241 tcccattcgc cattcaggct gcgcaactgt tgggaagggc gatcggtgcg ggcctcttcg
         3301 ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca
         3361 gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagtg agcgcgcgta atacgactca
         3421 ctatagggcg aattgggtac ccgtctcacc t
    //

    质粒菌株产品操作说明书
    一、扩增流程
             收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
             1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
                  1100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
                  加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37培养45min
                  6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
                  将平板正向培养1h,再倒置37培养14h。如果要求是30度则培养20h
    (菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
                  挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
            2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
                  四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
            3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
            4、菌落平板(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  直接挑取单菌落至液体培养基中。
            5、液体质粒(冰袋运输,存于-20,保质期90天)
                  单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
            6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。

    二、转化图片
    产品细节图片2
    产品细节图片3
    P2359/pENTR223-SLC25A6-C408T人源基因质粒
    P2360/pENTR223-DIMT1-A405G人源基因质粒
    P2361/pENTR223-CIAPIN1-C810A人源基因质粒
    P2362/pENTR223-MRPL4人源基因质粒
    P2363/pENTR223-DECR2人源基因质粒
    P2364/pENTR223-GNB3人源基因质粒
    P2365/pENTR223-FAM118B人源基因质粒
    P2366/pENTR223-EIF2S2人源基因质粒
    P2367/pENTR223-FOXA3-G8T人源基因质粒
    P2368/pENTR223-HDAC11人源基因质粒
    P2369/pENTR223-RDH11人源基因质粒
    P2370/pENTR223-GNB1L人源基因质粒
     

     

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