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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pCAMBIA0380
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCAMBIA0380植物表达质粒
别称: pCAMBIA0380
质粒属性
质粒简介
The pCambia vector backbone is derived from the pPZP vectors.
The pCambia0380 vector offers:
High copy number in E.coli for high DNA yields
pVS1 replicon for high stability in Agrobacterium
Small size
Restriction sites designed for modular plasmid modifications and small but adequate poly-linkers for introducing your DNA of interest
Bacterial selection with kanamycin
This vector contains a range of restriction sites on either side of the pUC8 polylinker, making it suitable for advanced construction purposes with users inserting their own promoters, selection genes, reporter genes. The only functional signals between the T-DNA borders are the start and stop codons, the histidine tag, and the NOS-poly(A) signal.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6813 bp ds-DNA circular SYN 13-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 4
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6813)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6813
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS 6..23
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
terminator 58..310
/note="NOS terminator"
/note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"
misc_feature 332..356
/note="RB T-DNA repeat"
/note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"
CDS 1656..2285
/codon_start=1
/product="stability protein from the Pseudomonas plasmid
pVS1 (Heeb et al., 2000)"
/note="pVS1 StaA"
/translation="MKVIAVLNQKGGSGKTTIATHLARALQLAGADVLLVDSDPQGSAR
DWAAVREDQPLTVVGIDRPTIDRDVKAIGRRDFVVIDGAPQAADLAVSAIKAADFVLIP
VQPSPYDIWATADLVELVKQRIEVTDGRLQAAFVVSRAIKGTRIGGEVAEALAGYELPI
LESRITQRVSYPGTAAAGTTVLESEPEGDAAREVQALAAEIKSKLI"
CDS 2714..3787
/codon_start=1
/product="replication protein from the Pseudomonas plasmid
pVS1 (Heeb et al., 2000)"
/note="pVS1 RepA"
/translation="MSGRKPSGPVQIGAALGDDLVEKLKAAQAAQRQRIEAEARPGESW
QAAADRIRKESRQPPAAGAPSIRKPPKGDEQPDFFVPMLYDVGTRDSRSIMDVAVFRLS
KRDRRAGEVIRYELPDGHVEVSAGPAGMASVWDYDLVLMAVSHLTESMNRYREGKGDKP
GRVFRPHVADVLKFCRRADGGKQKDDLVETCIRLNTTHVAMQRTKKAKNGRLVTVSEGE
ALISRYKIVKSETGRPEYIEIELADWMYREITEGKNPDVLTVHPDYFLIDPGIGRFLYR
LARRAAGKAEARWLFKTIYERSGSAGEFKKFCFTVRKLIGSNDLPEYDLKEEAGQAGPI
LVMRYRNLIEGEASAGS"
rep_origin 3853..4047
/note="pVS1 oriV"
/note="origin of replication for the Pseudomonas plasmid
pVS1 (Heeb et al., 2000)"
misc_feature 4391..4531
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(4717..5305)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5392..6186)
/codon_start=1
/gene="aphA-3"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin"
/translation="MAKMRISPELKKLIEKYRCVKDTEGMSPAKVYKLVGENENLYLKM
TDSRYKGTTYDVEREKDMMLWLEGKLPVPKVLHFERHDGWSNLLMSEADGVLCSEEYED
EQSPEKIIELYAECIRLFHSIDISDCPYTNSLDSRLAELDYLLNNDLADVDCENWEEDT
PFKDPRELYDFLKTEKPEEELVFSHGDLGDSNIFVKDGKVSGFIDLGRSGRADKWYDIA
FCVRSIREDIGEEQYVELFFDLLGIKPDWEKIKYYILLDELF"
misc_feature 6611..6635
/note="LB T-DNA repeat"
/note="left border repeat from nopaline C58 T-DNA"
ORIGIN
1 ctagccacca ccaccaccac cacgtgtgaa ttacaggtga ccagctcgaa tttccccgat
61 cgttcaaaca tttggcaata aagtttctta agattgaatc ctgttgccgg tcttgcgatg
121 attatcatat aatttctgtt gaattacgtt aagcatgtaa taattaacat gtaatgcatg
181 acgttattta tgagatgggt ttttatgatt agagtcccgc aattatacat ttaatacgcg
241 atagaaaaca aaatatagcg cgcaaactag gataaattat cgcgcgcggt gtcatctatg
301 ttactagatc gggaattaaa ctatcagtgt ttgacaggat atattggcgg gtaaacctaa
361 gagaaaagag cgtttattag aataacggat atttaaaagg gcgtgaaaag gtttatccgt
421 tcgtccattt gtatgtgcat gccaaccaca gggttcccct cgggatcaaa gtactttgat
481 ccaacccctc cgctgctata gtgcagtcgg cttctgacgt tcagtgcagc cgtcttctga
541 aaacgacatg tcgcacaagt cctaagttac gcgacaggct gccgccctgc ccttttcctg
601 gcgttttctt gtcgcgtgtt ttagtcgcat aaagtagaat acttgcgact agaaccggag
661 acattacgcc atgaacaaga gcgccgccgc tggcctgctg ggctatgccc gcgtcagcac
721 cgacgaccag gacttgacca accaacgggc cgaactgcac gcggccggct gcaccaagct
781 gttttccgag aagatcaccg gcaccaggcg cgaccgcccg gagctggcca ggatgcttga
841 ccacctacgc cctggcgacg ttgtgacagt gaccaggcta gaccgcctgg cccgcagcac
901 ccgcgaccta ctggacattg ccgagcgcat ccaggaggcc ggcgcgggcc tgcgtagcct
961 ggcagagccg tgggccgaca ccaccacgcc ggccggccgc atggtgttga ccgtgttcgc
1021 cggcattgcc gagttcgagc gttccctaat catcgaccgc acccggagcg ggcgcgaggc
1081 cgccaaggcc cgaggcgtga agtttggccc ccgccctacc ctcaccccgg cacagatcgc
1141 gcacgcccgc gagctgatcg accaggaagg ccgcaccgtg aaagaggcgg ctgcactgct
1201 tggcgtgcat cgctcgaccc tgtaccgcgc acttgagcgc agcgaggaag tgacgcccac
1261 cgaggccagg cggcgcggtg ccttccgtga ggacgcattg accgaggccg acgccctggc
1321 ggccgccgag aatgaacgcc aagaggaaca agcatgaaac cgcaccagga cggccaggac
1381 gaaccgtttt tcattaccga agagatcgag gcggagatga tcgcggccgg gtacgtgttc
1441 gagccgcccg cgcacgtctc aaccgtgcgg ctgcatgaaa tcctggccgg tttgtctgat
1501 gccaagctgg cggcctggcc ggccagcttg gccgctgaag aaaccgagcg ccgccgtcta
1561 aaaaggtgat gtgtatttga gtaaaacagc ttgcgtcatg cggtcgctgc gtatatgatg
1621 cgatgagtaa ataaacaaat acgcaagggg aacgcatgaa ggttatcgct gtacttaacc
1681 agaaaggcgg gtcaggcaag acgaccatcg caacccatct agcccgcgcc ctgcaactcg
1741 ccggggccga tgttctgtta gtcgattccg atccccaggg cagtgcccgc gattgggcgg
1801 ccgtgcggga agatcaaccg ctaaccgttg tcggcatcga ccgcccgacg attgaccgcg
1861 acgtgaaggc catcggccgg cgcgacttcg tagtgatcga cggagcgccc caggcggcgg
1921 acttggctgt gtccgcgatc aaggcagccg acttcgtgct gattccggtg cagccaagcc
1981 cttacgacat atgggccacc gccgacctgg tggagctggt taagcagcgc attgaggtca
2041 cggatggaag gctacaagcg gcctttgtcg tgtcgcgggc gatcaaaggc acgcgcatcg
2101 gcggtgaggt tgccgaggcg ctggccgggt acgagctgcc cattcttgag tcccgtatca
2161 cgcagcgcgt gagctaccca ggcactgccg ccgccggcac aaccgttctt gaatcagaac
2221 ccgagggcga cgctgcccgc gaggtccagg cgctggccgc tgaaattaaa tcaaaactca
2281 tttgagttaa tgaggtaaag agaaaatgag caaaagcaca aacacgctaa gtgccggccg
2341 tccgagcgca cgcagcagca aggctgcaac gttggccagc ctggcagaca cgccagccat
2401 gaagcgggtc aactttcagt tgccggcgga ggatcacacc aagctgaaga tgtacgcggt
2461 acgccaaggc aagaccatta ccgagctgct atctgaatac atcgcgcagc taccagagta
2521 aatgagcaaa tgaataaatg agtagatgaa ttttagcggc taaaggaggc ggcatggaaa
2581 atcaagaaca accaggcacc gacgccgtgg aatgccccat gtgtggagga acgggcggtt
2641 ggccaggcgt aagcggctgg gttgtctgcc ggccctgcaa tggcactgga acccccaagc
2701 ccgaggaatc ggcgtgagcg gtcgcaaacc atccggcccg gtacaaatcg gcgcggcgct
2761 gggtgatgac ctggtggaga agttgaaggc cgcgcaggcc gcccagcggc aacgcatcga
2821 ggcagaagca cgccccggtg aatcgtggca agcggccgct gatcgaatcc gcaaagaatc
2881 ccggcaaccg ccggcagccg gtgcgccgtc gattaggaag ccgcccaagg gcgacgagca
2941 accagatttt ttcgttccga tgctctatga cgtgggcacc cgcgatagtc gcagcatcat
3001 ggacgtggcc gttttccgtc tgtcgaagcg tgaccgacga gctggcgagg tgatccgcta
3061 cgagcttcca gacgggcacg tagaggtttc cgcagggccg gccggcatgg ccagtgtgtg
3121 ggattacgac ctggtactga tggcggtttc ccatctaacc gaatccatga accgataccg
3181 ggaagggaag ggagacaagc ccggccgcgt gttccgtcca cacgttgcgg acgtactcaa
3241 gttctgccgg cgagccgatg gcggaaagca gaaagacgac ctggtagaaa cctgcattcg
3301 gttaaacacc acgcacgttg ccatgcagcg tacgaagaag gccaagaacg gccgcctggt
3361 gacggtatcc gagggtgaag ccttgattag ccgctacaag atcgtaaaga gcgaaaccgg
3421 gcggccggag tacatcgaga tcgagctagc tgattggatg taccgcgaga tcacagaagg
3481 caagaacccg gacgtgctga cggttcaccc cgattacttt ttgatcgatc ccggcatcgg
3541 ccgttttctc taccgcctgg cacgccgcgc cgcaggcaag gcagaagcca gatggttgtt
3601 caagacgatc tacgaacgca gtggcagcgc cggagagttc aagaagttct gtttcaccgt
3661 gcgcaagctg atcgggtcaa atgacctgcc ggagtacgat ttgaaggagg aggcggggca
3721 ggctggcccg atcctagtca tgcgctaccg caacctgatc gagggcgaag catccgccgg
3781 ttcctaatgt acggagcaga tgctagggca aattgcccta gcaggggaaa aaggtcgaaa
3841 aggtctcttt cctgtggata gcacgtacat tgggaaccca aagccgtaca ttgggaaccg
3901 gaacccgtac attgggaacc caaagccgta cattgggaac cggtcacaca tgtaagtgac
3961 tgatataaaa gagaaaaaag gcgatttttc cgcctaaaac tctttaaaac ttattaaaac
4021 tcttaaaacc cgcctggcct gtgcataact gtctggccag cgcacagccg aagagctgca
4081 aaaagcgcct acccttcggt cgctgcgctc cctacgcccc gccgcttcgc gtcggcctat
4141 cgcggccgct ggccgctcaa aaatggctgg cctacggcca ggcaatctac cagggcgcgg
4201 acaagccgcg ccgtcgccac tcgaccgccg gcgcccacat caaggcaccc tgcctcgcgc
4261 gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct cccggagacg gtcacagctt
4321 gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg cgcgtcagcg ggtgttggcg
4381 ggtgtcgggg cgcagccatg acccagtcac gtagcgatag cggagtgtat actggcttaa
4441 ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat atgcggtgtg aaataccgca
4501 cagatgcgta aggagaaaat accgcatcag gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc
4561 gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg
4621 gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa
4681 ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga
4741 cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag
4801 ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct
4861 taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg
4921 ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc
4981 ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt
5041 aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta
5101 tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaaggac
5161 agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc
5221 ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat
5281 tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc
5341 tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg cattctaggt actaaaacaa
5401 ttcatccagt aaaatataat attttatttt ctcccaatca ggcttgatcc ccagtaagtc
5461 aaaaaatagc tcgacatact gttcttcccc gatatcctcc ctgatcgacc ggacgcagaa
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5581 tttgccatct ttcacaaaga tgttgctgtc tcccaggtcg ccgtgggaaa agacaagttc
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6061 atataggttt tcattttctc ccaccagctt atatacctta gcaggagaca ttccttccgt
6121 atcttttacg cagcggtatt tttcgatcag ttttttcaat tccggtgata ttctcatttt
6181 agccatttat tatttccttc ctcttttcta cagtatttaa agatacccca agaagctaat
6241 tataacaaga cgaactccaa ttcactgttc cttgcattct aaaaccttaa ataccagaaa
6301 acagcttttt caaagttgtt ttcaaagttg gcgtataaca tagtatcgac ggagccgatt
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6421 ctccgcgaga tcatccgtgt ttcaaacccg gcagcttagt tgccgttctt ccgaatagca
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6541 ctgatgggct gcctgtatcg agtggtgatt ttgtgccgag ctgccggtcg gggagctgtt
6601 ggctggctgg tggcaggata tattgtggtg taaacaaatt gacgcttaga caacttaata
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6721 gttgggcccg gcgcgccgaa ttcccgggga tccgtcgacc tgcagccaag ctttaagagg
6781 agtccaccat ggtagatctg actagtgtta acg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCAMBIA0380植物表达质粒
别称: pCAMBIA0380
| 启动子: | 无 |
|---|---|
| 复制子: | pVS1 |
| 终止子: | NOS terminator |
| 质粒大小: | 6813bp |
| 质粒标签: | C-6xHis |
| 原核抗性: | Kan |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 植物 |
| 5'测序引物: | 根据序列设计引物 |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 植物 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
The pCambia vector backbone is derived from the pPZP vectors.
The pCambia0380 vector offers:
High copy number in E.coli for high DNA yields
pVS1 replicon for high stability in Agrobacterium
Small size
Restriction sites designed for modular plasmid modifications and small but adequate poly-linkers for introducing your DNA of interest
Bacterial selection with kanamycin
This vector contains a range of restriction sites on either side of the pUC8 polylinker, making it suitable for advanced construction purposes with users inserting their own promoters, selection genes, reporter genes. The only functional signals between the T-DNA borders are the start and stop codons, the histidine tag, and the NOS-poly(A) signal.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6813 bp ds-DNA circular SYN 13-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 4
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6813)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6813
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS 6..23
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/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
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/note="NOS terminator"
/note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"
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/note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"
CDS 1656..2285
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/product="stability protein from the Pseudomonas plasmid
pVS1 (Heeb et al., 2000)"
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LESRITQRVSYPGTAAAGTTVLESEPEGDAAREVQALAAEIKSKLI"
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/product="replication protein from the Pseudomonas plasmid
pVS1 (Heeb et al., 2000)"
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pVS1 (Heeb et al., 2000)"
misc_feature 4391..4531
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replication"
CDS complement(5392..6186)
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ORIGIN
1 ctagccacca ccaccaccac cacgtgtgaa ttacaggtga ccagctcgaa tttccccgat
61 cgttcaaaca tttggcaata aagtttctta agattgaatc ctgttgccgg tcttgcgatg
121 attatcatat aatttctgtt gaattacgtt aagcatgtaa taattaacat gtaatgcatg
181 acgttattta tgagatgggt ttttatgatt agagtcccgc aattatacat ttaatacgcg
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601 gcgttttctt gtcgcgtgtt ttagtcgcat aaagtagaat acttgcgact agaaccggag
661 acattacgcc atgaacaaga gcgccgccgc tggcctgctg ggctatgccc gcgtcagcac
721 cgacgaccag gacttgacca accaacgggc cgaactgcac gcggccggct gcaccaagct
781 gttttccgag aagatcaccg gcaccaggcg cgaccgcccg gagctggcca ggatgcttga
841 ccacctacgc cctggcgacg ttgtgacagt gaccaggcta gaccgcctgg cccgcagcac
901 ccgcgaccta ctggacattg ccgagcgcat ccaggaggcc ggcgcgggcc tgcgtagcct
961 ggcagagccg tgggccgaca ccaccacgcc ggccggccgc atggtgttga ccgtgttcgc
1021 cggcattgcc gagttcgagc gttccctaat catcgaccgc acccggagcg ggcgcgaggc
1081 cgccaaggcc cgaggcgtga agtttggccc ccgccctacc ctcaccccgg cacagatcgc
1141 gcacgcccgc gagctgatcg accaggaagg ccgcaccgtg aaagaggcgg ctgcactgct
1201 tggcgtgcat cgctcgaccc tgtaccgcgc acttgagcgc agcgaggaag tgacgcccac
1261 cgaggccagg cggcgcggtg ccttccgtga ggacgcattg accgaggccg acgccctggc
1321 ggccgccgag aatgaacgcc aagaggaaca agcatgaaac cgcaccagga cggccaggac
1381 gaaccgtttt tcattaccga agagatcgag gcggagatga tcgcggccgg gtacgtgttc
1441 gagccgcccg cgcacgtctc aaccgtgcgg ctgcatgaaa tcctggccgg tttgtctgat
1501 gccaagctgg cggcctggcc ggccagcttg gccgctgaag aaaccgagcg ccgccgtcta
1561 aaaaggtgat gtgtatttga gtaaaacagc ttgcgtcatg cggtcgctgc gtatatgatg
1621 cgatgagtaa ataaacaaat acgcaagggg aacgcatgaa ggttatcgct gtacttaacc
1681 agaaaggcgg gtcaggcaag acgaccatcg caacccatct agcccgcgcc ctgcaactcg
1741 ccggggccga tgttctgtta gtcgattccg atccccaggg cagtgcccgc gattgggcgg
1801 ccgtgcggga agatcaaccg ctaaccgttg tcggcatcga ccgcccgacg attgaccgcg
1861 acgtgaaggc catcggccgg cgcgacttcg tagtgatcga cggagcgccc caggcggcgg
1921 acttggctgt gtccgcgatc aaggcagccg acttcgtgct gattccggtg cagccaagcc
1981 cttacgacat atgggccacc gccgacctgg tggagctggt taagcagcgc attgaggtca
2041 cggatggaag gctacaagcg gcctttgtcg tgtcgcgggc gatcaaaggc acgcgcatcg
2101 gcggtgaggt tgccgaggcg ctggccgggt acgagctgcc cattcttgag tcccgtatca
2161 cgcagcgcgt gagctaccca ggcactgccg ccgccggcac aaccgttctt gaatcagaac
2221 ccgagggcga cgctgcccgc gaggtccagg cgctggccgc tgaaattaaa tcaaaactca
2281 tttgagttaa tgaggtaaag agaaaatgag caaaagcaca aacacgctaa gtgccggccg
2341 tccgagcgca cgcagcagca aggctgcaac gttggccagc ctggcagaca cgccagccat
2401 gaagcgggtc aactttcagt tgccggcgga ggatcacacc aagctgaaga tgtacgcggt
2461 acgccaaggc aagaccatta ccgagctgct atctgaatac atcgcgcagc taccagagta
2521 aatgagcaaa tgaataaatg agtagatgaa ttttagcggc taaaggaggc ggcatggaaa
2581 atcaagaaca accaggcacc gacgccgtgg aatgccccat gtgtggagga acgggcggtt
2641 ggccaggcgt aagcggctgg gttgtctgcc ggccctgcaa tggcactgga acccccaagc
2701 ccgaggaatc ggcgtgagcg gtcgcaaacc atccggcccg gtacaaatcg gcgcggcgct
2761 gggtgatgac ctggtggaga agttgaaggc cgcgcaggcc gcccagcggc aacgcatcga
2821 ggcagaagca cgccccggtg aatcgtggca agcggccgct gatcgaatcc gcaaagaatc
2881 ccggcaaccg ccggcagccg gtgcgccgtc gattaggaag ccgcccaagg gcgacgagca
2941 accagatttt ttcgttccga tgctctatga cgtgggcacc cgcgatagtc gcagcatcat
3001 ggacgtggcc gttttccgtc tgtcgaagcg tgaccgacga gctggcgagg tgatccgcta
3061 cgagcttcca gacgggcacg tagaggtttc cgcagggccg gccggcatgg ccagtgtgtg
3121 ggattacgac ctggtactga tggcggtttc ccatctaacc gaatccatga accgataccg
3181 ggaagggaag ggagacaagc ccggccgcgt gttccgtcca cacgttgcgg acgtactcaa
3241 gttctgccgg cgagccgatg gcggaaagca gaaagacgac ctggtagaaa cctgcattcg
3301 gttaaacacc acgcacgttg ccatgcagcg tacgaagaag gccaagaacg gccgcctggt
3361 gacggtatcc gagggtgaag ccttgattag ccgctacaag atcgtaaaga gcgaaaccgg
3421 gcggccggag tacatcgaga tcgagctagc tgattggatg taccgcgaga tcacagaagg
3481 caagaacccg gacgtgctga cggttcaccc cgattacttt ttgatcgatc ccggcatcgg
3541 ccgttttctc taccgcctgg cacgccgcgc cgcaggcaag gcagaagcca gatggttgtt
3601 caagacgatc tacgaacgca gtggcagcgc cggagagttc aagaagttct gtttcaccgt
3661 gcgcaagctg atcgggtcaa atgacctgcc ggagtacgat ttgaaggagg aggcggggca
3721 ggctggcccg atcctagtca tgcgctaccg caacctgatc gagggcgaag catccgccgg
3781 ttcctaatgt acggagcaga tgctagggca aattgcccta gcaggggaaa aaggtcgaaa
3841 aggtctcttt cctgtggata gcacgtacat tgggaaccca aagccgtaca ttgggaaccg
3901 gaacccgtac attgggaacc caaagccgta cattgggaac cggtcacaca tgtaagtgac
3961 tgatataaaa gagaaaaaag gcgatttttc cgcctaaaac tctttaaaac ttattaaaac
4021 tcttaaaacc cgcctggcct gtgcataact gtctggccag cgcacagccg aagagctgca
4081 aaaagcgcct acccttcggt cgctgcgctc cctacgcccc gccgcttcgc gtcggcctat
4141 cgcggccgct ggccgctcaa aaatggctgg cctacggcca ggcaatctac cagggcgcgg
4201 acaagccgcg ccgtcgccac tcgaccgccg gcgcccacat caaggcaccc tgcctcgcgc
4261 gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct cccggagacg gtcacagctt
4321 gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg cgcgtcagcg ggtgttggcg
4381 ggtgtcgggg cgcagccatg acccagtcac gtagcgatag cggagtgtat actggcttaa
4441 ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat atgcggtgtg aaataccgca
4501 cagatgcgta aggagaaaat accgcatcag gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc
4561 gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg
4621 gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa
4681 ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga
4741 cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag
4801 ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct
4861 taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg
4921 ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc
4981 ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt
5041 aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta
5101 tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaaggac
5161 agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc
5221 ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat
5281 tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc
5341 tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg cattctaggt actaaaacaa
5401 ttcatccagt aaaatataat attttatttt ctcccaatca ggcttgatcc ccagtaagtc
5461 aaaaaatagc tcgacatact gttcttcccc gatatcctcc ctgatcgacc ggacgcagaa
5521 ggcaatgtca taccacttgt ccgccctgcc gcttctccca agatcaataa agccacttac
5581 tttgccatct ttcacaaaga tgttgctgtc tcccaggtcg ccgtgggaaa agacaagttc
5641 ctcttcgggc ttttccgtct ttaaaaaatc atacagctcg cgcggatctt taaatggagt
5701 gtcttcttcc cagttttcgc aatccacatc ggccagatcg ttattcagta agtaatccaa
5761 ttcggctaag cggctgtcta agctattcgt atagggacaa tccgatatgt cgatggagtg
5821 aaagagcctg atgcactccg catacagctc gataatcttt tcagggcttt gttcatcttc
5881 atactcttcc gagcaaagga cgccatcggc ctcactcatg agcagattgc tccagccatc
5941 atgccgttca aagtgcagga cctttggaac aggcagcttt ccttccagcc atagcatcat
6001 gtccttttcc cgttccacat cataggtggt ccctttatac cggctgtccg tcatttttaa
6061 atataggttt tcattttctc ccaccagctt atatacctta gcaggagaca ttccttccgt
6121 atcttttacg cagcggtatt tttcgatcag ttttttcaat tccggtgata ttctcatttt
6181 agccatttat tatttccttc ctcttttcta cagtatttaa agatacccca agaagctaat
6241 tataacaaga cgaactccaa ttcactgttc cttgcattct aaaaccttaa ataccagaaa
6301 acagcttttt caaagttgtt ttcaaagttg gcgtataaca tagtatcgac ggagccgatt
6361 ttgaaaccgc ggtgatcaca ggcagcaacg ctctgtcatc gttacaatca acatgctacc
6421 ctccgcgaga tcatccgtgt ttcaaacccg gcagcttagt tgccgttctt ccgaatagca
6481 tcggtaacat gagcaaagtc tgccgcctta caacggctct cccgctgacg ccgtcccgga
6541 ctgatgggct gcctgtatcg agtggtgatt ttgtgccgag ctgccggtcg gggagctgtt
6601 ggctggctgg tggcaggata tattgtggtg taaacaaatt gacgcttaga caacttaata
6661 acacattgcg gacgttttta atgtactgaa ttaacgccga attaattcct aggccaccat
6721 gttgggcccg gcgcgccgaa ttcccgggga tccgtcgacc tgcagccaag ctttaagagg
6781 agtccaccat ggtagatctg actagtgtta acg
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2524/pENTR223-SMUG1人源基因质粒 |
| P2525/pENTR223-CCL13人源基因质粒 |
| P2526/pENTR223-RPL36AL-T11C人源基因质粒 |
| P2527/pENTR223-SNX9-G267C人源基因质粒 |
| P2528/pENTR223-NDUFA5人源基因质粒 |
| P2529/pENTR223-NDUFV3人源基因质粒 |
| P2530/pENTR223-VAMP1-G13A人源基因质粒 |
| P2531/pENTR223-SUMO3人源基因质粒 |
| P2532/pENTR223-PLAC8人源基因质粒 |
| P2533/pENTR223-LOC116349人源基因质粒 |
| P2534/pENTR223-FILIP1L人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
ws 各位站友，本人因克隆某个植物抗病基因而完成了其BAC文库，目前正在做图位克隆的工作。 但文库的完成耗费了大量人力、物力和财力，因此想请教下该库还有什么其它用途。或与其 它技术结合，可开展什么工作。 谢谢了。。。。 zhujoker BAC (Bacterial Artificial Chromosome, 细菌人工染色体)文库是进行全基因组测序、构建物理图谱、染色体步
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pCAMBIA0380植物表达质粒
￥100 - 1000
