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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
AAV-U6gRNA1-U6gRNA2-TnT-Cre
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：AAV-U6gRNA1-U6gRNA2-TnT-Cre同源重组质粒
别称: AAV-U6gRNA1-U6gRNA2-TnT-Cre
质粒属性
质粒简介
AAV-U6gRNA1-U6gRNA2-TnT-Cre是一个哺乳细胞腺相关病毒Cre和2×gRNA表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5958 bp ds-DNA circular SYN 26-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5958
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 1..241
/label=U6 promoter
/note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"
misc_RNA 278..353
/label=gRNA scaffold
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
promoter 366..606
/label=U6 promoter
/note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"
misc_RNA 633..708
/label=gRNA scaffold
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
misc_feature 721..1134
/label=gallus TnT promoter
intron 1260..1392
/label=chimeric intron
/note="chimera between introns from human beta-globin and
immunoglobulin heavy chain genes"
promoter 1437..1455
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 1467..1487
/codon_start=1
/product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
40) large T antigen"
/label=SV40 NLS
/translation="PKKKRKV"
misc_feature 1488..2516
/label=Cre
polyA_signal 2554..3030
/label=hGH poly(A) signal
/note="human growth hormone polyadenylation signal"
repeat_region 3070..3210
/label=AAV2 ITR
/note="inverted terminal repeat of adeno-associated virus
serotype 2"
rep_origin 3285..3740
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 4022..4126
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 4127..4987
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 5158..5746
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 gagggcctat ttcccatgat tccttcatat ttgcatatac gatacaaggc tgttagagag
61 ataattggaa ttaatttgac tgtaaacaca aagatattag tacaaaatac gtgacgtaga
121 aagtaataat ttcttgggta gtttgcagtt ttaaaattat gttttaaaat ggactatcat
181 atgcttaccg taacttgaaa gtatttcgat ttcttggctt tatatatctt gtggaaagga
241 cgaaacaccg actgcaggtg gaattccacc tgctcaggtt ttagagctag aaatagcaag
301 ttaaaataag gctagtccgt tatcaacttg aaaaagtggc accgagtcgg tgctttttta
361 cgcgtgaggg cctatttccc atgattcctt catatttgca tatacgatac aaggctgtta
421 gagagataat tggaattaat ttgactgtaa acacaaagat attagtacaa aatacgtgac
481 gtagaaagta ataatttctt gggtagtttg cagttttaaa attatgtttt aaaatggact
541 atcatatgct taccgtaact tgaaagtatt tcgatttctt ggctttatat atcttgtgga
601 aaggacgaaa caccggaaga gcgagctctt ctgttttaga gctagaaata gcaagttaaa
661 ataaggctag tccgttatca acttgaaaaa gtggcaccga gtcggtgctt tttttctagt
721 gggataaaag cagtctgggc tttcacatga cagcatctgg ggctgcggca gagggtcggg
781 tccgaagcgc tgccttatca gcgtccccag ccctgggagg tgacagctgg ctggcttgtg
841 tcagcccctc gggcactcac gtatctccgt ccgacgggtt taaaatagca aaactctgag
901 gccacacaat agcttgggct tatatgggct cctgtggggg aagggggagc acggaggggg
961 ccggggccgc tgctgccaaa atagcagctc acaagtgttg cattcctctc tgggcgccgg
1021 gcacattcct gctggctctg cccgccccgg ggtgggcgcc ggggggacct taaagcctct
1081 gccccccaag gagcccttcc cagacagccg ccggcaccca ccgctccgtg ggacgatccc
1141 cgaagctcta gagctttatt gcggtagttt atcacagtta aattgctaac gcagtcagtg
1201 cttctgacac aacagtctcg aacttaagct gcagaagttg gtcgtgaggc actgggcagg
1261 taagtatcaa ggttacaaga caggtttaag gagaccaata gaaactgggc ttgtcgagac
1321 agagaagact cttgcgtttc tgataggcac ctattggtct tactgacatc cactttgcct
1381 ttctctccac aggtgtccac tcccagttca attacagctc ttaaggctag agtacttaat
1441 acgactcact ataggctagc atggtgccca agaagaagag gaaagtctcc aacctgctga
1501 ctgtgcacca aaacctgcct gccctccctg tggatgccac ctctgatgaa gtcaggaaga
1561 acctgatgga catgttcagg gacaggcagg ccttctctga acacacctgg aagatgctcc
1621 tgtctgtgtg cagatcctgg gctgcctggt gcaagctgaa caacaggaaa tggttccctg
1681 ctgaacctga ggatgtgagg gactacctcc tgtacctgca agccagaggc ctggctgtga
1741 agaccatcca acagcacctg ggccagctca acatgctgca caggagatct ggcctgcctc
1801 gcccttctga ctccaatgct gtgtccctgg tgatgaggag aatcagaaag gagaatgtgg
1861 atgctgggga gagagccaag caggccctgg cctttgaacg cactgacttt gaccaagtca
1921 gatccctgat ggagaactct gacagatgcc aggacatcag gaacctggcc ttcctgggca
1981 ttgcctacaa caccctgctg cgcattgccg aaattgccag aatcagagtg aaggacatct
2041 cccgcaccga tggtgggaga atgctgatcc acattggcag gaccaagacc ctggtgtcca
2101 cagctggtgt ggagaaggcc ctgtccctgg gggttaccaa gctggtggag agatggatct
2161 ctgtgtctgg tgtggctgat gaccccaaca actacctgtt ctgccgggtc agaaagaatg
2221 gtgtggctgc cccttctgcc acctcccaac tgtccacccg ggccctggaa gggatctttg
2281 aggccaccca ccgcctgatc tatggtgcca aggatgactc tgggcagaga tacctggcct
2341 ggtctggcca ctctgccaga gtgggtgctg ccagggacat ggccagggct ggtgtgtcca
2401 tccctgaaat catgcaggct ggtggctgga ccaatgtgaa cattgtgatg aactacatca
2461 gaaacctgga ctctgagact ggggccatgg tgaggctgct cgaggatggg gactgaaagc
2521 ttatcgatac cgagcgctgc tcgagagatc tacgggtggc atccctgtga cccctcccca
2581 gtgcctctcc tggccctgga agttgccact ccagtgccca ccagccttgt cctaataaaa
2641 ttaagttgca tcattttgtc tgactaggtg tccttctata atattatggg gtggaggggg
2701 gtggtatgga gcaaggggca agttgggaag acaacctgta gggcctgcgg ggtctattgg
2761 gaaccaagct ggagtgcagt ggcacaatct tggctcactg caatctccgc ctcctgggtt
2821 caagcgattc tcctgcctca gcctcccgag ttgttgggat tccaggcatg catgaccagg
2881 ctcagctaat ttttgttttt ttggtagaga cggggtttca ccatattggc caggctggtc
2941 tccaactcct aatctcaggt gatctaccca ccttggcctc ccaaattgct gggattacag
3001 gcgtgaacca ctgctccctt ccctgtcctt ctgattttgt aggtaaccac gtgcggaccg
3061 agcggccgca ggaaccccta gtgatggagt tggccactcc ctctctgcgc gctcgctcgc
3121 tcactgaggc cgggcgacca aaggtcgccc gacgcccggg ctttgcccgg gcggcctcag
3181 tgagcgagcg agcgcgcagc tgcctgcagg ggcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc
3241 atctgtgcgg tatttcacac cgcatacgtc aaagcaacca tagtacgcgc cctgtagcgg
3301 cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg accgctacac ttgccagcgc
3361 cttagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc gccacgttcg ccggctttcc
3421 ccgtcaagct ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga tttagtgctt tacggcacct
3481 cgaccccaaa aaacttgatt tgggtgatgg ttcacgtagt gggccatcgc cctgatagac
3541 ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat agtggactct tgttccaaac
3601 tggaacaaca ctcaactcta tctcgggcta ttcttttgat ttataaggga ttttgccgat
3661 ttcggtctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa tttaacgcga attttaacaa
3721 aatattaacg tttacaattt tatggtgcac tctcagtaca atctgctctg atgccgcata
3781 gttaagccag ccccgacacc cgccaacacc cgctgacgcg ccctgacggg cttgtctgct
3841 cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac cgtctccggg agctgcatgt gtcagaggtt
3901 ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcgagacg aaagggcctc gtgatacgcc tatttttata
3961 ggttaatgtc atgataataa tggtttctta gacgtcaggt ggcacttttc ggggaaatgt
4021 gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc cgctcatgag
4081 acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtatga gtattcaaca
4141 tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc cttcctgttt ttgctcaccc
4201 agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg ggtgcacgag tgggttacat
4261 cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag aacgttttcc
4321 aatgatgagc acttttaaag ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgta ttgacgccgg
4381 gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat gacttggttg agtactcacc
4441 agtcacagaa aagcatctta cggatggcat gacagtaaga gaattatgca gtgctgccat
4501 aaccatgagt gataacactg cggccaactt acttctgaca acgatcggag gaccgaagga
4561 gctaaccgct tttttgcaca acatggggga tcatgtaact cgccttgatc gttgggaacc
4621 ggagctgaat gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc acgatgcctg tagcaatggc
4681 aacaacgttg cgcaaactat taactggcga actacttact ctagcttccc ggcaacaatt
4741 aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt ctgcgctcgg cccttccggc
4801 tggctggttt attgctgata aatctggagc cggtgagcgt gggtctcgcg gtatcattgc
4861 agcactgggg ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt atctacacga cggggagtca
4921 ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat cgctgagata ggtgcctcac tgattaagca
4981 ttggtaactg tcagaccaag tttactcata tatactttag attgatttaa aacttcattt
5041 ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct ttttgataat ctcatgacca aaatccctta
5101 acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg
5161 agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc
5221 ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag
5281 cagagcgcag ataccaaata ctgttcttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa
5341 gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc
5401 cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac cggataaggc
5461 gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta
5521 caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag
5581 aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct
5641 tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga
5701 gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc
5761 ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgtcct gcaggcagct
5821 gcgcgctcgc tcgctcactg aggccgcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct
5881 cagtgagcga gcgagcgcgc agagagggag tggccaactc catcactagg ggttcctgcg
5941 gccgcacgcg ccggtacc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：AAV-U6gRNA1-U6gRNA2-TnT-Cre同源重组质粒
别称: AAV-U6gRNA1-U6gRNA2-TnT-Cre
| 启动子: | U6 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞,腺相关病毒 |
|---|---|
| 载体用途： | 基因敲除 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | Cre,CRISPR |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
AAV-U6gRNA1-U6gRNA2-TnT-Cre是一个哺乳细胞腺相关病毒Cre和2×gRNA表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5958 bp ds-DNA circular SYN 26-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
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immunoglobulin heavy chain genes"
promoter 1437..1455
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 1467..1487
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40) large T antigen"
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serotype 2"
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EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
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replication"
ORIGIN
1 gagggcctat ttcccatgat tccttcatat ttgcatatac gatacaaggc tgttagagag
61 ataattggaa ttaatttgac tgtaaacaca aagatattag tacaaaatac gtgacgtaga
121 aagtaataat ttcttgggta gtttgcagtt ttaaaattat gttttaaaat ggactatcat
181 atgcttaccg taacttgaaa gtatttcgat ttcttggctt tatatatctt gtggaaagga
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301 ttaaaataag gctagtccgt tatcaacttg aaaaagtggc accgagtcgg tgctttttta
361 cgcgtgaggg cctatttccc atgattcctt catatttgca tatacgatac aaggctgtta
421 gagagataat tggaattaat ttgactgtaa acacaaagat attagtacaa aatacgtgac
481 gtagaaagta ataatttctt gggtagtttg cagttttaaa attatgtttt aaaatggact
541 atcatatgct taccgtaact tgaaagtatt tcgatttctt ggctttatat atcttgtgga
601 aaggacgaaa caccggaaga gcgagctctt ctgttttaga gctagaaata gcaagttaaa
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1861 atgctgggga gagagccaag caggccctgg cctttgaacg cactgacttt gaccaagtca
1921 gatccctgat ggagaactct gacagatgcc aggacatcag gaacctggcc ttcctgggca
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2041 cccgcaccga tggtgggaga atgctgatcc acattggcag gaccaagacc ctggtgtcca
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2161 ctgtgtctgg tgtggctgat gaccccaaca actacctgtt ctgccgggtc agaaagaatg
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2461 gaaacctgga ctctgagact ggggccatgg tgaggctgct cgaggatggg gactgaaagc
2521 ttatcgatac cgagcgctgc tcgagagatc tacgggtggc atccctgtga cccctcccca
2581 gtgcctctcc tggccctgga agttgccact ccagtgccca ccagccttgt cctaataaaa
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2941 tccaactcct aatctcaggt gatctaccca ccttggcctc ccaaattgct gggattacag
3001 gcgtgaacca ctgctccctt ccctgtcctt ctgattttgt aggtaaccac gtgcggaccg
3061 agcggccgca ggaaccccta gtgatggagt tggccactcc ctctctgcgc gctcgctcgc
3121 tcactgaggc cgggcgacca aaggtcgccc gacgcccggg ctttgcccgg gcggcctcag
3181 tgagcgagcg agcgcgcagc tgcctgcagg ggcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc
3241 atctgtgcgg tatttcacac cgcatacgtc aaagcaacca tagtacgcgc cctgtagcgg
3301 cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg accgctacac ttgccagcgc
3361 cttagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc gccacgttcg ccggctttcc
3421 ccgtcaagct ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga tttagtgctt tacggcacct
3481 cgaccccaaa aaacttgatt tgggtgatgg ttcacgtagt gggccatcgc cctgatagac
3541 ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat agtggactct tgttccaaac
3601 tggaacaaca ctcaactcta tctcgggcta ttcttttgat ttataaggga ttttgccgat
3661 ttcggtctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa tttaacgcga attttaacaa
3721 aatattaacg tttacaattt tatggtgcac tctcagtaca atctgctctg atgccgcata
3781 gttaagccag ccccgacacc cgccaacacc cgctgacgcg ccctgacggg cttgtctgct
3841 cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac cgtctccggg agctgcatgt gtcagaggtt
3901 ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcgagacg aaagggcctc gtgatacgcc tatttttata
3961 ggttaatgtc atgataataa tggtttctta gacgtcaggt ggcacttttc ggggaaatgt
4021 gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc cgctcatgag
4081 acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtatga gtattcaaca
4141 tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc cttcctgttt ttgctcaccc
4201 agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg ggtgcacgag tgggttacat
4261 cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag aacgttttcc
4321 aatgatgagc acttttaaag ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgta ttgacgccgg
4381 gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat gacttggttg agtactcacc
4441 agtcacagaa aagcatctta cggatggcat gacagtaaga gaattatgca gtgctgccat
4501 aaccatgagt gataacactg cggccaactt acttctgaca acgatcggag gaccgaagga
4561 gctaaccgct tttttgcaca acatggggga tcatgtaact cgccttgatc gttgggaacc
4621 ggagctgaat gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc acgatgcctg tagcaatggc
4681 aacaacgttg cgcaaactat taactggcga actacttact ctagcttccc ggcaacaatt
4741 aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt ctgcgctcgg cccttccggc
4801 tggctggttt attgctgata aatctggagc cggtgagcgt gggtctcgcg gtatcattgc
4861 agcactgggg ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt atctacacga cggggagtca
4921 ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat cgctgagata ggtgcctcac tgattaagca
4981 ttggtaactg tcagaccaag tttactcata tatactttag attgatttaa aacttcattt
5041 ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct ttttgataat ctcatgacca aaatccctta
5101 acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg
5161 agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc
5221 ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag
5281 cagagcgcag ataccaaata ctgttcttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa
5341 gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc
5401 cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac cggataaggc
5461 gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta
5521 caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag
5581 aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct
5641 tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga
5701 gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc
5761 ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgtcct gcaggcagct
5821 gcgcgctcgc tcgctcactg aggccgcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct
5881 cagtgagcga gcgagcgcgc agagagggag tggccaactc catcactagg ggttcctgcg
5941 gccgcacgcg ccggtacc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3398/pCMV-SPORT6-NLRP3(1同义突变）人源基因质粒 |
| P3399/pCMV-SPORT6-SLC25A3人源基因质粒 |
| P3400/pCMV-SPORT6-NDUFA10（2同义突变）人源基因质粒 |
| P3401/pCMV-SPORT6-SEPHS1(1同义突变2点突变）人源基因质粒 |
| P3402/pCMV-SPORT6-STRAP人源基因质粒 |
| P3403/pCMV-SPORT6-PCLO人源基因质粒 |
| P3404/pCMV-SPORT6-TRA2B人源基因质粒 |
| P3405/pCMV-SPORT6-QRICH1人源基因质粒 |
| P3406/pCMV-SPORT6-TTC1（1点突变）人源基因质粒 |
| P3407/pCMV-SPORT6-AMD1人源基因质粒 |
| P3408/pCMV-SPORT6-RPLP1（2同义突变）人源基因质粒 |
| P3409/pCMV-SPORT6-HNRNPU人源基因质粒 |
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