- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P0732
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid:#11739
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：STOP-eGFP-ROSA26TV同源重组质粒
别称: Plasmid:#11739
| 原核抗性: | Amp |
|---|---|
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 基因敲除 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
STOP-eGFP-ROSA26TV质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4478/pCMV-SPORT6-EFNA3人源基因质粒 |
| P4479/pCMV-SPORT6-CHCHD1人源基因质粒 |
| P4480/pCMV-SPORT6-ARL11人源基因质粒 |
| P4481/pCMV-SPORT6-IFI27人源基因质粒 |
| P4482/pCMV-SPORT6-RTP4人源基因质粒 |
| P4483/pCMV-SPORT6-DCUN1D1人源基因质粒 |
| P4484/pCMV-SPORT6-PDZK1IP1人源基因质粒 |
| P4485/pCMV-SPORT6-RPL32人源基因质粒 |
| P4486/pCMV-SPORT6-DNAJC25-GNG10人源基因质粒 |
| P4487/pCMV-SPORT6-TMED5（1点突变）人源基因质粒 |
| P4488/pCMV-SPORT6-PLBD1人源基因质粒 |
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文献和实验pEGFP-N1质粒图谱及信息 多克隆位点区 Restriction Map and Multiple Cloning Site of pEGFP-N1. (Unique restriction sites are in color or bold.) The Not I site follows the EGFP stop codon. The Xba I site (*) is methylated in the DNA provided by CLONTECH
，经过7~10天即可得到携带有目的基因的重组腺病毒。这种方法的优点是：①酶切与连接步骤少；②正确的重组机率高，可达90%以上；③无需反复空斑纯化。 3. 细菌内同源重组（AdEasyTM System） 这种方法的基本策略是：在大肠杆菌内通过同源重组的方法构建重组腺病毒质粒载体，经酶切线性化后再转染腺病毒包装细胞系（293、911以及PERC6等），从而得到腺病毒感染颗粒。与哺乳动物细胞比较，在大肠杆菌内进行挑克隆、鉴定等操作无疑要便利许多，因此这种方法
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