pcDNA3.1(-) FLIPQTV3.0 8m谷氨酰胺传

基本信息
名称：pcDNA3.1(-) FLIPQTV3.0 8m谷氨酰胺传感器质粒
别称: Plasmid#63732
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
 pcDNA3.1(-) FLIPQTV3.0 8m质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                7528 bp ds-DNA     circular SYN 14-JAN-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7528
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        235..614
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        615..818
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        863..881
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     CDS             1059..1766
                     /codon_start=1
                     /product="monomeric teal (cyan) fluorescent protein (Ai et 
                     al., 2006)"
                     /label=mTFP1
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MVSKGEETTMGVIKPDMKIKLKMEGNVNGHAFVIEGEGEGKPYDG
                     TNTINLEVKEGAPLPFSYDILTTAFAYGNRAFTKYPDDIPNYFKQSFPEGYSWERTMTF
                     EDKGIVKVKSDISMEEDSFIYEIHLKGENFPPNGPVMQKKTTGWDASTERMYVRDGVLK
                     GDVKHKLLLEGGGHHRVDFKTIYRAKKAVKLPDYHFVDHRIEILNHDKDYNKVTVYESA
                     VARNSTDGMDELYK"
     CDS             2841..3092
                     /codon_start=1
                     /product="C-terminal fragment of mVenus for use in 
                     bimolecular fluorescence complementation (BiFC) (Kodama and
                     Hu, 2010)"
                     /label=VC155
                     /translation="DKQKNGIKANFKIRHNIEDGGVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNH
                     YLSYQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYK"
     polyA_signal    3128..3352
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      3398..3826
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        3840..4169
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      4020..4155
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             4236..5030
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=Neo
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    5204..5325
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(5776..6361)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(6532..7392)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(7393..7497)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
       61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
      121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
      181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
      241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
      301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
      361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
      421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
      481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
      541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
      601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
      661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
      721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
      781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
      841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
      901 gtttaaacgg gccctctaga ctcgagcggc cgccactgtg ctggatatct gcagaattcc
      961 accacactgg actagtggat ccactcgaga tggcaggctc gaaattagtt gtcgcgacgg
     1021 ataccgcctt cgttccgttc gaatttaaac aggccccaat ggtgagcaag ggcgaggaga
     1081 ccacaatggg cgtaatcaag cccgacatga agatcaagct gaagatggag ggcaacgtga
     1141 atggccacgc cttcgtgatc gagggcgagg gcgagggcaa gccctacgac ggcaccaaca
     1201 ccatcaacct ggaggtgaag gagggagccc ccctgccctt ctcctacgac attctgacca
     1261 ccgcgttcgc ctacggcaac agggccttca ccaagtaccc cgacgacatc cccaactact
     1321 tcaagcagtc cttccccgag ggctactctt gggagcgcac catgaccttc gaggacaagg
     1381 gcatcgtgaa ggtgaagtcc gacatctcca tggaggagga ctccttcatc tacgagatac
     1441 acctcaaggg cgagaacttc ccccccaacg gccccgtgat gcagaagaag accaccggct
     1501 gggacgcctc caccgagagg atgtacgtgc gcgacggcgt gctgaagggc gacgttaagc
     1561 acaagctgct gctggagggc ggcggccacc accgcgttga cttcaagacc atctacaggg
     1621 ccaagaaggc ggtgaagctg cccgactatc actttgtgga ccaccgcatc gagatcctga
     1681 accacgacaa ggactacaac aaggtgaccg tttacgagag cgccgtggcc cgcaactcca
     1741 ccgacggcat ggacgagctg tacaaggtga gcgccaaata tgtgggcttt gacgtcgatc
     1801 tgtgggctgc catcgctaaa gagctgaagc tggattacga actgaagccg atggatttca
     1861 gtgggatcat tccggcactg caaaccaaaa acgtcgatct ggcgctggcg ggcattacca
     1921 tcaccgacga gatgaaaaaa gcgatcgatt tctctgacgg ctacgccaaa agcggcctgt
     1981 tagtgatggt gaaagctaac aataacgatg tgaaaagcgt gaaagatctc gacgggaaag
     2041 tggttgctgt gaagagcggt actggctccg ttgattacgc gaaagcaaac atcaaaacta
     2101 aagatctgcg tcagttcccg aacatcgata acgcctatat ggaactgggc accaaccgcg
     2161 cagacgccgt tctgcacgat acgccaaaca ttctgtactt catcaaaacc gccggtaacg
     2221 gtcagttcaa agcggtaggt gactctctgg aagcgcagca atacggtatt gcgttcccga
     2281 aaggtagcga cgagctgcgt gacaaagtca acggcgcgtt gaaaaccctg cgcgagaacg
     2341 gaacttacaa cgaaatctac aaaaaatggt tcggtactga accgaaaggc gctgagctgt
     2401 tcaccggggt ggtgcccatc ctggtcgagc tggacggcga cgtaaacggc cacaagttca
     2461 gcgtgtccgg cgagggcgag ggcgatgcca cctacggcaa gctgaccctg aagctgatct
     2521 gcaccaccgg caagctgccc gtgccctggc ccaccctcgt gaccaccctg ggctacggcc
     2581 tgcagtgctt cgcccgctac cccgaccaca tgaagcagca cgacttcttc aagtccgcca
     2641 tgcccgaagg ctacgtccag gagcgcacca tcttcttcaa ggacgacggc aactacaaga
     2701 cccgcgccga ggtgaagttc gagggcgaca ccctggtgaa ccgcatcgag ctgaagggca
     2761 tcgacttcaa ggaggacggc aacatcctgg ggcacaagct ggagtacaac tacaacagcc
     2821 acaacgtcta tatcaccgcc gacaagcaga agaacggcat caaggccaac ttcaagatcc
     2881 gccacaacat cgaggacggc ggcgtgcagc tcgccgacca ctaccagcag aacaccccca
     2941 tcggcgacgg ccccgtgctg ctgcccgaca atcactacct gagctaccag tccgccctga
     3001 gcaaagaccc caacgagaag cgcgatcaca tggtcctgct ggagttcgtg accgccgccg
     3061 ggatcactct cggcatggac gagctgtaca agtaaaagct taagtttaaa ccgctgatca
     3121 gcctcgactg tgccttctag ttgccagcca tctgttgttt gcccctcccc cgtgccttcc
     3181 ttgaccctgg aaggtgccac tcccactgtc ctttcctaat aaaatgagga aattgcatcg
     3241 cattgtctga gtaggtgtca ttctattctg gggggtgggg tggggcagga cagcaagggg
     3301 gaggattggg aagacaatag caggcatgct ggggatgcgg tgggctctat ggcttctgag
     3361 gcggaaagaa ccagctgggg ctctaggggg tatccccacg cgccctgtag cggcgcatta
     3421 agcgcggcgg gtgtggtggt tacgcgcagc gtgaccgcta cacttgccag cgccctagcg
     3481 cccgctcctt tcgctttctt cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt tccccgtcaa
     3541 gctctaaatc gggggctccc tttagggttc cgatttagtg ctttacggca cctcgacccc
     3601 aaaaaacttg attagggtga tggttcacgt agtgggccat cgccctgata gacggttttt
     3661 cgccctttga cgttggagtc cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca aactggaaca
     3721 acactcaacc ctatctcggt ctattctttt gatttataag ggattttgcc gatttcggcc
     3781 tattggttaa aaaatgagct gatttaacaa aaatttaacg cgaattaatt ctgtggaatg
     3841 tgtgtcagtt agggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca
     3901 tgcatctcaa ttagtcagca accaggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa
     3961 gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca
     4021 tcccgcccct aactccgccc agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt
     4081 ttatttatgc agaggccgag gccgcctctg cctctgagct attccagaag tagtgaggag
     4141 gcttttttgg aggcctaggc ttttgcaaaa agctcccggg agcttgtata tccattttcg
     4201 gatctgatca agagacagga tgaggatcgt ttcgcatgat tgaacaagat ggattgcacg
     4261 caggttctcc ggccgcttgg gtggagaggc tattcggcta tgactgggca caacagacaa
     4321 tcggctgctc tgatgccgcc gtgttccggc tgtcagcgca ggggcgcccg gttctttttg
     4381 tcaagaccga cctgtccggt gccctgaatg aactgcagga cgaggcagcg cggctatcgt
     4441 ggctggccac gacgggcgtt ccttgcgcag ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa
     4501 gggactggct gctattgggc gaagtgccgg ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc
     4561 ctgccgagaa agtatccatc atggctgatg caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg
     4621 ctacctgccc attcgaccac caagcgaaac atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg
     4681 aagccggtct tgtcgatcag gatgatctgg acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg
     4741 aactgttcgc caggctcaag gcgcgcatgc ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg
     4801 gcgatgcctg cttgccgaat atcatggtgg aaaatggccg cttttctgga ttcatcgact
     4861 gtggccggct gggtgtggcg gaccgctatc aggacatagc gttggctacc cgtgatattg
     4921 ctgaagagct tggcggcgaa tgggctgacc gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc
     4981 ccgattcgca gcgcatcgcc ttctatcgcc ttcttgacga gttcttctga gcgggactct
     5041 ggggttcgaa atgaccgacc aagcgacgcc caacctgcca tcacgagatt tcgattccac
     5101 cgccgccttc tatgaaaggt tgggcttcgg aatcgttttc cgggacgccg gctggatgat
     5161 cctccagcgc ggggatctca tgctggagtt cttcgcccac cccaacttgt ttattgcagc
     5221 ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag catttttttc
     5281 actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg tctgtatacc
     5341 gtcgacctct agctagagct tggcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg
     5401 ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg
     5461 tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc
     5521 gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt
     5581 gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct
     5641 gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga
     5701 taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc
     5761 cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg
     5821 ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg
     5881 aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt
     5941 tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt
     6001 gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg
     6061 cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact
     6121 ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt
     6181 cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct
     6241 gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac
     6301 cgctggtagc ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca
     6361 agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta
     6421 agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa
     6481 atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg
     6541 cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg
     6601 actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc
     6661 aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa accagccagc
     6721 cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc agtctattaa
     6781 ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca acgttgttgc
     6841 cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat tcagctccgg
     6901 ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag cggttagctc
     6961 cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac tcatggttat
     7021 ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt ctgtgactgg
     7081 tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt gctcttgccc
     7141 ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc tcatcattgg
     7201 aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat ccagttcgat
     7261 gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca gcgtttctgg
     7321 gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga cacggaaatg
     7381 ttgaatactc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct
     7441 catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac
     7501 atttccccga aaagtgccac ctgacgtc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P0778/pEGFP-hsp27 wt FL人源基因质粒

P0790/pCMV-HA-MDM2人源基因质粒

P1902/pCMV-HA-Parkin人源基因质粒

P0806/pCDH-CMV-CAMK2G人源基因质粒

P0848/pTT3-CD109-bio-His人源基因质粒

P0849/p3×FLAG-DDX6(有突变)人源基因质粒

P0850/pEGFP-C3-DDX6人源基因质粒

P0851/pCMV-FLAG-DDX21人源基因质粒

P0852/pCMV-CTSD人源基因质粒

P1056/pCDNA6-FLAG-CBX7人源基因质粒

P1057/pRK5-EGFP-Tau人源基因质粒