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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pSD1211-U6-shRNA
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pSD1211-U6-shRNA哺乳干扰质粒
别称: pSD1211-U6-shRNA
质粒属性
质粒简介
pSD1211-U6-shRNA哺乳干扰质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6377 bp ds-DNA circular SYN 21-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6377
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 192..495
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 496..699
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 744..1460
/codon_start=1
/product="Aequorea coerulescens GFP"
/label=AcGFP1
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MSKGAELFTGIVPILIELNGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLK
FICTTGKLPVPWPTLVTTLSYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYIQERTIFFEDDG
NYKSRAEVKFEGDTLVNRIELTGTDFKEDGNILGNKMEYNYNAHNVYIMTDKAKNGIKV
NFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMIYFG
FVTAAAITHGMDELYK"
polyA_signal 1475..1596
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin 1697..2125
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2139..2468
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 2535..3329
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=Neo
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3503..3624
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4075..4660)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4831..5691)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5692..5796)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 6211..74
/label=U6 promoter
/note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"
ORIGIN
1 aatggactat catatgctta ccgtaacttg aaagtatttc gatttcttgg gtttatatat
61 cttgtggaaa ggacgcggga tccgagctcg gtaccaagct taagtttaaa ccgctgatca
121 gcctcgactg tgccttctaa atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat
181 atggagttcc gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac
241 ccccgcccat tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc
301 cattgacgtc aatgggtgga gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg
361 tatcatatgc caagtacgcc ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat
421 tatgcccagt acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc
481 atcgctatta ccatggtgat gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt
541 gactcacggg gatttccaag tctccacccc attgacgtca atgggagttt gttttggcac
601 caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac gcaaatgggc
661 ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctg gtttagtgaa ccgtcagatc
721 cgctagcgct accggtcgcc accatgagca agggcgccga gctgttcacc ggcatcgtgc
781 ccatcctgat cgagctgaat ggcgatgtga atggccacaa gttcagcgtg agcggcgagg
841 gcgagggcga tgccacctac ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc
901 tgcctgtgcc ctggcccacc ctggtgacca ccctgagcta cggcgtgcag tgcttctcac
961 gctaccccga tcacatgaag cagcacgact tcttcaagag cgccatgcct gagggctaca
1021 tccaggagcg caccatcttc ttcgaggatg acggcaacta caagtcgcgc gccgaggtga
1081 agttcgaggg cgataccctg gtgaatcgca tcgagctgac cggcaccgat ttcaaggagg
1141 atggcaacat cctgggcaat aagatggagt acaactacaa cgcccacaat gtgtacatca
1201 tgaccgacaa ggccaagaat ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg
1261 atggcagcgt gcagctggcc gaccactacc agcagaatac ccccatcggc gatggccctg
1321 tgctgctgcc cgataaccac tacctgtcca cccagagcgc cctgtccaag gaccccaacg
1381 agaagcgcga tcacatgatc tacttcggct tcgtgaccgc cgccgccatc acccacggca
1441 tggatgagct gtacaagtga ggactagata actgaacttg tttattgcag cttataatgg
1501 ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc
1561 tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttatcat gtctgtggga agacaatagc
1621 aggcatgctg gggatgcggt gggctctatg gcttctgagg cggaaagaac cagctggggc
1681 tctagggggt atccccacgc gccctgtagc ggcgcattaa gcgcggcggg tgtggtggtt
1741 acgcgcagcg tgaccgctac acttgccagc gccctagcgc ccgctccttt cgctttcttc
1801 ccttcctttc tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag ctctaaatcg ggggctccct
1861 ttagggttcc gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca aaaaacttga ttagggtgat
1921 ggttcacgta gtgggccatc gccctgatag acggtttttc gccctttgac gttggagtcc
1981 acgttcttta atagtggact cttgttccaa actggaacaa cactcaaccc tatctcggtc
2041 tattcttttg atttataagg gattttgccg atttcggcct attggttaaa aaatgagctg
2101 atttaacaaa aatttaacgc gaattaattc tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa
2161 agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa
2221 ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca
2281 attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta actccgccca
2341 gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca gaggccgagg
2401 ccgcctctgc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct
2461 tttgcaaaaa gctcccggga gcttgtatat ccattttcgg atctgatcaa gagacaggat
2521 gaggatcgtt tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc aggttctccg gccgcttggg
2581 tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat cggctgctct gatgccgccg
2641 tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt caagaccgac ctgtccggtg
2701 ccctgaatga actgcaggac gaggcagcgc ggctatcgtg gctggccacg acgggcgttc
2761 cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag ggactggctg ctattgggcg
2821 aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc tgccgagaaa gtatccatca
2881 tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc tacctgccca ttcgaccacc
2941 aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga agccggtctt gtcgatcagg
3001 atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga actgttcgcc aggctcaagg
3061 cgcgcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg cgatgcctgc ttgccgaata
3121 tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg tggccggctg ggtgtggcgg
3181 accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc tgaagagctt ggcggcgaat
3241 gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc cgattcgcag cgcatcgcct
3301 tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg gggttcgaaa tgaccgacca
3361 agcgacgccc aacctgccat cacgagattt cgattccacc gccgccttct atgaaaggtt
3421 gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc ctccagcgcg gggatctcat
3481 gctggagttc ttcgcccacc ccaacttgtt tattgcagct tataatggtt acaaataaag
3541 caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca ctgcattcta gttgtggttt
3601 gtccaaactc atcaatgtat cttatcatgt ctgtataccg tcgacctcta gctagagctt
3661 ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca
3721 caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact
3781 cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct
3841 gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc
3901 ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca
3961 ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg
4021 agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca
4081 taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa
4141 cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc
4201 tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc
4261 gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct
4321 gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg
4381 tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag
4441 gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta
4501 cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg
4561 aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtttttttgt
4621 ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc
4681 tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt
4741 atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta
4801 aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat
4861 ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac
4921 tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg
4981 ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag
5041 tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt
5101 aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt
5161 gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt
5221 tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt
5281 cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct
5341 tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt
5401 ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac
5461 cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa
5521 actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa
5581 ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca
5641 aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct
5701 ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga
5761 atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc
5821 tgacgtcgac ggatcgggag atctcccgat cccctatggt gcactctcag tacaatctgc
5881 tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt gtgtgttgga ggtcgctgag
5941 tagtgcgcga gcaaaattta agctacaaca aggcaaggct tgaccgacaa ttgcatgaag
6001 aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg tacgggccag atatacgcgt
6061 ttaatacgac tcactatagg gagagagaga gaattaccct cactaaaggg aggagaagca
6121 tgaattcccc agtggaaaga cgcgcaggca aaacgcacca cgtgacggag cgtgaccgcg
6181 cgccgagcgc gcgccaaggt cgggcaggaa gagggcctat ttcccatgat tccttcatat
6241 ttgcatatac gatacaaggc tgttagagag ataattagaa ttaatttgac tgtaaacaca
6301 aagatattag tacaaaatac gtgacgtaga aagtaataat ttcttgggta gtttgcagtt
6361 ttaaaattat gttttaa
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pSD1211-U6-shRNA哺乳干扰质粒
别称: pSD1211-U6-shRNA
| 原核抗性: | Amp |
|---|---|
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 干扰沉默 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | shRNA |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pSD1211-U6-shRNA哺乳干扰质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6377 bp ds-DNA circular SYN 21-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6377
/organism="synthetic DNA construct"
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enhancer 192..495
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
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promoter"
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indicates direction of (+) strand synthesis"
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replication"
CDS complement(4831..5691)
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related antibiotics"
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LIKHW"
promoter complement(5692..5796)
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promoter 6211..74
/label=U6 promoter
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ORIGIN
1 aatggactat catatgctta ccgtaacttg aaagtatttc gatttcttgg gtttatatat
61 cttgtggaaa ggacgcggga tccgagctcg gtaccaagct taagtttaaa ccgctgatca
121 gcctcgactg tgccttctaa atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat
181 atggagttcc gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac
241 ccccgcccat tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc
301 cattgacgtc aatgggtgga gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg
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421 tatgcccagt acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc
481 atcgctatta ccatggtgat gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt
541 gactcacggg gatttccaag tctccacccc attgacgtca atgggagttt gttttggcac
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1501 ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc
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1861 ttagggttcc gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca aaaaacttga ttagggtgat
1921 ggttcacgta gtgggccatc gccctgatag acggtttttc gccctttgac gttggagtcc
1981 acgttcttta atagtggact cttgttccaa actggaacaa cactcaaccc tatctcggtc
2041 tattcttttg atttataagg gattttgccg atttcggcct attggttaaa aaatgagctg
2101 atttaacaaa aatttaacgc gaattaattc tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa
2161 agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa
2221 ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca
2281 attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta actccgccca
2341 gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca gaggccgagg
2401 ccgcctctgc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct
2461 tttgcaaaaa gctcccggga gcttgtatat ccattttcgg atctgatcaa gagacaggat
2521 gaggatcgtt tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc aggttctccg gccgcttggg
2581 tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat cggctgctct gatgccgccg
2641 tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt caagaccgac ctgtccggtg
2701 ccctgaatga actgcaggac gaggcagcgc ggctatcgtg gctggccacg acgggcgttc
2761 cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag ggactggctg ctattgggcg
2821 aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc tgccgagaaa gtatccatca
2881 tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc tacctgccca ttcgaccacc
2941 aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga agccggtctt gtcgatcagg
3001 atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga actgttcgcc aggctcaagg
3061 cgcgcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg cgatgcctgc ttgccgaata
3121 tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg tggccggctg ggtgtggcgg
3181 accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc tgaagagctt ggcggcgaat
3241 gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc cgattcgcag cgcatcgcct
3301 tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg gggttcgaaa tgaccgacca
3361 agcgacgccc aacctgccat cacgagattt cgattccacc gccgccttct atgaaaggtt
3421 gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc ctccagcgcg gggatctcat
3481 gctggagttc ttcgcccacc ccaacttgtt tattgcagct tataatggtt acaaataaag
3541 caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca ctgcattcta gttgtggttt
3601 gtccaaactc atcaatgtat cttatcatgt ctgtataccg tcgacctcta gctagagctt
3661 ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca
3721 caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact
3781 cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct
3841 gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc
3901 ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca
3961 ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg
4021 agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca
4081 taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa
4141 cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc
4201 tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc
4261 gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct
4321 gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg
4381 tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag
4441 gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta
4501 cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg
4561 aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtttttttgt
4621 ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc
4681 tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt
4741 atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta
4801 aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat
4861 ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac
4921 tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg
4981 ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag
5041 tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt
5101 aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt
5161 gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt
5221 tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt
5281 cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct
5341 tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt
5401 ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac
5461 cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa
5521 actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa
5581 ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca
5641 aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct
5701 ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga
5761 atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc
5821 tgacgtcgac ggatcgggag atctcccgat cccctatggt gcactctcag tacaatctgc
5881 tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt gtgtgttgga ggtcgctgag
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6001 aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg tacgggccag atatacgcgt
6061 ttaatacgac tcactatagg gagagagaga gaattaccct cactaaaggg aggagaagca
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6181 cgccgagcgc gcgccaaggt cgggcaggaa gagggcctat ttcccatgat tccttcatat
6241 ttgcatatac gatacaaggc tgttagagag ataattagaa ttaatttgac tgtaaacaca
6301 aagatattag tacaaaatac gtgacgtaga aagtaataat ttcttgggta gtttgcagtt
6361 ttaaaattat gttttaa
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4652/pCMV-SPORT6-ANKRA2人源基因质粒 |
| P4653/pCMV-SPORT6-HNF1B人源基因质粒 |
| P4654/pCMV-SPORT6-SLC39A3人源基因质粒 |
| P4655/pCMV-SPORT6-AKAP7人源基因质粒 |
| P4656/pCMV-SPORT6-MRPS11人源基因质粒 |
| P4657/pCMV-SPORT6-YIPF6人源基因质粒 |
| P4658/pCMV-SPORT6-TMOD3人源基因质粒 |
| P4659/pCMV-SPORT6-CXCL6人源基因质粒 |
| P4660/pCMV-SPORT6-C4orf18人源基因质粒 |
| P4661/pCMV-SPORT6-SMAD2人源基因质粒 |
| P4662/pCMV-SPORT6-SAV1人源基因质粒 |
| P4663/pCMV-SPORT6-API5人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
RNAi分析 ·更清晰的结果―避免非特异应激反应·更高的特异性―仅仅靶定目的基因·更大的稳定性―在血清中不会快速降解 BLOCK-iT™ U6 RNAi Entry Vector 在大部分哺乳动物细胞中瞬时siRNA表达 ·简单、快速地克隆shRNA序列－方便地筛选多个基因或者序列·成本低廉－使用两个ssDNA oligo·很容易转移U6框到其它载体－att
shRNA表达质粒多采用RNA聚合酶III启动子，如人源H1或鼠源U6启动子，pol III在哺乳动物细胞（绵羊是哺乳动物）内引导非编码小RNA的转录，转录产物无poly(A)尾，且在转录过程中遇到连续4-5个U时转录终止。此载体最后转录出的产物是经折叠形成的发夹状小RNA(shRNA)； shRNA 在细胞内被Dicer酶切割成3’端带有两个U突出的siRNA，进而启动RNAi，介导基因沉默。载体中的间隔序列为9个核苷酸时最为有效。 是可行的！ 高成胡君
polIII型启动子和终止子序列，RNAi靶序列克隆进入后将在哺乳动物细胞中形成shRNA。目的载体（destinationvector）Gateway®适合的目的载体（DEST）包含attR位点，可以与入门克隆进行重组，构建表达载体。BLOCK-iT™RNAi慢病毒和腺病毒DEST载体接受来自U6入门载体的RNAi框。此外，也有在原核、酵母、昆虫或者哺乳动物系统表达天然蛋白或者融合蛋白的DEST载体可供选择。LRClonase™便于attL和attR位点在LxRGateway®重组反应中进行重组的一种酶
pSD1211-U6-shRNA哺乳干扰质粒
￥100 - 1000
