pGL4.22[luc2CP/Puro]哺乳报告质粒

基本信息
名称：pGL4.22[luc2CP/Puro]哺乳报告质粒
别称: pGL4.22[luc2CP/Puro]

复制子:	pUC
原核抗性:	Amp
筛选标记:	Puro
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	启动子检测
基因种属：	空载体
基因类型：	Promoter
原核抗性：	Amp
真核抗性：	Puro
荧光蛋白：	fLuc

质粒简介
 pGL4.22[luc2CP/Puro]是一个哺乳细胞单荧光素酶报告质粒。
质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5583 bp ds-DNA     circular SYN 06-JAN-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5583
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     regulatory      94..103
                     /regulatory_class="other"
                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                     of translation (Kozak, 1987)"
     CDS             100..1749
                     /codon_start=1
                     /product="firefly luciferase"
                     /label=luciferase
                     /note="synthetic luc2 version of the luciferase gene"
                     /translation="MEDAKNIKKGPAPFYPLEDGTAGEQLHKAMKRYALVPGTIAFTDA
                     HIEVDITYAEYFEMSVRLAEAMKRYGLNTNHRIVVCSENSLQFFMPVLGALFIGVAVAP
                     ANDIYNERELLNSMGISQPTVVFVSKKGLQKILNVQKKLPIIQKIIIMDSKTDYQGFQS
                     MYTFVTSHLPPGFNEYDFVPESFDRDKTIALIMNSSGSTGLPKGVALPHRTACVRFSHA
                     RDPIFGNQIIPDTAILSVVPFHHGFGMFTTLGYLICGFRVVLMYRFEEELFLRSLQDYK
                     IQSALLVPTLFSFFAKSTLIDKYDLSNLHEIASGGAPLSKEVGEAVAKRFHLPGIRQGY
                     GLTETTSAILITPEGDDKPGAVGKVVPFFEAKVVDLDTGKTLGVNQRGELCVRGPMIMS
                     GYVNNPEATNALIDKDGWLHSGDIAYWDEDEHFFIVDRLKSLIKYKGYQVAPAELESIL
                     LQHPNIFDAGVAGLPDDDAGELPAAVVVLEHGKTMTEKEIVDYVASQVTTAKKLRGGVV
                     FVDEVPKGLTGKLDARKIREILIKAKKGGKIAV"
     CDS             1756..1803
                     /codon_start=1
                     /product="non-ORF yeast peptide conferring 
                     ubiquitin-dependent degradation"
                     /label=hCL1
                     /note="human codon-optimized"
                     /translation="ACKNWFSSLSHFVIHL"
     CDS             1807..1926
                     /codon_start=1
                     /product="PEST degradation sequence from mouse ornithine 
                     decarboxylase"
                     /label=hPEST
                     /note="human codon-optimized"
                     /translation="SHGFPPEVEEQAAGTLPMSCAQESGMDRHPAACASARINV"
     polyA_signal    1975..2096
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     promoter        2290..2647
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      2498..2633
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             2678..3277
                     /codon_start=1
                     /product="puromycin N-acetyltransferase"
                     /label=PuroR
                     /note="confers resistance to puromycin"
                     /translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
                     VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
                     AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
                     APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
     polyA_signal    3302..3350
                     /note="synthetic polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(3677..4265)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(4465..5325)
                     /codon_start=1
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     polyA_signal    5430..5478
                     /note="synthetic polyadenylation signal"
     misc_feature    5492..5583
                     /label=pause site
                     /note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from 
                     the human alpha-2 globin gene"
ORIGIN
        1 ggcctaactg gccggtacct gagctcgcta gcctcgagga tatcaagatc tggcctcggc
       61 ggccaagctt ggcaatccgg tactgttggt aaagccacca tggaagatgc caaaaacatt
      121 aagaagggcc cagcgccatt ctacccactc gaagacggga ccgccggcga gcagctgcac
      181 aaagccatga agcgctacgc cctggtgccc ggcaccatcg cctttaccga cgcacatatc
      241 gaggtggaca ttacctacgc cgagtacttc gagatgagcg ttcggctggc agaagctatg
      301 aagcgctatg ggctgaatac aaaccatcgg atcgtggtgt gcagcgagaa tagcttgcag
      361 ttcttcatgc ccgtgttggg tgccctgttc atcggtgtgg ctgtggcccc agctaacgac
      421 atctacaacg agcgcgagct gctgaacagc atgggcatca gccagcccac cgtcgtattc
      481 gtgagcaaga aagggctgca aaagatcctc aacgtgcaaa agaagctacc gatcatacaa
      541 aagatcatca tcatggatag caagaccgac taccagggct tccaaagcat gtacaccttc
      601 gtgacttccc atttgccacc cggcttcaac gagtacgact tcgtgcccga gagcttcgac
      661 cgggacaaaa ccatcgccct gatcatgaac agtagtggca gtaccggatt gcccaagggc
      721 gtagccctac cgcaccgcac cgcttgtgtc cgattcagtc atgcccgcga ccccatcttc
      781 ggcaaccaga tcatccccga caccgctatc ctcagcgtgg tgccatttca ccacggcttc
      841 ggcatgttca ccacgctggg ctacttgatc tgcggctttc gggtcgtgct catgtaccgc
      901 ttcgaggagg agctattctt gcgcagcttg caagactata agattcaatc tgccctgctg
      961 gtgcccacac tatttagctt cttcgctaag agcactctca tcgacaagta cgacctaagc
     1021 aacttgcacg agatcgccag cggcggggcg ccgctcagca aggaggtagg tgaggccgtg
     1081 gccaaacgct tccacctacc aggcatccgc cagggctacg gcctgacaga aacaaccagc
     1141 gccattctga tcacccccga aggggacgac aagcctggcg cagtaggcaa ggtggtgccc
     1201 ttcttcgagg ctaaggtggt ggacttggac accggtaaga cactgggtgt gaaccagcgc
     1261 ggcgagctgt gcgtccgtgg ccccatgatc atgagcggct acgttaacaa ccccgaggct
     1321 acaaacgctc tcatcgacaa ggacggctgg ctgcacagcg gcgacatcgc ctactgggac
     1381 gaggacgagc acttcttcat cgtggaccgg ctgaagagcc tgatcaaata caagggctac
     1441 caggtagccc cagccgaact ggagagcatc ctgctgcaac accccaacat cttcgacgcc
     1501 ggggtcgccg gcctgcccga cgacgatgcc ggcgagctgc ccgccgcagt cgtcgtgctg
     1561 gaacacggta aaaccatgac cgagaaggag atcgtggact atgtggccag ccaggttaca
     1621 accgccaaga agctgcgcgg tggtgttgtg ttcgtggacg aggtgcctaa aggactgacc
     1681 ggcaagttgg acgcccgcaa gatccgcgag attctcatta aggccaagaa gggcggcaag
     1741 atcgccgtga attctgcttg caagaactgg ttcagtagct taagccactt tgtgatccac
     1801 cttaacagcc acggcttccc tcccgaggtg gaggagcagg ccgccggcac cctgcccatg
     1861 agctgcgccc aggagagcgg catggataga caccctgctg cttgcgccag cgccaggatc
     1921 aacgtctaac tgcagtctag agtcggggcg gccggccgct tcgagcagac atgataagat
     1981 acattgatga gtttggacaa accacaacta gaatgcagtg aaaaaaatgc tttatttgtg
     2041 aaatttgtga tgctattgct ttatttgtaa ccattataag ctgcaataaa caagttaaca
     2101 acaacaattg cattcatttt atgtttcagg ttcaggggga ggtgtgggag gttttttaaa
     2161 gcaagtaaaa cctctacaaa tgtggtaaaa tcgataagga tccgtttgcg tattgggcgc
     2221 tcttccgctg atctgcgcag caccatggcc tgaaataacc tctgaaagag gaacttggtt
     2281 agctaccttc tgaggcggaa agaaccagct gtggaatgtg tgtcagttag ggtgtggaaa
     2341 gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac
     2401 caggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa
     2461 ttagtcagca accatagtcc cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag
     2521 ttccgcccat tctccgcccc atggctgact aatttttttt atttatgcag aggccgaggc
     2581 cgcctctgcc tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt
     2641 ttgcaaaaag ctcgattctt ctgacactag cgccaccatg accgagtaca agcctaccgt
     2701 gcgcctggcc actcgcgatg atgtgccccg cgccgtccgc actctggccg ccgctttcgc
     2761 cgactacccc gctacccggc acaccgtgga ccccgaccgg cacatcgagc gtgtgacaga
     2821 gttgcaggag ctgttcctga cccgcgtcgg gctggacatc ggcaaggtgt gggtagccga
     2881 cgacggcgcg gccgtggccg tgtggactac ccccgagagc gttgaggccg gcgccgtgtt
     2941 cgccgagatc ggcccccgaa tggccgagct gagcggcagc cgcctggccg cccagcagca
     3001 aatggagggc ctgcttgccc cccatcgtcc caaggagcct gcctggtttc tggccactgt
     3061 aggagtgagc cccgaccacc agggcaaggg cttgggcagc gccgtcgtgt tgcccggcgt
     3121 agaggccgcc gaacgcgccg gtgtgcccgc ctttctcgaa acaagcgcac caagaaacct
     3181 tccattctac gagcgcctgg gcttcaccgt gaccgccgat gtcgaggtgc ccgagggacc
     3241 taggacctgg tgtatgacac gaaaacctgg cgcctaatga tctagaaccg gtcatggccg
     3301 caataaaata tctttatttt cattacatct gtgtgttggt tttttgtgtg ttcgaactag
     3361 atgctgtcga ccgatgccct tgagagcctt caacccagtc agctccttcc ggtgggcgcg
     3421 gggcatgact atcgtcgccg cacttatgac tgtcttcttt atcatgcaac tcgtaggaca
     3481 ggtgccggca gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc
     3541 tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg
     3601 ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg
     3661 ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac
     3721 gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg
     3781 gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct
     3841 ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg
     3901 tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct
     3961 gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac
     4021 tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt
     4081 tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac agtatttggt atctgcgctc
     4141 tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca
     4201 ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat
     4261 ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac
     4321 gttaagggat tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt
     4381 aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta tatatgagta aacttggtct gacagcggcc
     4441 gcaaatgcta aaccactgca gtggttacca gtgcttgatc agtgaggcac cgatctcagc
     4501 gatctgccta tttcgttcgt ccatagtggc ctgactcccc gtcgtgtaga tcactacgat
     4561 tcgtgagggc ttaccatcag gccccagcgc agcaatgatg ccgcgagagc cgcgttcacc
     4621 ggcccccgat ttgtcagcaa tgaaccagcc agcagggagg gccgagcgaa gaagtggtcc
     4681 tgctactttg tccgcctcca tccagtctat gagctgctgt cgtgatgcta gagtaagaag
     4741 ttcgccagtg agtagtttcc gaagagttgt ggccattgct actggcatcg tggtatcacg
     4801 ctcgtcgttc ggtatggctt cgttcaactc tggttcccag cggtcaagcc gggtcacatg
     4861 atcacccata ttatgaagaa atgcagtcag ctccttaggg cctccgatcg ttgtcagaag
     4921 taagttggcc gcggtgttgt cgctcatggt aatggcagca ctacacaatt ctcttaccgt
     4981 catgccatcc gtaagatgct tttccgtgac cggcgagtac tcaaccaagt cgttttgtga
     5041 gtagtgtata cggcgaccaa gctgctcttg cccggcgtct atacgggaca acaccgcgcc
     5101 acatagcagt actttgaaag tgctcatcat cgggaatcgt tcttcggggc ggaaagactc
     5161 aaggatcttg ccgctattga gatccagttc gatatagccc actcttgcac ccagttgatc
     5221 ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc ggggtgtgca aaaacaggca agcaaaatgc
     5281 cgcaaagaag ggaatgagtg cgacacgaaa atgttggatg ctcatactcg tcctttttca
     5341 atattattga agcatttatc agggttacta gtacgtctct caaggataag taagtaatat
     5401 taaggtacgg gaggtattgg acaggccgca ataaaatatc tttattttca ttacatctgt
     5461 gtgttggttt tttgtgtgaa tcgatagtac taacatacgc tctccatcaa aacaaaacga
     5521 aacaaaacaa actagcaaaa taggctgtcc ccagtgcaag tgcaggtgcc agaacatttc
     5581 tct
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3447/pENTR223-DUSP7（298-1260bp）人源基因质粒

P3448/pENTR223-MRPL57（2点突变）人源基因质粒

P3449/pENTR223-SHISA5人源基因质粒

P3450/pENTR223-PAGE4人源基因质粒

P3451/pENTR223-EMC4人源基因质粒

P3452/pENTR223-PHF20L1人源基因质粒

P3453/pENTR223-NIPSNAP2人源基因质粒

P3454/pENTR223-MRPS5人源基因质粒

P3455/pENTR223-IL1A人源基因质粒

P3456/pENTR223-MS4A12（1同义突变）人源基因质粒

P3457/pENTR223-RNF32人源基因质粒

P3458/pENTR223-ZNF501（28-816bp）人源基因质粒