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- 详细信息
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- 技术资料
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-20
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2年
- 英文名：
pAcGFP1-1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pAcGFP1-1哺乳启动子检测质粒
别称: pAcGFP1-1
质粒属性
质粒简介
pAcGFP1-1质粒是 AcGFP的衍生物，来自Aequorea coerulescens。 AcGFP1已经优化了更亮的荧光。（激发最大值= 475nm;发射最大值= 505nm）AcGFP1基因的编码序列含有沉默碱基变化，其对应于人类密码子使用偏好。
pAcGFP1-1是一种无启动子载体，可用于监测插入到多克隆位点（MCS）中的不同启动子和启动子/增强子组合的转录。AcGFP1上游的序列已经转化为Kozak共有翻译起始位点（2），以增强真核细胞中的翻译效率。AcGFP1基因下游的SV40多聚腺苷酸信号直接适当处理AcGFP1 mRNA的3'末端。载体主链含有用于在表达SV40T抗原的哺乳动物细胞中复制的SV40来源，用于在大肠杆菌中繁殖的pUC起始点和用于单链DNA生产的f1起点。新霉素抗性盒（Neor）允许使用G418选择稳定转染的真核细胞。该盒由SV40早期启动子,Tn5的新霉素/卡那霉素抗性基因和来自单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV TK）基因的多聚腺苷酸化信号组成。盒上游的细菌启动子在大肠杆菌中表达卡那霉素抗性。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4150 bp ds-DNA circular SYN 18-10-2015
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4150)
AUTHORS admin
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-10-18 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4150
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 12..89
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
CDS 97..816
/codon_start=1
/product="Aequorea coerulescens GFP"
/note="AcGFP1"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGAELFTGIVPILIELNGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLSYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYIQERTIFFEDD
GNYKSRAEVKFEGDTLVNRIELTGTDFKEDGNILGNKMEYNYNAHNVYIMTDKAKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMIYF
GFVTAAAITHGMDELYK"
polyA_signal 938..1059
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(1066..1521)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1548..1652
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 1654..2011
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 1862..1997
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2046..2840
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
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GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3072..3119
/note="HSV TK poly(A) signal"
/note="herpesvirus thymidine kinase polyadenylation signal"
rep_origin 3448..4036
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattac tagcgctacc ggactcagat ctcgagctca agcttcgaat tctgcagtcg
61 acggtaccgc gggcccggga tccaccggtc gccaccatgg tgagcaaggg cgccgagctg
121 ttcaccggca tcgtgcccat cctgatcgag ctgaatggcg atgtgaatgg ccacaagttc
181 agcgtgagcg gcgagggcga gggcgatgcc acctacggca agctgaccct gaagttcatc
241 tgcaccaccg gcaagctgcc tgtgccctgg cccaccctgg tgaccaccct gagctacggc
301 gtgcagtgct tctcacgcta ccccgatcac atgaagcagc acgacttctt caagagcgcc
361 atgcctgagg gctacatcca ggagcgcacc atcttcttcg aggatgacgg caactacaag
421 tcgcgcgccg aggtgaagtt cgagggcgat accctggtga atcgcatcga gctgaccggc
481 accgatttca aggaggatgg caacatcctg ggcaataaga tggagtacaa ctacaacgcc
541 cacaatgtgt acatcatgac cgacaaggcc aagaatggca tcaaggtgaa cttcaagatc
601 cgccacaaca tcgaggatgg cagcgtgcag ctggccgacc actaccagca gaataccccc
661 atcggcgatg gccctgtgct gctgcccgat aaccactacc tgtccaccca gagcgccctg
721 tccaaggacc ccaacgagaa gcgcgatcac atgatctact tcggcttcgt gaccgccgcc
781 gccatcaccc acggcatgga tgagctgtac aagtgagcgg ccgcgactct agatcataat
841 cagccatacc acatttgtag aggttttact tgctttaaaa aacctcccac acctccccct
901 gaacctgaaa cataaaatga atgcaattgt tgttgttaac ttgtttattg cagcttataa
961 tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca
1021 ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttaa ggcgtaaatt gtaagcgtta
1081 atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg
1141 ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa aagaatagac cgagataggg ttgagtgttg
1201 ttccagtttg gaacaagagt ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa
1261 aaaccgtcta tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc accctaatca agttttttgg
1321 ggtcgaggtg ccgtaaagca ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga tttagagctt
1381 gacggggaaa gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg
1441 ctagggcgct ggcaagtgta gcggtcacgc tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta
1501 atgcgccgct acagggcgcg tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta
1561 tttgtttatt tttctaaata cattcaaata tgtatccgct catgagacaa taaccctgat
1621 aaatgcttca ataatattga aaaaggaaga gtcctgaggc ggaaagaacc agctgtggaa
1681 tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag
1741 catgcatctc aattagtcag caaccaggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag
1801 aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccata gtcccgcccc taactccgcc
1861 catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc ccattctccg ccccatggct gactaatttt
1921 ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc ggcctctgag ctattccaga agtagtgagg
1981 aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa agatcgatca agagacagga tgaggatcgt
2041 ttcgcatgat tgaacaagat ggattgcacg caggttctcc ggccgcttgg gtggagaggc
2101 tattcggcta tgactgggca caacagacaa tcggctgctc tgatgccgcc gtgttccggc
2161 tgtcagcgca ggggcgcccg gttctttttg tcaagaccga cctgtccggt gccctgaatg
2221 aactgcaaga cgaggcagcg cggctatcgt ggctggccac gacgggcgtt ccttgcgcag
2281 ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa gggactggct gctattgggc gaagtgccgg
2341 ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc ctgccgagaa agtatccatc atggctgatg
2401 caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg ctacctgccc attcgaccac caagcgaaac
2461 atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg aagccggtct tgtcgatcag gatgatctgg
2521 acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg aactgttcgc caggctcaag gcgagcatgc
2581 ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg gcgatgcctg cttgccgaat atcatggtgg
2641 aaaatggccg cttttctgga ttcatcgact gtggccggct gggtgtggcg gaccgctatc
2701 aggacatagc gttggctacc cgtgatattg ctgaagagct tggcggcgaa tgggctgacc
2761 gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc ccgattcgca gcgcatcgcc ttctatcgcc
2821 ttcttgacga gttcttctga gcgggactct ggggttcgaa atgaccgacc aagcgacgcc
2881 caacctgcca tcacgagatt tcgattccac cgccgccttc tatgaaaggt tgggcttcgg
2941 aatcgttttc cgggacgccg gctggatgat cctccagcgc ggggatctca tgctggagtt
3001 cttcgcccac cctaggggga ggctaactga aacacggaag gagacaatac cggaaggaac
3061 ccgcgctatg acggcaataa aaagacagaa taaaacgcac ggtgttgggt cgtttgttca
3121 taaacgcggg gttcggtccc agggctggca ctctgtcgat accccaccga gaccccattg
3181 gggccaatac gcccgcgttt cttccttttc cccaccccac cccccaagtt cgggtgaagg
3241 cccagggctc gcagccaacg tcggggcggc aggccctgcc atagcctcag gttactcata
3301 tatactttag attgatttaa aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct
3361 ttttgataat ctcatgacca aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga
3421 ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg
3481 cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc
3541 aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct
3601 agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc
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3961 tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg
4021 gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg
4081 gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac
4141 cgccatgcat
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pAcGFP1-1哺乳启动子检测质粒
别称: pAcGFP1-1
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳系列质粒；哺乳荧光质粒；哺乳绿色质粒 |
| 质粒大小: | 4150bp |
| 质粒标签: | C-AcGFP1 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 293T等哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | AcGFP-1-F (GCGTCGATTTTTGTGATGCTC) |
| 3'测序引物: | Sv40-polyA-R（GAAATTTGTGATGCTATTGC） |
| 备注: | 哺乳细胞启动子检测载体 |
质粒属性
| 质粒宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 质粒用途： | 信号报告 |
| 片段类型： | Promoter |
| 片段物种： | 空载体 |
| 原核抗性： | Kan |
| 筛选标记： | G418 |
| 荧光标记： | 绿色 |
质粒简介
pAcGFP1-1质粒是 AcGFP的衍生物，来自Aequorea coerulescens。 AcGFP1已经优化了更亮的荧光。（激发最大值= 475nm;发射最大值= 505nm）AcGFP1基因的编码序列含有沉默碱基变化，其对应于人类密码子使用偏好。
pAcGFP1-1是一种无启动子载体，可用于监测插入到多克隆位点（MCS）中的不同启动子和启动子/增强子组合的转录。AcGFP1上游的序列已经转化为Kozak共有翻译起始位点（2），以增强真核细胞中的翻译效率。AcGFP1基因下游的SV40多聚腺苷酸信号直接适当处理AcGFP1 mRNA的3'末端。载体主链含有用于在表达SV40T抗原的哺乳动物细胞中复制的SV40来源，用于在大肠杆菌中繁殖的pUC起始点和用于单链DNA生产的f1起点。新霉素抗性盒（Neor）允许使用G418选择稳定转染的真核细胞。该盒由SV40早期启动子,Tn5的新霉素/卡那霉素抗性基因和来自单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV TK）基因的多聚腺苷酸化信号组成。盒上游的细菌启动子在大肠杆菌中表达卡那霉素抗性。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4150 bp ds-DNA circular SYN 18-10-2015
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4150)
AUTHORS admin
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-10-18 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4150
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
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promoter 1548..1652
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 1654..2011
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 1862..1997
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2046..2840
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
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/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
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GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
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/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattac tagcgctacc ggactcagat ctcgagctca agcttcgaat tctgcagtcg
61 acggtaccgc gggcccggga tccaccggtc gccaccatgg tgagcaaggg cgccgagctg
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421 tcgcgcgccg aggtgaagtt cgagggcgat accctggtga atcgcatcga gctgaccggc
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2461 atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg aagccggtct tgtcgatcag gatgatctgg
2521 acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg aactgttcgc caggctcaag gcgagcatgc
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2761 gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc ccgattcgca gcgcatcgcc ttctatcgcc
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3061 ccgcgctatg acggcaataa aaagacagaa taaaacgcac ggtgttgggt cgtttgttca
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3301 tatactttag attgatttaa aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct
3361 ttttgataat ctcatgacca aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga
3421 ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg
3481 cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3312/pCMV-SPORT6-KRT17人源基因质粒 |
| P3313/pCMV-SPORT6-ZNF655人源基因质粒 |
| P3314/pCMV-SPORT6-PPP2R3C人源基因质粒 |
| P3315/pCMV-SPORT6-HINT1人源基因质粒 |
| P3316/pCMV-SPORT6-TRMT6（1点突变）人源基因质粒 |
| P3317/pCMV-SPORT6-NUDCD3人源基因质粒 |
| P3319/pCMV-SPORT6-TCEAL1人源基因质粒 |
| P2574/pCMV-SPORT6-SEC11C人源基因质粒 |
| P3320/pCMV-SPORT6-NFIB人源基因质粒 |
| P3321/pCMV-SPORT6-SLC30A5人源基因质粒 |
| P3322/pCMV-SPORT6-RGS19人源基因质粒 |
| P3323/pCMV-SPORT6-CEP57人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
GENETICS：用于检测哺乳动物细胞中 DNA-蛋白质交联质粒修复的简单、快速的定量分析
该方法的目的是提供灵活，快速和定量的技术来检测哺乳动物细胞系中DNA-蛋白质交联（DPC）修复的动力学。该测定不是全局测定异种生物诱导的或自发的染色体DPC去除的去除，而是检查在质粒DNA底物内的一个位点处特异性引入的均匀的，化学定义的损伤的修复。这种方法避免了放射性物质的使用，并且不依赖昂贵的或高度专业化的技术。相反，它依赖于标准的重组DNA程序和广泛可用的实时定量聚合酶链式反应（qPCR）仪器。考虑到所用策略的固有灵活性，可以改变交联蛋白的大小以及化学连接的性质和连接位点的精确 DNA
1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
。这两种方法的优点在于不需要直接操作RNA。4. siRNA表达载体多数的siRNA表达载体依赖3种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹siRNA在哺乳动物细胞中的表达(1–4)。这3类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol III启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表达更多的小分子RNA，而且它是通过添加一串（3到6个）U来终止转录的。要使用这类载体，需要订购2段编码短发夹RNA序列的DNA单链，退火，克隆到相应载体的pol
pAcGFP1-1哺乳启动子检测质粒
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