- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P1316
- 2025年07月08日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pFN10A(ACT)-Stuffer
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pFN10A (ACT)哺乳双杂交质粒
别称: pFN10A(ACT)-Stuffer
| 克隆菌株: | DH5a |
|---|---|
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 质粒宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 质粒用途： | 杂交 |
| 片段类型： | |
| 片段物种： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | G418 |
| 荧光标记： |
质粒简介
pFN10A(ACT)-Stuffer
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3490/pCMV-SPORT6-SNF8人源基因质粒 |
| P3824/pCMV-SPORT6-CDK9（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3825/pCMV-SPORT6-AGT人源基因质粒 |
| P0632/pCMV-SPORT6-MB21D1人源基因质粒 |
| P2916/pCMV-SPORT6-ZNF251人源基因质粒 |
| P2933/pCMV-SPORT6-CAPN3-G1988人源基因质粒 |
| P2934/pCMV-SPORT6-MRC2（2同义突变1点突变）人源基因质粒 |
| P3152/pCMV-SPORT6-METTL7A人源基因质粒 |
| P3153/pCMV-SPORT6-MOSPD1人源基因质粒 |
| P3154/pCMV-SPORT6-FAM156B（84-642bp）人源基因质粒 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验加大了。但是随之而来的问题是，这种载体的储存问题。普通的载体我们可以储存在大肠杆菌中，不断复制，不断繁殖，一次购买以后可以省下很多钱。但是载体上有致死基因就只能每次都向厂家购买了。好，现在你把重组质粒构建成功，转入含有DE3片段的大肠杆菌中，利用IPTG进行诱导，发现无法表达，或者表达后想利用其它载体也进行表达以进行比较。那么你可以将外源片段转移到其它载体上，Flexi®系统拥有以下几个载体： Flexi® 载体名称应用表达启动子抗性融合多肽大肠杆菌哺乳动物细胞体外转录 / 翻译N 末端pF
( 1 ) PRSETB 细菌表达质粒（Invitrogen ) : 用于 Ni-次氮基三乙酸（NTA ) 琼脂糖蛋白纯化的 His-tag；用于选择的氨苄青霉素和用于诱导蛋白质表达的异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷（IPTG )。 ( 2 ) pcDNA3 哺乳动物瞬时表达质粒（Invitrogen ) : 巨细胞病毒启动子和用于细菌选择的氨苄青霉素抗性基因。 2.2 生物化学和生物物理鉴定 ( 1 ) Luria-Bertani ( LB ) 培养基：10 g 胰蛋白胨，5 g 酵母
失活。如果一个细胞丢失了质粒，既没有毒性蛋白也没有解毒剂的合成。但是，由于解毒剂更不稳定，当解毒剂失活后，毒性蛋白就可以起杀伤作用。这些系统使细胞对质粒产生溺爱，并防止细胞丢失质粒。 9．答： (1)非传递性和不被带动转移。对于多数基因克隆操作来说，都不希望载体能够进行自主传递，也不希望被带动转移。 (2)具有条件致死突变，如温度敏感质粒pJC307(ColEl的衍生质粒)在哺乳动物正常体温下就丧失复制能力，可防止克隆基因扩散，只存在于限定的宿主细胞中。(3)一般情况下不希望与宿主染色体发生
