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- 上海
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- 2025年07月13日
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- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG哺乳自噬质粒
别称: pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG
质粒属性
质粒简介
pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG哺乳大鼠基因自噬质粒，Expresses GFP-LC3-RFP-LC3ΔG in mammalian cells to measure autophagic flux。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8887 bp ds-DNA circular SYN 10-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3-Delta-G
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8887)
AUTHORS Triple Threat
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8887
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
LTR 1..594
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
misc_feature 657..1014
/note="MMLV Psi"
/note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus
(MMLV)"
CDS 1079..1495
/note="gag (truncated)"
/note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag
gene lacking the start codon"
CDS 1921..2637
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
misc_feature 2701..3060
/note="lc3b"
CDS 3061..3735
/codon_start=1
/product="monomeric derivative of DsRed (Campbell et al.,
2002)"
/note="mRFP1"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MASSEDVIKEFMRFKVRMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEGTQTAK
LKVTKGGPLPFAWDILSPQFQYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNFEDGGV
VTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASTERMYPEDGALKGEIKM
RLKLKDGGHYDAEVKTTYMAKKPVQLPGAYKTDIKLDITSHNEDYTIVEQYERAEGRHS
TGA"
CDS 3754..4110
/codon_start=1
/note="LC3-Delta-G"
/translation="MPSEKTFKQRRSFEQRVEDVRLIREQHPTKIPVIIERYKGEKQLP
VLDKTKFLVPDHVNMSELIKIIRRRLQLNANQAFFLLVNGHSMVSVS-TPISEVYESERD
EDGFLYMVYASQETF"
misc_feature 4215..4767
/note="IRES"
/note="internal ribosome entry site (IRES) of the
encephalomyocarditis virus (EMCV)"
CDS 4779..5378
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces alboniger"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/note="PuroR"
/note="confers resistance to puromycin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
LTR 5602..6071
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
rep_origin complement(6372..6960)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(7124..7984)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7985..8089)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
enhancer 8277..8656
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
ORIGIN
1 aatgaaagac cccacctgta ggtttggcaa gctagcttaa gtaacgccat tttgcaaggc
61 atggaaaaat acataactga gaatagagaa gttcagatca aggtcaggaa cagatggaac
121 agctgaatat gggccaaaca ggatatctgt ggtaagcagt tcctgccccg gctcagggcc
181 aagaacagat ggaacagctg aatatgggcc aaacaggata tctgtggtaa gcagttcctg
241 ccccggctca gggccaagaa cagatggtcc ccagatgcgg tccagccctc agcagtttct
301 agagaaccat cagatgtttc cagggtgccc caaggacctg aaatgaccct gtgccttatt
361 tgaactaacc aatcagttcg cttctcgctt ctgttcgcgc gcttctgctc cccgagctca
421 ataaaagagc ccacaacccc tcactcggcg cgccagtcct ccgattgact gagtcgcccg
481 ggtacccgtg tatccaataa accctcttgc agttgcatcc gacttgtggt ctcgctgttc
541 cttgggaggg tctcctctga gtgattgact acccgtcagc gggggtcttt catttggggg
601 ctcgtccggg atcgggagac ccctgcccag ggaccaccga cccaccaccg ggaggtaagc
661 tggccagcaa cttatctgtg tctgtccgat tgtctagtgt ctatgactga ttttatgcgc
721 ctgcgtcggt actagttagc taactagctc tgtatctggc ggacccgtgg tggaactgac
781 gagttcggaa cacccggccg caaccctggg agacgtccca gggacttcgg gggccgtttt
841 tgtggcccga cctgagtcca aaaatcccga tcgttttgga ctctttggtg cacccccctt
901 agaggaggga tatgtggttc tggtaggaga cgagaaccta aaacagttcc cgcctccgtc
961 tgaatttttg ctttcggttt gggaccgaag ccgcgccgcg cgtcttgtct gctgcagcat
1021 cgttctgtgt tgtctctgtc tgactgtgtt tctgtatttg tctgaaaata tgggcccggg
1081 ccagactgtt accactccct taagtttgac cttaggtcac tggaaagatg tcgagcggat
1141 cgctcacaac cagtcggtag atgtcaagaa gagacgttgg gttaccttct gctctgcaga
1201 atggccaacc tttaacgtcg gatggccgcg agacggcacc tttaaccgag acctcatcac
1261 ccaggttaag atcaaggtct tttcacctgg cccgcatgga cacccagacc aggtccccta
1321 catcgtgacc tgggaagcct tggcttttga cccccctccc tgggtcaagc cctttgtaca
1381 ccctaagcct ccgcctcctc ttcctccatc cgccccgtct ctcccccttg aacctcctcg
1441 ttcgaccccg cctcgatcct ccctttatcc agccctcact ccttctctag gcgcccccat
1501 atggccatat gagatcttat atggggcacc cccgcccctt gtaaacttcc ctgaccctga
1561 catgacaaga gttactaaca gcccctctct ccaagctcac ttacaggctc tctacttagt
1621 ccagcacgaa gtctggagac ctctggcggc agcctaccaa gaacaactgg accgaccggt
1681 ggtacctcac ccttaccgag tcggcgacac agtgtgggtc cgccgacacc agactaagaa
1741 cctagaacct cgctggaaag gaccttacac agtcctgctg accaccccca ccgccctcaa
1801 agtagacggc atcgcagctt ggatacacgc cgcccacgtg aaggctgccg accccggggg
1861 tggaccatcc tctagackgc cggrwccccc cyckagacyg ccggatctcc cgccgccacc
1921 atggtgagca agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac
1981 ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac
2041 ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc
2101 ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag
2161 cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc
2221 ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg
2281 gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac
2341 aagctggagt acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac
2401 ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc
2461 gaccactacc agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac
2521 tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc
2581 ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaagggt
2641 ggcggtggct cgggcggtgg tgggtcgggt ggcggcggat ctatcgatga attgaattcc
2701 atgccgtccg agaagacctt caaacagcgc cggagcttcg aacaaagagt ggaagatgtc
2761 cggctcatcc gggagcagca ccccaccaag atcccagtga ttatagagcg atacaagggt
2821 gagaagcagc tgcccgtcct ggacaagacc aagttccttg tacctgatca cgtgaatatg
2881 agcgaactca tcaagataat tagaaggcgc ctgcagctca atgctaacca agccttcttc
2941 ctcctggtga atgggcacag catggtgagt gtgtccacac ccatctctga agtgtacgag
3001 agcgagagag atgaagacgg cttcctgtac atggtctatg cctcccagga gacgttcggg
3061 atggcctcct ccgaggacgt catcaaggag ttcatgcgct tcaaggtgcg catggagggc
3121 tccgtgaacg gccacgagtt cgagatcgag ggcgagggcg agggccgccc ctacgagggc
3181 acccagaccg ccaagctgaa ggtgaccaag ggcggccccc tgcccttcgc ctgggacatc
3241 ctgtcccctc agttccagta cggctccaag gcctacgtga agcaccccgc cgacatcccc
3301 gactacttga agctgtcctt ccccgagggc ttcaagtggg agcgcgtgat gaacttcgag
3361 gacggcggcg tggtgaccgt gacccaggac tcctccctgc aggacggcga gttcatctac
3421 aaggtgaagc tgcgcggcac caacttcccc tccgacggcc ccgtaatgca gaagaagacc
3481 atgggctggg aggcctccac cgagcggatg taccccgagg acggcgccct gaagggcgag
3541 atcaagatga ggctgaagct gaaggacggc ggccactacg acgccgaggt caagaccacc
3601 tacatggcca agaagcccgt gcagctgccc ggcgcctaca agaccgacat caagctggac
3661 atcacctccc acaacgagga ctacaccatc gtggaacagt acgagcgcgc cgagggccgc
3721 cactccaccg gcgccatcga tgaattgaat tccatgccgt ccgagaagac cttcaaacag
3781 cgccggagct tcgaacaaag agtggaagat gtccggctca tccgggagca gcaccccacc
3841 aagatcccag tgattataga gcgatacaag ggtgagaagc agctgcccgt cctggacaag
3901 accaagttcc ttgtacctga tcacgtgaat atgagcgaac tcatcaagat aattagaagg
3961 cgcctgcagc tcaatgctaa ccaagccttc ttcctcctgg tgaatgggca cagcatggtg
4021 agtgtgtcca cacccatctc tgaagtgtac gagagcgaga gagatgaaga cggcttcctg
4081 tacatggtct atgcctccca ggagacgttc taaggatccc agtgtggtgg tacgggaatt
4141 cctgcaggcc tcgagggccg gcgcgccgcg gccgctacgt aaattccgcc cccccccccc
4201 ctcccccccc cctaacgtta ctggccgaag ccgcttggaa taaggccggt gtgcgtttgt
4261 ctatatgtta ttttccacca tattgccgtc ttttggcaat gtgagggccc ggaaacctgg
4321 ccctgtcttc ttgacgagca ttcctagggg tctttcccct ctcgccaaag gaatgcaagg
4381 tctgttgaat gtcgtgaagg aagcagttcc tctggaagct tcttgaagac aaacaacgtc
4441 tgtagcgacc ctttgcaggc agcggaaccc cccacctggc gacaggtgcc tctgcggcca
4501 aaagccacgt gtataagata cacctgcaaa ggcggcacaa ccccagtgcc acgttgtgag
4561 ttggatagtt gtggaaagag tcaaatggct ctcctcaagc gtattcaaca aggggctgaa
4621 ggatgcccag aaggtacccc attgtatggg atctgatctg gggcctcggt gcacatgctt
4681 tacatgtgtt tagtcgaggt taaaaaaacg tctaggcccc ccgaaccacg gggacgtggt
4741 tttcctttga aaaacacgat gataatatgg ccacaaccat gaccgagtac aagcccacgg
4801 tgcgcctcgc cacccgcgac gacgtccccc gggccgtacg caccctcgcc gccgcgttcg
4861 ccgactaccc cgccacgcgc cacaccgtcg acccggaccg ccacatcgag cgggtcaccg
4921 agctgcaaga actcttcctc acgcgcgtcg ggctcgacat cggcaaggtg tgggtcgcgg
4981 acgacggcgc cgcggtggcg gtctggacca cgccggagag cgtcgaagcg ggggcggtgt
5041 tcgccgagat cggcccgcgc atggccgagt tgagcggttc ccggctggcc gcgcagcaac
5101 agatggaagg cctcctggcg ccgcaccggc ccaaggagcc cgcgtggttc ctggccaccg
5161 tcggcgtctc gcccgaccac cagggcaagg gtctgggcag cgccgtcgtg ctccccggag
5221 tggaggcggc cgagcgcgcc ggggtgcccg ccttcctgga gacctccgcg ccccgcaacc
5281 tccccttcta cgagcggctc ggcttcaccg tcaccgccga cgtcgaggtg cccgaaggac
5341 cgcgcacctg gtgcatgacc cgcaagcccg gtgcctgacg cccgccccac gacccgcagc
5401 gcccgaccga aaggagcgca cgaccccatg gctcgacgat aaaataaaag attttattta
5461 gtctccagaa aaagggggga atgaaagacc ccacctgtag gtttggcaag ctagcttaag
5521 taacgccatt ttgcaaggca tggaaaaata cataactgag aatagagaag ttcagatcaa
5581 ggtcaggaac agatggaaca gctgaatatg ggccaaacag gatatctgtg gtaagcagtt
5641 cctgccccgg ctcagggcca agaacagatg gaacagctga atatgggcca aacaggatat
5701 ctgtggtaag cagttcctgc cccggctcag ggccaagaac agatggtccc cagatgcggt
5761 ccagccctca gcagtttcta gagaaccatc agatgtttcc agggtgcccc aaggacctga
5821 aatgaccctg tgccttattt gaactaacca atcagttcgc ttctcgcttc tgttcgcgcg
5881 cttctgctcc ccgagctcaa taaaagagcc cacaacccct cactcggggc gccagtcctc
5941 cgattgactg agtcgcccgg gtacccgtgt atccaataaa ccctcttgca gttgcatccg
6001 acttgtggtc tcgctgttcc ttgggagggt ctcctctgag tgattgacta cccgtcagcg
6061 ggggtctttc acatgcagca tgtatcaaaa ttaatttggt tttttttctt aagtatttac
6121 attaaatggc catagttgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt
6181 attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg
6241 cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac
6301 gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg
6361 ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca
6421 agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc
6481 tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc
6541 ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag
6601 gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc
6661 ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca
6721 gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg
6781 aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat ttggtatctg cgctctgctg
6841 aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct
6901 ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa
6961 gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa
7021 gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt gcggccggcc
7081 gcaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca
7141 gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg
7201 tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac
7261 cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg
7321 ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc
7381 gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta
7441 caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac
7501 gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc
7561 ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac
7621 tgcataattc tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact
7681 caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa
7741 cacgggataa taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt
7801 cttcggggcg aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca
7861 ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa
7921 aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac
7981 tcatactctt cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg
8041 gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc
8101 gaaaagtgcc acctgacgtc taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata
8161 ggcgtatcac gaggcccttt cgtcttcact cgaggagctt ggcccattgc atacgttgta
8221 tccatatcat aatatgtaca tttatattgg ctcatgtcca acattaccgc catgttgaca
8281 ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata
8341 tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga
8401 cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt
8461 ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt
8521 gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca
8581 ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt
8641 catcgctatt accatgctag agaaccatca gatgtttcca gggtgcccca aggacctgaa
8701 atgaccctgt gccttatttg aactaaccaa tcagttcgct tctcgcttct gttcgcgcgc
8761 ttctgctccc cgagctcaat aaaagagccc acaacccctc actcggcgcg ccagtcctcc
8821 gattgactga gtcgcccggg tacccgtgta tccaataaac cctcttgcag ttgcatccga
8881 cttgtgg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG哺乳自噬质粒
别称: pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG
| 启动子: | MMLV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Puro |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞,逆病毒 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达,自噬 |
| 基因种属： | 大鼠 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Puro |
| 荧光蛋白： | 绿色,红色 |
质粒简介
pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG哺乳大鼠基因自噬质粒，Expresses GFP-LC3-RFP-LC3ΔG in mammalian cells to measure autophagic flux。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8887 bp ds-DNA circular SYN 10-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3-Delta-G
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8887)
AUTHORS Triple Threat
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8887
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
LTR 1..594
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
misc_feature 657..1014
/note="MMLV Psi"
/note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus
(MMLV)"
CDS 1079..1495
/note="gag (truncated)"
/note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag
gene lacking the start codon"
CDS 1921..2637
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
misc_feature 2701..3060
/note="lc3b"
CDS 3061..3735
/codon_start=1
/product="monomeric derivative of DsRed (Campbell et al.,
2002)"
/note="mRFP1"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MASSEDVIKEFMRFKVRMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEGTQTAK
LKVTKGGPLPFAWDILSPQFQYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNFEDGGV
VTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASTERMYPEDGALKGEIKM
RLKLKDGGHYDAEVKTTYMAKKPVQLPGAYKTDIKLDITSHNEDYTIVEQYERAEGRHS
TGA"
CDS 3754..4110
/codon_start=1
/note="LC3-Delta-G"
/translation="MPSEKTFKQRRSFEQRVEDVRLIREQHPTKIPVIIERYKGEKQLP
VLDKTKFLVPDHVNMSELIKIIRRRLQLNANQAFFLLVNGHSMVSVS-TPISEVYESERD
EDGFLYMVYASQETF"
misc_feature 4215..4767
/note="IRES"
/note="internal ribosome entry site (IRES) of the
encephalomyocarditis virus (EMCV)"
CDS 4779..5378
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces alboniger"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/note="PuroR"
/note="confers resistance to puromycin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
LTR 5602..6071
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
rep_origin complement(6372..6960)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(7124..7984)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7985..8089)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
enhancer 8277..8656
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
ORIGIN
1 aatgaaagac cccacctgta ggtttggcaa gctagcttaa gtaacgccat tttgcaaggc
61 atggaaaaat acataactga gaatagagaa gttcagatca aggtcaggaa cagatggaac
121 agctgaatat gggccaaaca ggatatctgt ggtaagcagt tcctgccccg gctcagggcc
181 aagaacagat ggaacagctg aatatgggcc aaacaggata tctgtggtaa gcagttcctg
241 ccccggctca gggccaagaa cagatggtcc ccagatgcgg tccagccctc agcagtttct
301 agagaaccat cagatgtttc cagggtgccc caaggacctg aaatgaccct gtgccttatt
361 tgaactaacc aatcagttcg cttctcgctt ctgttcgcgc gcttctgctc cccgagctca
421 ataaaagagc ccacaacccc tcactcggcg cgccagtcct ccgattgact gagtcgcccg
481 ggtacccgtg tatccaataa accctcttgc agttgcatcc gacttgtggt ctcgctgttc
541 cttgggaggg tctcctctga gtgattgact acccgtcagc gggggtcttt catttggggg
601 ctcgtccggg atcgggagac ccctgcccag ggaccaccga cccaccaccg ggaggtaagc
661 tggccagcaa cttatctgtg tctgtccgat tgtctagtgt ctatgactga ttttatgcgc
721 ctgcgtcggt actagttagc taactagctc tgtatctggc ggacccgtgg tggaactgac
781 gagttcggaa cacccggccg caaccctggg agacgtccca gggacttcgg gggccgtttt
841 tgtggcccga cctgagtcca aaaatcccga tcgttttgga ctctttggtg cacccccctt
901 agaggaggga tatgtggttc tggtaggaga cgagaaccta aaacagttcc cgcctccgtc
961 tgaatttttg ctttcggttt gggaccgaag ccgcgccgcg cgtcttgtct gctgcagcat
1021 cgttctgtgt tgtctctgtc tgactgtgtt tctgtatttg tctgaaaata tgggcccggg
1081 ccagactgtt accactccct taagtttgac cttaggtcac tggaaagatg tcgagcggat
1141 cgctcacaac cagtcggtag atgtcaagaa gagacgttgg gttaccttct gctctgcaga
1201 atggccaacc tttaacgtcg gatggccgcg agacggcacc tttaaccgag acctcatcac
1261 ccaggttaag atcaaggtct tttcacctgg cccgcatgga cacccagacc aggtccccta
1321 catcgtgacc tgggaagcct tggcttttga cccccctccc tgggtcaagc cctttgtaca
1381 ccctaagcct ccgcctcctc ttcctccatc cgccccgtct ctcccccttg aacctcctcg
1441 ttcgaccccg cctcgatcct ccctttatcc agccctcact ccttctctag gcgcccccat
1501 atggccatat gagatcttat atggggcacc cccgcccctt gtaaacttcc ctgaccctga
1561 catgacaaga gttactaaca gcccctctct ccaagctcac ttacaggctc tctacttagt
1621 ccagcacgaa gtctggagac ctctggcggc agcctaccaa gaacaactgg accgaccggt
1681 ggtacctcac ccttaccgag tcggcgacac agtgtgggtc cgccgacacc agactaagaa
1741 cctagaacct cgctggaaag gaccttacac agtcctgctg accaccccca ccgccctcaa
1801 agtagacggc atcgcagctt ggatacacgc cgcccacgtg aaggctgccg accccggggg
1861 tggaccatcc tctagackgc cggrwccccc cyckagacyg ccggatctcc cgccgccacc
1921 atggtgagca agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac
1981 ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac
2041 ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc
2101 ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag
2161 cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc
2221 ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg
2281 gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac
2341 aagctggagt acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac
2401 ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc
2461 gaccactacc agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac
2521 tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc
2581 ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaagggt
2641 ggcggtggct cgggcggtgg tgggtcgggt ggcggcggat ctatcgatga attgaattcc
2701 atgccgtccg agaagacctt caaacagcgc cggagcttcg aacaaagagt ggaagatgtc
2761 cggctcatcc gggagcagca ccccaccaag atcccagtga ttatagagcg atacaagggt
2821 gagaagcagc tgcccgtcct ggacaagacc aagttccttg tacctgatca cgtgaatatg
2881 agcgaactca tcaagataat tagaaggcgc ctgcagctca atgctaacca agccttcttc
2941 ctcctggtga atgggcacag catggtgagt gtgtccacac ccatctctga agtgtacgag
3001 agcgagagag atgaagacgg cttcctgtac atggtctatg cctcccagga gacgttcggg
3061 atggcctcct ccgaggacgt catcaaggag ttcatgcgct tcaaggtgcg catggagggc
3121 tccgtgaacg gccacgagtt cgagatcgag ggcgagggcg agggccgccc ctacgagggc
3181 acccagaccg ccaagctgaa ggtgaccaag ggcggccccc tgcccttcgc ctgggacatc
3241 ctgtcccctc agttccagta cggctccaag gcctacgtga agcaccccgc cgacatcccc
3301 gactacttga agctgtcctt ccccgagggc ttcaagtggg agcgcgtgat gaacttcgag
3361 gacggcggcg tggtgaccgt gacccaggac tcctccctgc aggacggcga gttcatctac
3421 aaggtgaagc tgcgcggcac caacttcccc tccgacggcc ccgtaatgca gaagaagacc
3481 atgggctggg aggcctccac cgagcggatg taccccgagg acggcgccct gaagggcgag
3541 atcaagatga ggctgaagct gaaggacggc ggccactacg acgccgaggt caagaccacc
3601 tacatggcca agaagcccgt gcagctgccc ggcgcctaca agaccgacat caagctggac
3661 atcacctccc acaacgagga ctacaccatc gtggaacagt acgagcgcgc cgagggccgc
3721 cactccaccg gcgccatcga tgaattgaat tccatgccgt ccgagaagac cttcaaacag
3781 cgccggagct tcgaacaaag agtggaagat gtccggctca tccgggagca gcaccccacc
3841 aagatcccag tgattataga gcgatacaag ggtgagaagc agctgcccgt cctggacaag
3901 accaagttcc ttgtacctga tcacgtgaat atgagcgaac tcatcaagat aattagaagg
3961 cgcctgcagc tcaatgctaa ccaagccttc ttcctcctgg tgaatgggca cagcatggtg
4021 agtgtgtcca cacccatctc tgaagtgtac gagagcgaga gagatgaaga cggcttcctg
4081 tacatggtct atgcctccca ggagacgttc taaggatccc agtgtggtgg tacgggaatt
4141 cctgcaggcc tcgagggccg gcgcgccgcg gccgctacgt aaattccgcc cccccccccc
4201 ctcccccccc cctaacgtta ctggccgaag ccgcttggaa taaggccggt gtgcgtttgt
4261 ctatatgtta ttttccacca tattgccgtc ttttggcaat gtgagggccc ggaaacctgg
4321 ccctgtcttc ttgacgagca ttcctagggg tctttcccct ctcgccaaag gaatgcaagg
4381 tctgttgaat gtcgtgaagg aagcagttcc tctggaagct tcttgaagac aaacaacgtc
4441 tgtagcgacc ctttgcaggc agcggaaccc cccacctggc gacaggtgcc tctgcggcca
4501 aaagccacgt gtataagata cacctgcaaa ggcggcacaa ccccagtgcc acgttgtgag
4561 ttggatagtt gtggaaagag tcaaatggct ctcctcaagc gtattcaaca aggggctgaa
4621 ggatgcccag aaggtacccc attgtatggg atctgatctg gggcctcggt gcacatgctt
4681 tacatgtgtt tagtcgaggt taaaaaaacg tctaggcccc ccgaaccacg gggacgtggt
4741 tttcctttga aaaacacgat gataatatgg ccacaaccat gaccgagtac aagcccacgg
4801 tgcgcctcgc cacccgcgac gacgtccccc gggccgtacg caccctcgcc gccgcgttcg
4861 ccgactaccc cgccacgcgc cacaccgtcg acccggaccg ccacatcgag cgggtcaccg
4921 agctgcaaga actcttcctc acgcgcgtcg ggctcgacat cggcaaggtg tgggtcgcgg
4981 acgacggcgc cgcggtggcg gtctggacca cgccggagag cgtcgaagcg ggggcggtgt
5041 tcgccgagat cggcccgcgc atggccgagt tgagcggttc ccggctggcc gcgcagcaac
5101 agatggaagg cctcctggcg ccgcaccggc ccaaggagcc cgcgtggttc ctggccaccg
5161 tcggcgtctc gcccgaccac cagggcaagg gtctgggcag cgccgtcgtg ctccccggag
5221 tggaggcggc cgagcgcgcc ggggtgcccg ccttcctgga gacctccgcg ccccgcaacc
5281 tccccttcta cgagcggctc ggcttcaccg tcaccgccga cgtcgaggtg cccgaaggac
5341 cgcgcacctg gtgcatgacc cgcaagcccg gtgcctgacg cccgccccac gacccgcagc
5401 gcccgaccga aaggagcgca cgaccccatg gctcgacgat aaaataaaag attttattta
5461 gtctccagaa aaagggggga atgaaagacc ccacctgtag gtttggcaag ctagcttaag
5521 taacgccatt ttgcaaggca tggaaaaata cataactgag aatagagaag ttcagatcaa
5581 ggtcaggaac agatggaaca gctgaatatg ggccaaacag gatatctgtg gtaagcagtt
5641 cctgccccgg ctcagggcca agaacagatg gaacagctga atatgggcca aacaggatat
5701 ctgtggtaag cagttcctgc cccggctcag ggccaagaac agatggtccc cagatgcggt
5761 ccagccctca gcagtttcta gagaaccatc agatgtttcc agggtgcccc aaggacctga
5821 aatgaccctg tgccttattt gaactaacca atcagttcgc ttctcgcttc tgttcgcgcg
5881 cttctgctcc ccgagctcaa taaaagagcc cacaacccct cactcggggc gccagtcctc
5941 cgattgactg agtcgcccgg gtacccgtgt atccaataaa ccctcttgca gttgcatccg
6001 acttgtggtc tcgctgttcc ttgggagggt ctcctctgag tgattgacta cccgtcagcg
6061 ggggtctttc acatgcagca tgtatcaaaa ttaatttggt tttttttctt aagtatttac
6121 attaaatggc catagttgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt
6181 attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg
6241 cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac
6301 gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg
6361 ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca
6421 agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc
6481 tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc
6541 ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag
6601 gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc
6661 ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca
6721 gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg
6781 aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat ttggtatctg cgctctgctg
6841 aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct
6901 ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa
6961 gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa
7021 gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt gcggccggcc
7081 gcaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca
7141 gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg
7201 tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac
7261 cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg
7321 ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc
7381 gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta
7441 caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac
7501 gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc
7561 ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac
7621 tgcataattc tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact
7681 caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa
7741 cacgggataa taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt
7801 cttcggggcg aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca
7861 ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa
7921 aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac
7981 tcatactctt cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg
8041 gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc
8101 gaaaagtgcc acctgacgtc taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata
8161 ggcgtatcac gaggcccttt cgtcttcact cgaggagctt ggcccattgc atacgttgta
8221 tccatatcat aatatgtaca tttatattgg ctcatgtcca acattaccgc catgttgaca
8281 ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata
8341 tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga
8401 cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt
8461 ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt
8521 gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca
8581 ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt
8641 catcgctatt accatgctag agaaccatca gatgtttcca gggtgcccca aggacctgaa
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8761 ttctgctccc cgagctcaat aaaagagccc acaacccctc actcggcgcg ccagtcctcc
8821 gattgactga gtcgcccggg tacccgtgta tccaataaac cctcttgcag ttgcatccga
8881 cttgtgg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3453/pENTR223-NIPSNAP2人源基因质粒 |
| P3454/pENTR223-MRPS5人源基因质粒 |
| P3455/pENTR223-IL1A人源基因质粒 |
| P3456/pENTR223-MS4A12（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3457/pENTR223-RNF32人源基因质粒 |
| P3458/pENTR223-ZNF501（28-816bp）人源基因质粒 |
| P3459/pENTR223-RTBDN人源基因质粒 |
| P3460/pENTR223-DNPEP（31-1458bp）人源基因质粒 |
| P3461/pENTR223-PGD人源基因质粒 |
| P3462/pENTR223-STK17B（3同义突变）人源基因质粒 |
| P3463/pENTR223-TTLL1人源基因质粒 |
| P3464/pENTR223-MRM3-G22T人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
蛋白转位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。 mRFP-GFP-LC3 双荧光自噬指示体系： mRFP-GFP-LC3 融合蛋白的病毒产品 mRFP 用于标记及追踪 LC3，GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体。由于 GFP 荧光蛋白对酸性敏感(pH 敏感)，当自噬体与溶酶体融合后 GFP 荧光发生淬灭,而 mRFP 相对稳定，因此只能检测到红色荧光。 1. 哺乳动物 LC3 表达质粒
verarzhch 因实验急用，求一点质粒，检验细胞是否发生自噬。RFP-LC3或myc-LC3。谢谢！本人在上海，可购可换。 bzy0222 我有GFP-LC3。 yzg831 我们实验室也有的 喜龙 bzy0222 wrote: 我有GFP-LC3。 请问您的质粒是购自哪里的，能不能
的高低。荧光蛋白-LC3▬直接观察自噬流的方法GFP-LC3指示技术：无自噬时，GFP-LC3融合蛋白弥散在胞浆中；自噬形成时，GFP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。但是绿色斑点增多并不一定代表自噬活性增强，也有可能是自噬溶酶体降解途径受阻。RFP-GFP-LC3 双荧光自噬指示体系：用于标记及追踪LC3以及自噬流的变化。自噬诱导后，融合表达的荧光蛋白-LC3蛋白锚定于自噬体膜上并与自噬体一起与溶酶
pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG哺乳自噬质粒
￥100 - 1000
