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- Xybio
- 上海
- P0200
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pEGFP-LC3b(rat)
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pEGFP-LC3b-r哺乳自噬质粒
别称: pEGFP-LC3b(rat)
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，自噬表达载体 |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | Sv40-polyA-R：GAAATTTGTGATGCTATTGC |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达,自噬 |
| 基因种属： | 大鼠 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： | 绿色 |
质粒简介
pEGFP-LC3b-r质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3099/pENTR223-NVL（319-2298bp1同义突变）人源基因质粒 |
| P3100/pENTR223-DBF4（2点突变）人源基因质粒 |
| P3101/pENTR223-GP-CPD1人源基因质粒 |
| P3102/pENTR223-ZNF334（2点突变）人源基因质粒 |
| P3103/pENTR223-KIAA0391（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3104/pENTR223-CCT5（1点突变2同义突变）人源基因质粒 |
| P3105/pENTR223-CSRNP2人源基因质粒 |
| P3106/pENTR223-ZNF559人源基因质粒 |
| P3107/pENTR223-ZNF274-G439A人源基因质粒 |
| P3108/pENTR223-ITPKB人源基因质粒 |
| P3109/pENTR223-PDIA3人源基因质粒 |
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文献和实验的。ATG5 在死亡肿瘤细胞中高表达，因此成为抗肿瘤治疗成功与否的重要指标，而 ATG12-ATG5-ATG16L 复合物的形成对自噬隔离膜的延伸是至关重要的。LC3 是 Atg8 在哺乳动物细胞中的同源物，LC3B-I(定位于胞浆) 与磷脂酰乙醇胺（PE）共价连接并插入到自噬体的双层膜中形成 LC3B II。LC3 偶联到自噬体上以及 LC3-I 转换成 LC3-II，已被用来作为自噬评价和测定的公认指标。自噬溶酶体形成自噬体与溶酶体的直接融合形成自噬溶酶体，形成过程中主要是 LAMP1、Rab
水平的高低。LC3 这一转变过程可被 Western Blot 和荧光显微镜检测到，现已成为监测自噬体形成的推荐方法。在哺乳动物中，LC3 包含 3 种亚型：LC3A、LC3B、LC3C，分布在不同的组织中，因此需要用不同的抗体去鉴定这3种亚型。 和元生物能够提供成熟的细胞自噬相关的技术服务 GFP-LC3 单荧光自噬指示体系： 利用 LC3 在自噬形成过程中发生聚集的现象构建了 GFP-LC3 指示体系，无自噬时，GFP-LC3 融合蛋白弥散在胞浆中；自噬形成时，GFP-LC3 融合
tianlang126 wrote: :(:(新手最近想做细胞自噬，想知道beclin1在自噬中起个什么样的作用？是不是表达beclin1就可以认为细胞发生了自噬？它和凋亡、坏死、炎症等有什么关系？它是通过什么信号通路起作用？ 希望各位大虾解解惑:8):8) 他是个明星分子 但是不是自噬的标志性分子 自噬的标志性分子是LC3 准确说是MAP1LC3B baker099 Beclin1在自噬的早期组装
