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- Xybio
- 上海
- P0391
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pSUP202
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pSUP202大肠自杀质粒
别称: pSUP202
质粒属性
质粒简介
pSUP202是一个大肠杆菌质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7830 bp ds-DNA linear UNA 31-12-2015
DEFINITION natural linear DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pSUP202
SOURCE natural DNA sequence
ORGANISM unspecified
REFERENCE 1 (bases 1 to 7830)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-12-31 from MiaoLingBio
http://www.MiaoLingBio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7830
/organism="unspecified"
/mol_type="genomic DNA"
promoter 599..627
/note="tet promoter"
/note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
gene"
CDS 675..1865
/codon_start=1
/gene="tet"
/product="tetracycline efflux protein"
/note="TcR"
/note="confers resistance to tetracycline"
/translation="MKSNNALIVILGTVTLDAVGIGLVMPVLPGLLRDIVHSDSIASHY
GVLLALYALMQFLCAPVLGAL-SDRFGRRPVLLASLLGATIDYAIMATTPVLWILYAGRI
VAGITGATGAVAGAYIADITDGEDRARHFGLMSACFGVGMVAGPVAGGLLGAISLHAPF
LAAAVLNGLNLLLGCFLMQESHKGERRPMPLRAFNPVSSFRWARGMTIVAALMTVFFIM
QLVGQVPAALWVIFGEDRFRWSATMIGLSLAVFGILHALAQAFVTGPATKRFGEKQAII
AGMAADALGYVLLAFATRGWMAFPIMILLASGGIGMPALQAMLSRQVDDDHQGQLQGSL
AALTSLTSIIGPLIVTAIYAASASTWNGLAWIVGAALYLVCLPALRRGAWSRATST"
CDS 2504..2695
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
misc_feature 2797..2937
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
CDS complement(3884..4744)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4745..4849)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 5052..5154
/note="cat promoter"
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
CDS 5155..5814
/codon_start=1
/gene="cat"
/product="chloramphenicol acetyltransferase"
/note="CmR"
/note="confers resistance to chloramphenicol"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"
CDS complement(6666..7037)
/codon_start=1
/gene="traJ"
/product="oriT-recognizing protein"
/note="traJ"
/translation="MADETKPTRKGSPPIKVYCLPDERRAIEEKAAAAGMSLSAYLLAV
GQGYKITGVVDYEHVRELARINGDLGRLGGLLKLWLTDDPRTARFGDATILALLAKIEE
KQDELGKVMMGVVRPRAEP"
oriT 7070..7179
/note="incP origin of transfer"
ORIGIN
1 gcagggcaag ggcggggtcg gcaagtcggc catcgccgcg atcattgcgc agtacaagat
61 ggacaagggg cagacaccct tgtgcatcga caccgacccg gtgaacgcga cgttcgaggg
121 ctacaaggcc ctgaacgtcc gccggctgaa catcatggcc ggcgacgaaa ttaactcgcg
181 caacttcgac accctggtcg agctgattgc gccgaccaag gatgacgtgg tgatcctcta
241 cgccggacgc atcgtggccg gcatcaccgg cgccacaggt gcggttgctg gcgcctatat
301 cgccgacatc accgatgggg aagatccttg aagctgtccc tgatggtcgt catctacctg
361 cctggacagc atggcctgca acgcgggcat cccgatgccg ccggaagcga gaagaatcat
421 aatggggaag gccatccagc ctcgcgtcgc gaacgccagc aagacgtagc ccagcgcgtc
481 ggccgccatg ccggcgataa tggcctgctt ctcgccgaaa cgtttggtgg cgggaccagt
541 gacgaaggct tgagcgaggg cgtgcaagat tccgaatacc gcaagcgaca ggccatgttt
601 gacagcttat catcgataag ctttaatgcg gtagtttatc acagttaaat tgctaacgca
661 gtcaggcacc gtgtatgaaa tctaacaatg cgctcatcgt catcctcggc accgtcaccc
721 tggatgctgt aggcataggc ttggttatgc cggtactgcc gggcctcttg cgggatatcg
781 tccattccga cagcatcgcc agtcactatg gcgtgctgct agcgctatat gcgttgatgc
841 aatttctatg cgcacccgtt ctcggagcac tgtccgaccg ctttggccgc cgcccagtcc
901 tgctcgcttc gctacttgga gccactatcg actacgcgat catggcgacc acacccgtcc
961 tgtggatcct ctacgccgga cgcatcgtgg ccggcatcac cggcgccaca ggtgcggttg
1021 ctggcgccta tatcgccgac atcaccgatg gggaagatcg ggctcgccac ttcgggctca
1081 tgagcgcttg tttcggcgtg ggtatggtgg caggccccgt ggccggggga ctgttgggcg
1141 ccatctcctt gcatgcacca ttccttgcgg cggcggtgct caacggcctc aacctactac
1201 tgggctgctt cctaatgcag gagtcgcata agggagagcg tcgaccgatg cccttgagag
1261 ccttcaaccc agtcagctcc ttccggtggg cgcggggcat gactatcgtc gccgcactta
1321 tgactgtctt ctttatcatg caactcgtag gacaggtgcc ggcagcgctc tgggtcattt
1381 tcggcgagga ccgctttcgc tggagcgcga cgatgatcgg cctgtcgctt gcggtattcg
1441 gaatcttgca cgccctcgct caagccttcg tcactggtcc cgccaccaaa cgtttcggcg
1501 agaagcaggc cattatcgcc ggcatggcgg ccgacgcgct gggctacgtc ttgctggcgt
1561 tcgcgacgcg aggctggatg gccttcccca ttatgattct tctcgcttcc ggcggcatcg
1621 ggatgcccgc gttgcaggcc atgctgtcca ggcaggtaga tgacgaccat cagggacagc
1681 ttcaaggatc gctcgcggct cttaccagcc taacttcgat cattggaccg ctgatcgtca
1741 cggcgattta tgccgcctcg gcgagcacat ggaacgggtt ggcatggatt gtaggcgccg
1801 ccctatacct tgtctgcctc cccgcgttgc gtcgcggtgc atggagccgg gccacctcga
1861 cctgaatgga agccggcggc acctcgctaa cggattcacc actccaagaa ttggagccaa
1921 tcaattcttg cggagaactg tgaatgcgca aaccaaccct tggcagaaca tatccatcgc
1981 gtccgccatc tccagcagcc gcacgcggcg catctcgggc agcgttgggt cctggccacg
2041 ggtgcgcatg atcgtgctcc tgtcgttgag gacccggcta ggctggcggg gttgccttac
2101 tggttagcag aatgaatcac cgatacgcga gcgaacgtga agcgactgct gctgcaaaac
2161 gtctgcgacc tgagcaacaa catgaatggt cttcggtttc cgtgtttcgt aaagtctgga
2221 aacgcggaag tcagcgccct gcaccattat gttccggatc tgcatcgcag gatgctgctg
2281 gctaccctgt ggaacaccta catctgtatt aacgaagcgc tggcattgac ccttgagtga
2341 tttttctctg gtcccgccgc attcataccg ccagttggtt accctcacaa cgttccagta
2401 accgggcatg ttcatcatca gtaacccgta tcgtgagcat cctctctcgt ttcatcggta
2461 tcattacccc catgaacaga aatccccctt acacggaggc atcatgacca aacaggaaaa
2521 aaccgccctt aacatggccc gctttatcag aagccagaca ttaacgcttc tggagaaact
2581 caacgagctg gacgcggatg aacaggcaga catctgtgaa tcgcttcacg accacgctga
2641 tgagctttac cgcagctgcc tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat
2701 gcagctcccg gagacggtca cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg
2761 tcagggcgcg tcagcgggtg ttggcgggtg tcggggcgca gccatgaccc agtcacgtag
2821 cgatagcgga gtgtatactg gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg
2881 caccatatgc ggtgtgaaat accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcaggcgc
2941 tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta
3001 tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag
3061 aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg
3121 tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg
3181 tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg
3241 cgcttctcct gttccgaccc tgccgcttta ccggaatacc tgtccgcctt tctcccttcg
3301 gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc
3361 gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg
3421 gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca
3481 ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt
3541 ggcctaacta cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag
3601 ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg
3661 gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc
3721 ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt
3781 tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt
3841 ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca
3901 gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg
3961 tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac
4021 cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg
4081 ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc
4141 gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgctg
4201 caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac
4261 gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc
4321 ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac
4381 tgcataattc tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact
4441 caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa
4501 cacgggataa taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt
4561 cttcggggcg aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca
4621 ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa
4681 aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac
4741 tcatactctt cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg
4801 gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc
4861 gaaaagtgcc acctgacgtc taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata
4921 ggcgtatcac gaggcccttt cgtcttcgaa taaatacctg tgacggaaga tcacttcgca
4981 gaataaataa atcctggtgt ccctgttgat accgggaagc cctgggccaa cttttggcga
5041 aaatgagacg ttgatcggca cgtaagaggt tccaactttc accataatga aataagatca
5101 ctaccgggcg tattttttga gttatcgaga ttttcaggag ctaaggaagc taaaatggag
5161 aaaaaaatca ctggatatac caccgttgat atatcccaat ggcatcgtaa agaacatttt
5221 gaggcatttc agtcagttgc tcaatgtacc tataaccaga ccgttcagct ggatattacg
5281 gcctttttaa agaccgtaaa gaaaaataag cacaagtttt atccggcctt tattcacatt
5341 cttgcccgcc tgatgaatgc tcatccggaa ttccgtatgg caatgaaaga cggtgagctg
5401 gtgatatggg atagtgttca cccttgttac accgttttcc atgagcaaac tgaaacgttt
5461 tcatcgctct ggagtgaata ccacgacgat ttccggcagt ttctacacat atattcgcaa
5521 gatgtggcgt gttacggtga aaacctggcc tatttcccta aagggtttat tgagaatatg
5581 tttttcgtct cagccaatcc ctgggtgagt ttcaccagtt ttgatttaaa cgtggccaat
5641 atggacaact tcttcgcccc cgttttcacc atgggcaaat attatacgca aggcgacaag
5701 gtgctgatgc cgctggcgat tcaggttcat catgccgttt gtgatggctt ccatgtcggc
5761 agaatgctta atgaattaca acagtactgc gatgagtggc agggcggggc gtaatttttt
5821 taaggcagtt attggtgccc ttaaacgcct ggttgctacg cctgaataag tgataataag
5881 cggatgaatg gcagaaattc gaaagcaaat tcgacccggt cgtcggttca gggcagggtc
5941 gttaaatagc cgcttatgtc tattgctggt ttaccggttt attgactacc ggaagcagtg
6001 tgaccgtgtg cttctcaaat gcctgaggcc agtttgctca ggctctcccc gtggaggtaa
6061 taattgacga tatgatccag ccgaccaggc tttccacgcc cgcgtgccgc tccatgtcgt
6121 tcgcgcggtt ctcggaaacg cgctgccgcg tttcgtgatt gtcacgctca agcccgtagt
6181 cccgttcgag cgtcgcgcag aggtcagcga gggcgcggta ggcccgatac ggctcatgga
6241 tggtgtttcg ggtcgggtga atcttgttga tggcgatatg gatgtgcagg ttgtcggtgt
6301 cgtgatgcac ggcactgacg cgctgatgct cggcgaagcc aagcccagcg cagatgcggt
6361 cctcaatcgc gcgcaacgtc tccgcgtcgg gcttctctcc cgcgcggaag ctaaccagca
6421 ggtgataggt cttgtcggcc tcggaacggg tgttgccgtg ctgggtcgcc atcacctcgg
6481 ccatgacagc gggcagggtg tttgcctcgc agttcgtgac gcgcacgtga cccaagcgct
6541 cggtcttgcc ttgctcgtcg gtgatgtact tcaccagctc cgcgaagtcg ctcttcttga
6601 tggagcgcat ggggacgtgc ttggcaatca cgcgcacccc ccggccgttt tagcggctaa
6661 aaaagtcatg gctctgccct cgggcggacc acgcccatca tgaccttgcc aagctcgtcc
6721 tgcttctctt cgatcttcgc cagcagggcg aggatcgtgg catcaccgaa ccgcgccgtg
6781 cgcgggtcgt cggtgagcca gagtttcagc aggccgccca ggcggcccag gtcgccattg
6841 atgcgggcca gctcgcggac gtgctcatag tccacgacgc ccgtgatttt gtagccctgg
6901 ccgacggcca gcaggtaggc cgacaggctc atgccggccg ccgccgcctt ttcctcaatc
6961 gctcttcgtt cgtctggaag gcagtacacc ttgataggtg ggctgccctt tctggttggc
7021 ttggtttcat cagccatccg cttgccctca tctgttacgc cggcggtagc cggccagcct
7081 cgcagagcag gattcccgtt gagcaccgcc aggtgcgaat aagggacagt gaagaaggaa
7141 cacccgctcg cgggtgggcc tacttcacct atgctgcccg gctgacgccg ttggatacac
7201 caaggaaagt ctacacgaac cctttggcaa aatcctgtat atcgtgcgaa aaaggatgga
7261 tataccgaaa aaatcgctat aatgaccccg aagcagggtt atgcagcgga aaagcgctgc
7321 ttccctgctg ttttgtggaa tatctaccga ctggaaacag gcaaatgcag gaaattactg
7381 aactgagggg acaggcgaga gacgatgcca aagagctaca ccgacgagct ggccgagtgg
7441 gttgaatccc gcgcggccaa gaagcgccgg cgtgatgagg ctgcggttgc gttcctggcg
7501 gtgagggcgg atgtcgaggc ggcgttagcg tccggctatg cgctcgtcac catttgggag
7561 cacatgcggg aaacggggaa ggtcaagttc tcctacgaga cgttccgctc gcacgccagg
7621 cggcacatca aggccaagcc cgccgatgtg cccgcaccgc aggccaaggc tgcggaaccc
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7741 ccggcccccg ctgcggcccc gaccggcttc accttcaacc caacaccgga caaaaaggat
7801 ctactgtaat ggcgaaaatt cacatggttt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pSUP202大肠自杀质粒
别称: pSUP202
| 原核抗性: | Amp,Chl,Tet |
|---|---|
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 基因敲除 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp,Chl,Tet |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
pSUP202是一个大肠杆菌质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7830 bp ds-DNA linear UNA 31-12-2015
DEFINITION natural linear DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pSUP202
SOURCE natural DNA sequence
ORGANISM unspecified
REFERENCE 1 (bases 1 to 7830)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-12-31 from MiaoLingBio
http://www.MiaoLingBio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7830
/organism="unspecified"
/mol_type="genomic DNA"
promoter 599..627
/note="tet promoter"
/note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
gene"
CDS 675..1865
/codon_start=1
/gene="tet"
/product="tetracycline efflux protein"
/note="TcR"
/note="confers resistance to tetracycline"
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LAAAVLNGLNLLLGCFLMQESHKGERRPMPLRAFNPVSSFRWARGMTIVAALMTVFFIM
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AGMAADALGYVLLAFATRGWMAFPIMILLASGGIGMPALQAMLSRQVDDDHQGQLQGSL
AALTSLTSIIGPLIVTAIYAASASTWNGLAWIVGAALYLVCLPALRRGAWSRATST"
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/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
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DELYRSCLARFGDDGENL"
misc_feature 2797..2937
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
CDS complement(3884..4744)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
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EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4745..4849)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 5052..5154
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chloramphenicol acetyltransferase"
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/note="traJ"
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GQGYKITGVVDYEHVRELARINGDLGRLGGLLKLWLTDDPRTARFGDATILALLAKIEE
KQDELGKVMMGVVRPRAEP"
oriT 7070..7179
/note="incP origin of transfer"
ORIGIN
1 gcagggcaag ggcggggtcg gcaagtcggc catcgccgcg atcattgcgc agtacaagat
61 ggacaagggg cagacaccct tgtgcatcga caccgacccg gtgaacgcga cgttcgaggg
121 ctacaaggcc ctgaacgtcc gccggctgaa catcatggcc ggcgacgaaa ttaactcgcg
181 caacttcgac accctggtcg agctgattgc gccgaccaag gatgacgtgg tgatcctcta
241 cgccggacgc atcgtggccg gcatcaccgg cgccacaggt gcggttgctg gcgcctatat
301 cgccgacatc accgatgggg aagatccttg aagctgtccc tgatggtcgt catctacctg
361 cctggacagc atggcctgca acgcgggcat cccgatgccg ccggaagcga gaagaatcat
421 aatggggaag gccatccagc ctcgcgtcgc gaacgccagc aagacgtagc ccagcgcgtc
481 ggccgccatg ccggcgataa tggcctgctt ctcgccgaaa cgtttggtgg cgggaccagt
541 gacgaaggct tgagcgaggg cgtgcaagat tccgaatacc gcaagcgaca ggccatgttt
601 gacagcttat catcgataag ctttaatgcg gtagtttatc acagttaaat tgctaacgca
661 gtcaggcacc gtgtatgaaa tctaacaatg cgctcatcgt catcctcggc accgtcaccc
721 tggatgctgt aggcataggc ttggttatgc cggtactgcc gggcctcttg cgggatatcg
781 tccattccga cagcatcgcc agtcactatg gcgtgctgct agcgctatat gcgttgatgc
841 aatttctatg cgcacccgtt ctcggagcac tgtccgaccg ctttggccgc cgcccagtcc
901 tgctcgcttc gctacttgga gccactatcg actacgcgat catggcgacc acacccgtcc
961 tgtggatcct ctacgccgga cgcatcgtgg ccggcatcac cggcgccaca ggtgcggttg
1021 ctggcgccta tatcgccgac atcaccgatg gggaagatcg ggctcgccac ttcgggctca
1081 tgagcgcttg tttcggcgtg ggtatggtgg caggccccgt ggccggggga ctgttgggcg
1141 ccatctcctt gcatgcacca ttccttgcgg cggcggtgct caacggcctc aacctactac
1201 tgggctgctt cctaatgcag gagtcgcata agggagagcg tcgaccgatg cccttgagag
1261 ccttcaaccc agtcagctcc ttccggtggg cgcggggcat gactatcgtc gccgcactta
1321 tgactgtctt ctttatcatg caactcgtag gacaggtgcc ggcagcgctc tgggtcattt
1381 tcggcgagga ccgctttcgc tggagcgcga cgatgatcgg cctgtcgctt gcggtattcg
1441 gaatcttgca cgccctcgct caagccttcg tcactggtcc cgccaccaaa cgtttcggcg
1501 agaagcaggc cattatcgcc ggcatggcgg ccgacgcgct gggctacgtc ttgctggcgt
1561 tcgcgacgcg aggctggatg gccttcccca ttatgattct tctcgcttcc ggcggcatcg
1621 ggatgcccgc gttgcaggcc atgctgtcca ggcaggtaga tgacgaccat cagggacagc
1681 ttcaaggatc gctcgcggct cttaccagcc taacttcgat cattggaccg ctgatcgtca
1741 cggcgattta tgccgcctcg gcgagcacat ggaacgggtt ggcatggatt gtaggcgccg
1801 ccctatacct tgtctgcctc cccgcgttgc gtcgcggtgc atggagccgg gccacctcga
1861 cctgaatgga agccggcggc acctcgctaa cggattcacc actccaagaa ttggagccaa
1921 tcaattcttg cggagaactg tgaatgcgca aaccaaccct tggcagaaca tatccatcgc
1981 gtccgccatc tccagcagcc gcacgcggcg catctcgggc agcgttgggt cctggccacg
2041 ggtgcgcatg atcgtgctcc tgtcgttgag gacccggcta ggctggcggg gttgccttac
2101 tggttagcag aatgaatcac cgatacgcga gcgaacgtga agcgactgct gctgcaaaac
2161 gtctgcgacc tgagcaacaa catgaatggt cttcggtttc cgtgtttcgt aaagtctgga
2221 aacgcggaag tcagcgccct gcaccattat gttccggatc tgcatcgcag gatgctgctg
2281 gctaccctgt ggaacaccta catctgtatt aacgaagcgc tggcattgac ccttgagtga
2341 tttttctctg gtcccgccgc attcataccg ccagttggtt accctcacaa cgttccagta
2401 accgggcatg ttcatcatca gtaacccgta tcgtgagcat cctctctcgt ttcatcggta
2461 tcattacccc catgaacaga aatccccctt acacggaggc atcatgacca aacaggaaaa
2521 aaccgccctt aacatggccc gctttatcag aagccagaca ttaacgcttc tggagaaact
2581 caacgagctg gacgcggatg aacaggcaga catctgtgaa tcgcttcacg accacgctga
2641 tgagctttac cgcagctgcc tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat
2701 gcagctcccg gagacggtca cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg
2761 tcagggcgcg tcagcgggtg ttggcgggtg tcggggcgca gccatgaccc agtcacgtag
2821 cgatagcgga gtgtatactg gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg
2881 caccatatgc ggtgtgaaat accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcaggcgc
2941 tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta
3001 tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag
3061 aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg
3121 tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg
3181 tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg
3241 cgcttctcct gttccgaccc tgccgcttta ccggaatacc tgtccgcctt tctcccttcg
3301 gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc
3361 gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg
3421 gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca
3481 ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt
3541 ggcctaacta cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag
3601 ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg
3661 gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc
3721 ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt
3781 tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt
3841 ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca
3901 gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg
3961 tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac
4021 cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg
4081 ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc
4141 gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgctg
4201 caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac
4261 gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc
4321 ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac
4381 tgcataattc tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact
4441 caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa
4501 cacgggataa taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt
4561 cttcggggcg aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca
4621 ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa
4681 aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac
4741 tcatactctt cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg
4801 gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc
4861 gaaaagtgcc acctgacgtc taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata
4921 ggcgtatcac gaggcccttt cgtcttcgaa taaatacctg tgacggaaga tcacttcgca
4981 gaataaataa atcctggtgt ccctgttgat accgggaagc cctgggccaa cttttggcga
5041 aaatgagacg ttgatcggca cgtaagaggt tccaactttc accataatga aataagatca
5101 ctaccgggcg tattttttga gttatcgaga ttttcaggag ctaaggaagc taaaatggag
5161 aaaaaaatca ctggatatac caccgttgat atatcccaat ggcatcgtaa agaacatttt
5221 gaggcatttc agtcagttgc tcaatgtacc tataaccaga ccgttcagct ggatattacg
5281 gcctttttaa agaccgtaaa gaaaaataag cacaagtttt atccggcctt tattcacatt
5341 cttgcccgcc tgatgaatgc tcatccggaa ttccgtatgg caatgaaaga cggtgagctg
5401 gtgatatggg atagtgttca cccttgttac accgttttcc atgagcaaac tgaaacgttt
5461 tcatcgctct ggagtgaata ccacgacgat ttccggcagt ttctacacat atattcgcaa
5521 gatgtggcgt gttacggtga aaacctggcc tatttcccta aagggtttat tgagaatatg
5581 tttttcgtct cagccaatcc ctgggtgagt ttcaccagtt ttgatttaaa cgtggccaat
5641 atggacaact tcttcgcccc cgttttcacc atgggcaaat attatacgca aggcgacaag
5701 gtgctgatgc cgctggcgat tcaggttcat catgccgttt gtgatggctt ccatgtcggc
5761 agaatgctta atgaattaca acagtactgc gatgagtggc agggcggggc gtaatttttt
5821 taaggcagtt attggtgccc ttaaacgcct ggttgctacg cctgaataag tgataataag
5881 cggatgaatg gcagaaattc gaaagcaaat tcgacccggt cgtcggttca gggcagggtc
5941 gttaaatagc cgcttatgtc tattgctggt ttaccggttt attgactacc ggaagcagtg
6001 tgaccgtgtg cttctcaaat gcctgaggcc agtttgctca ggctctcccc gtggaggtaa
6061 taattgacga tatgatccag ccgaccaggc tttccacgcc cgcgtgccgc tccatgtcgt
6121 tcgcgcggtt ctcggaaacg cgctgccgcg tttcgtgatt gtcacgctca agcccgtagt
6181 cccgttcgag cgtcgcgcag aggtcagcga gggcgcggta ggcccgatac ggctcatgga
6241 tggtgtttcg ggtcgggtga atcttgttga tggcgatatg gatgtgcagg ttgtcggtgt
6301 cgtgatgcac ggcactgacg cgctgatgct cggcgaagcc aagcccagcg cagatgcggt
6361 cctcaatcgc gcgcaacgtc tccgcgtcgg gcttctctcc cgcgcggaag ctaaccagca
6421 ggtgataggt cttgtcggcc tcggaacggg tgttgccgtg ctgggtcgcc atcacctcgg
6481 ccatgacagc gggcagggtg tttgcctcgc agttcgtgac gcgcacgtga cccaagcgct
6541 cggtcttgcc ttgctcgtcg gtgatgtact tcaccagctc cgcgaagtcg ctcttcttga
6601 tggagcgcat ggggacgtgc ttggcaatca cgcgcacccc ccggccgttt tagcggctaa
6661 aaaagtcatg gctctgccct cgggcggacc acgcccatca tgaccttgcc aagctcgtcc
6721 tgcttctctt cgatcttcgc cagcagggcg aggatcgtgg catcaccgaa ccgcgccgtg
6781 cgcgggtcgt cggtgagcca gagtttcagc aggccgccca ggcggcccag gtcgccattg
6841 atgcgggcca gctcgcggac gtgctcatag tccacgacgc ccgtgatttt gtagccctgg
6901 ccgacggcca gcaggtaggc cgacaggctc atgccggccg ccgccgcctt ttcctcaatc
6961 gctcttcgtt cgtctggaag gcagtacacc ttgataggtg ggctgccctt tctggttggc
7021 ttggtttcat cagccatccg cttgccctca tctgttacgc cggcggtagc cggccagcct
7081 cgcagagcag gattcccgtt gagcaccgcc aggtgcgaat aagggacagt gaagaaggaa
7141 cacccgctcg cgggtgggcc tacttcacct atgctgcccg gctgacgccg ttggatacac
7201 caaggaaagt ctacacgaac cctttggcaa aatcctgtat atcgtgcgaa aaaggatgga
7261 tataccgaaa aaatcgctat aatgaccccg aagcagggtt atgcagcgga aaagcgctgc
7321 ttccctgctg ttttgtggaa tatctaccga ctggaaacag gcaaatgcag gaaattactg
7381 aactgagggg acaggcgaga gacgatgcca aagagctaca ccgacgagct ggccgagtgg
7441 gttgaatccc gcgcggccaa gaagcgccgg cgtgatgagg ctgcggttgc gttcctggcg
7501 gtgagggcgg atgtcgaggc ggcgttagcg tccggctatg cgctcgtcac catttgggag
7561 cacatgcggg aaacggggaa ggtcaagttc tcctacgaga cgttccgctc gcacgccagg
7621 cggcacatca aggccaagcc cgccgatgtg cccgcaccgc aggccaaggc tgcggaaccc
7681 gcgccggcac ccaagacgcc ggagccacgg cggccgaagc aggggggcaa ggctgaaaag
7741 ccggcccccg ctgcggcccc gaccggcttc accttcaacc caacaccgga caaaaaggat
7801 ctactgtaat ggcgaaaatt cacatggttt
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1364/pSNAP-tag(T7)2-His大肠表达质粒 |
| P2163/His-LacZ大肠报告质粒 |
| P3065/pSMART LCKan质粒 |
| P3220/pMIND质粒 |
| P0155/pCDNA3.0哺乳表达质粒 |
| P0942/pCDNA3-HA-N哺乳表达质粒 |
| P0156/pCDNA3.1(-)哺乳表达质粒 |
| P0157/pCDNA3.1(+)哺乳表达质粒 |
| P0417/pCDNA3.1-Zeo哺乳表达质粒 |
| P3066/pCDNA3.1-HA-Hygro哺乳表达质粒 |
| P1266/pCDNA3.1-Hygro哺乳表达质粒 |
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pSUP202大肠自杀质粒
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