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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
MG15-Luc (mut p53 binding sites)
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:MG15-luc (mut p53 binding sites) 哺乳报告质粒
别称: MG15-Luc (mut p53 binding sites)
| 原核抗性: | Amp |
|---|---|
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主: | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途: | 信号报告 |
| 基因种属: | |
| 基因类型: | |
| 原核抗性: | Amp |
| 真核抗性: | |
| 荧光蛋白: | fLuc |
质粒简介
MG15-luc (mut p53 binding sites)质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6013 bp ds-DNA circular SYN 27-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6013)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 27, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6013
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 9..178
/label=mut p53 binding sites
CDS 480..2132
/codon_start=1
/gene="luc"
/product="firefly luciferase"
/label=luciferase
/translation="MEDAKNIKKGPAPFYPLEDGTAGEQLHKAMKRYALVPGTIAFTDA
HIEVNITYAEYFEMSVRLAEAMKRYGLNTNHRIVVCSENSLQFFMPVLGALFIGVAVAP
ANDIYNERELLNSMNISQPTVVFVSKKGLQKILNVQKKLPIIQKIIIMDSKTDYQGFQS
MYTFVTSHLPPGFNEYDFVPESFDRDKTIALIMNSSGSTGLPKGVALPHRTACVRFSHA
RDPIFGNQIIPDTAILSVVPFHHGFGMFTTLGYLICGFRVVLMYRFEEELFLRSLQDYK
IQSALLVPTLFSFFAKSTLIDKYDLSNLHEIASGGAPLSKEVGEAVAKRFHLPGIRQGY
GLTETTSAILITPEGDDKPGAVGKVVPFFEAKVVDLDTGKTLGVNQRGELCVRGPMIMS
GYVNNPEATNALIDKDGWLHSGDIAYWDEDEHFFIVDRLKSLIKYKGYQVAPAELESIL
LQHPNIFDAGVAGLPDDDAGELPAAVVVLEHGKTMTEKEIVDYVASQVTTAKKLRGGVV
FVDEVPKGLTGKLDARKIREILIKAKKGGKSKL"
intron 2263..2328
/label=small t intron
/note="SV40 (simian virus 40) small t antigen intron"
CDS 2458..2478
/codon_start=1
/product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
40) large T antigen"
/label=SV40 NLS
/translation="PKKKRKV"
polyA_signal 2903..3037
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(3580..4168)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4339..5199)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5200..5304)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
rep_origin complement(5330..5785)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 5950..5968
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
ORIGIN
1 agcttgatcc ttaatggact ttaatggcct tatggacttt aatggcctta atggacttta
61 atggccttaa tggactttaa tggccttaat ggactttaat ggccttaatg gactttaatg
121 gccttaatgg actttaatgg ccttaatgga ctttaatggc cttaatggac tttaatggcc
181 atcgaattcg atctgttttt tttagtatta agcagaggcc gggggcccct ggcctccgct
241 tactctggag aaaaagaaga gaggcattcc agaggcaact tgtcaaaaca ggactggcgc
301 cttggaggcg ctgtggggcc acccaaattg atataattaa gccccaaccg cctcttcccg
361 cctcatttca gcctcaccac cctcgacaag cttatcgata ccgtcggggg atccactagt
421 tctagagcgg ccgccaccgc ggtggagctc gagcttggca ttccggtact gttggtaaaa
481 tggaagacgc caaaaacata aagaaaggcc cggcgccatt ctatcctcta gaggatggaa
541 ccgctggaga gcaactgcat aaggctatga agagatacgc cctggttcct ggaacaattg
601 cttttacaga tgcacatatc gaggtgaaca tcacgtacgc ggaatacttc gaaatgtccg
661 ttcggttggc agaagctatg aaacgatatg ggctgaatac aaatcacaga atcgtcgtat
721 gcagtgaaaa ctctcttcaa ttctttatgc cggtgttggg cgcgttattt atcggagttg
781 cagttgcgcc cgcgaacgac atttataatg aacgtgaatt gctcaacagt atgaacattt
841 cgcagcctac cgtagtgttt gtttccaaaa aggggttgca aaaaattttg aacgtgcaaa
901 aaaaattacc aataatccag aaaattatta tcatggattc taaaacggat taccagggat
961 ttcagtcgat gtacacgttc gtcacatctc atctacctcc cggttttaat gaatacgatt
1021 ttgtaccaga gtcctttgat cgtgacaaaa caattgcact gataatgaat tcctctggat
1081 ctactgggtt acctaagggt gtggcccttc cgcatagaac tgcctgcgtc agattctcgc
1141 atgccagaga tcctattttt ggcaatcaaa tcattccgga tactgcgatt ttaagtgttg
1201 ttccattcca tcacggtttt ggaatgttta ctacactcgg atatttgata tgtggatttc
1261 gagtcgtctt aatgtataga tttgaagaag agctgttttt acgatccctt caggattaca
1321 aaattcaaag tgcgttgcta gtaccaaccc tattttcatt cttcgccaaa agcactctga
1381 ttgacaaata cgatttatct aatttacacg aaattgcttc tgggggcgca cctctttcga
1441 aagaagtcgg ggaagcggtt gcaaaacgct tccatcttcc agggatacga caaggatatg
1501 ggctcactga gactacatca gctattctga ttacacccga gggggatgat aaaccgggcg
1561 cggtcggtaa agttgttcca ttttttgaag cgaaggttgt ggatctggat accgggaaaa
1621 cgctgggcgt taatcagaga ggcgaattat gtgtcagagg acctatgatt atgtccggtt
1681 atgtaaacaa tccggaagcg accaacgcct tgattgacaa ggatggatgg ctacattctg
1741 gagacatagc ttactgggac gaagacgaac acttcttcat agttgaccgc ttgaagtctt
1801 taattaaata caaaggatat caggtggccc ccgctgaatt ggaatcgata ttgttacaac
1861 accccaacat cttcgacgcg ggcgtggcag gtcttcccga cgatgacgcc ggtgaacttc
1921 ccgccgccgt tgttgttttg gagcacggaa agacgatgac ggaaaaagag atcgtggatt
1981 acgtcgccag tcaagtaaca accgcgaaaa agttgcgcgg aggagttgtg tttgtggacg
2041 aagtaccgaa aggtcttacc ggaaaactcg acgcaagaaa aatcagagag atcctcataa
2101 aggccaagaa gggcggaaag tccaaattgt aaaatgtaac tgtattcagc gatgacgaaa
2161 ttcttagcta ttgtaatact ctagaggatc tttgtgaagg aaccttactt ctgtggtgtg
2221 acataattgg acaaactacc tacagagatt taaagctcta aggtaaatat aaaattttta
2281 agtgtataat gtgttaaact actgattcta attgtttgtg tattttagat tccaacctat
2341 ggaactgatg aatgggagca gtggtggaat gcctttaatg aggaaaacct gttttgctca
2401 gaagaaatgc catctagtga tgatgaggct actgctgact ctcaacattc tactcctcca
2461 aaaaagaaga gaaaggtaga agaccccaag gactttcctt cagaattgct aagttttttg
2521 agtcatgctg tgtttagtaa tagaactctt gcttgctttg ctatttacac cacaaaggaa
2581 aaagctgcac tgctatacaa gaaaattatg gaaaaatatt ctgtaacctt tataagtagg
2641 cataacagtt ataatcataa catactgttt tttcttactc cacacaggca tagagtgtct
2701 gctattaata actatgctca aaaattgtgt acctttagct ttttaatttg taaaggggtt
2761 aataaggaat atttgatgta tagtgccttg actagagatc ataatcagcc ataccacatt
2821 tgtagaggtt ttacttgctt taaaaaacct cccacacctc cccctgaacc tgaaacataa
2881 aatgaatgca attgttgttg ttaacttgtt tattgcagct tataatggtt acaaataaag
2941 caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca ctgcattcta gttgtggttt
3001 gtccaaactc atcaatgtat cttatcatgt ctggatccac tagttctaga gcggccgcca
3061 ccgcggtgga gctccagctt ttgttccctt tagtgagggt taatttcgag cttggcgtaa
3121 tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata
3181 cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta
3241 attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa
3301 tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcatt aatgaatcgg
3361 ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga
3421 ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat
3481 acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca
3541 aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc
3601 tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata
3661 aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc
3721 gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc
3781 acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga
3841 accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc
3901 ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag
3961 gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag
4021 aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag
4081 ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca
4141 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga
4201 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat
4261 cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga
4321 gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg
4381 tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga
4441 gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc
4501 agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac
4561 tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc
4621 agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc
4681 gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc
4741 catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt
4801 ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc
4861 atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg
4921 tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag
4981 cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat
5041 cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc
5101 atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa
5161 aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta
5221 ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
5281 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccaccta aattgtaagc
5341 gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa tcagctcatt ttttaaccaa
5401 taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat agaccgagat agggttgagt
5461 gttgttccag tttggaacaa gagtccacta ttaaagaacg tggactccaa cgtcaaaggg
5521 cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca ctacgtgaac catcacccta atcaagtttt
5581 ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat cggaacccta aagggagccc ccgatttaga
5641 gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg agaaaggaag ggaagaaagc gaaaggagcg
5701 ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc acgctgcgcg taaccaccac acccgccgcg
5761 cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtcccat tcgccattca ggctgcgcaa ctgttgggaa
5821 gggcgatcgg tgcgggcctc ttcgctatta cgccagctgg cgaaaggggg atgtgctgca
5881 aggcgattaa gttgggtaac gccagggttt tcccagtcac gacgttgtaa aacgacggcc
5941 agtgaattgt aatacgactc actatagggc gaattgggta ccgggccccc cctcgaggtc
6001 gacggtatcg ata
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P3598/pCMV-SPORT6-IFRD1人源基因质粒 |
| P3599/pCMV-SPORT6-TTC4-T139A人源基因质粒 |
| P3600/pCMV-SPORT6-ASB9人源基因质粒 |
| P3601/pCMV-SPORT6-VWA5A人源基因质粒 |
| P3602/pCMV-SPORT6-FADS2人源基因质粒 |
| P3603/pCMV-SPORT6-PIGG人源基因质粒 |
| P3604/pCMV-SPORT6-KIAA1429人源基因质粒 |
| P3605/pCMV-SPORT6-FANCA(点突变)人源基因质粒 |
| P4211/pCMV-SPORT6-ODF2人源基因质粒 |
| P4212/pCMV-SPORT6-GFM2人源基因质粒 |
| P4213/pCMV-SPORT6-SIPA1人源基因质粒 |
| P4214/pCMV-SPORT6-APIP人源基因质粒 |
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寡核苷酸(luc siRNA)。检测存在和不存在luc siRNA时荧光素酶和β-gal的活性。尽管luc siRNA对β-gal的活性没有影响,但是荧光素酶的活性却明显被抑制。荧光素酶对β-gal的比率证明了siRNA抑制基因的活性的特异性和有效性。 最有效地转染siRNA 通过Lipofectamine™ 2000试剂成功地转染siRNA,在种类广泛的细胞中导致基因表达的明显阻断(图7)。使用Lipofectamine™ 2000转染你的siRNA,你将获得: · 在哺乳动物细胞中进行有效











