- ￥700
- 烜雅生物
- XY-ZL0190
- 国产
- 2026年01月20日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
170
- 英文名：
pET-32a(+)-ORF7A plasmid
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
质粒干粉
英文名称：pET-32a(+)-ORF7A plasmid
形式：质粒干粉
参考用途：质粒载体
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：LB+氨苄青霉素，37℃，克隆菌株BL21(DE3)
存储条件：2-8℃
安全等级：1
操作步骤：
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10μl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800μl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 μl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。
7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
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文献和实验（ DE3 ）表达的活性蛋白比其它宿主菌高 10 倍以上。 Origami 宿主菌与氨苄抗性质粒相容，可用于 pET-32 载体，硫氧还蛋白标签能够进一步增强在胞浆内形成二硫键。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。 Origami B 宿主菌来源于 BL21 lacZY 突变株，还带有与原始 Origami 菌株相同的 TrxB / gor 突变。 Origami B 菌株集 BL21 、 Tuner
编码区的基因片段，其由5'末端的stat密码子（ATG）和3'末端的终止密码子（TAA，TAG或TGA）结合。然后将目的基因片段插入pMD18-T载体中以构建重组质粒，通过DNA测序鉴定。用指定的酶消化重组pMD18-T质粒，并通过以下方案将检索到的目的DNA片段亚克隆到pET-32α（+）载体中以产生重组表达载体。将约129bp的TBO基因片段插入pET-32α（+）载体（5900bp）用相同的限制酶在37℃消化pET-32α（+）载体和重组pMD18-T载体1小时，然后通过在65℃温育10分钟
查、基因筛选及图位克隆有益基因的最好材料，也是永久保存基因资源的最好方法之一。 至于作用就太多了，你自己google一下，发现的是你好多做不了，而不是不知道怎么做？ huangyuan62 楼主,请问能交换你的BAC质粒吗？pBACe3.6,pBeloBAC11等都可以。 本人有以下质粒和菌种,可全部用于交换 pET28a,pET32a,pETDsb,pETGST,pETTrx，pTrc—CKS, pGEX4T
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