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- 详细信息
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pNFkB-TA-Luc
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pNF-kB-TA-LUC哺乳报告质粒
别称: pNFkB-TA-Luc
质粒属性
质粒简介
pNF-KB-TA-LUC哺乳报告质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4902 bp ds-DNA circular SYN 13-MAR-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4902)
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4902
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 34..73
/label=NFkB
promoter 86..117
/label=minP
/note="minimal TATA-box promoter with low basal activity"
regulatory 173..182
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 179..1831
/codon_start=1
/gene="luc+"
/product="firefly luciferase"
/label=luciferase
/note="enhanced luc+ version of the luciferase gene"
/translation="MEDAKNIKKGPAPFYPLEDGTAGEQLHKAMKRYALVPGTIAFTDA
HIEVDITYAEYFEMSVRLAEAMKRYGLNTNHRIVVCSENSLQFFMPVLGALFIGVAVAP
ANDIYNERELLNSMGISQPTVVFVSKKGLQKILNVQKKLPIIQKIIIMDSKTDYQGFQS
MYTFVTSHLPPGFNEYDFVPESFDRDKTIALIMNSSGSTGLPKGVALPHRTACVRFSHA
RDPIFGNQIIPDTAILSVVPFHHGFGMFTTLGYLICGFRVVLMYRFEEELFLRSLQDYK
IQSALLVPTLFSFFAKSTLIDKYDLSNLHEIASGGAPLSKEVGEAVAKRFHLPGIRQGY
GLTETTSAILITPEGDDKPGAVGKVVPFFEAKVVDLDTGKTLGVNQRGELCVRGPMIMS
GYVNNPEATNALIDKDGWLHSGDIAYWDEDEHFFIVDRLKSLIKYKGYQVAPAELESIL
LQHPNIFDAGVAGLPDDDAGELPAAVVVLEHGKTMTEKEIVDYVASQVTTAKKLRGGVV
FVDEVPKGLTGKLDARKIREILIKAKKGGKIAV"
polyA_signal 1872..1993
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2412..3000)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3171..4031)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4032..4136)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
rep_origin 4163..4618
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
polyA_signal 4749..4797
/note="synthetic polyadenylation signal"
misc_feature 4811..4902
/label=pause site
/note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from
the human alpha-2 globin gene"
BASE COUNT 1275 a 1159 c 1181 g 1286 t
ORIGIN
1 atcgataggt accgagctct tacgcgtgct agcgggaatt tccgggaatt tccgggaatt
61 tccgggaatt tccagatcta gactctagag ggtatataat ggaagctcga attccagctt
121 ggcattccgg tactgttggt aaaaagcttg gcattccggt actgttggta aagccaccat
181 ggaagacgcc aaaaacataa agaaaggccc ggcgccattc tatccgctgg aagatggaac
241 cgctggagag caactgcata aggctatgaa gagatacgcc ctggttcctg gaacaattgc
301 ttttacagat gcacatatcg aggtggacat cacttacgct gagtacttcg aaatgtccgt
361 tcggttggca gaagctatga aacgatatgg gctgaataca aatcacagaa tcgtcgtatg
421 cagtgaaaac tctcttcaat tctttatgcc ggtgttgggc gcgttattta tcggagttgc
481 agttgcgccc gcgaacgaca tttataatga acgtgaattg ctcaacagta tgggcatttc
541 gcagcctacc gtggtgttcg tttccaaaaa ggggttgcaa aaaattttga acgtgcaaaa
601 aaagctccca atcatccaaa aaattattat catggattct aaaacggatt accagggatt
661 tcagtcgatg tacacgttcg tcacatctca tctacctccc ggttttaatg aatacgattt
721 tgtgccagag tccttcgata gggacaagac aattgcactg atcatgaact cctctggatc
781 tactggtctg cctaaaggtg tcgctctgcc tcatagaact gcctgcgtga gattctcgca
841 tgccagagat cctatttttg gcaatcaaat cattccggat actgcgattt taagtgttgt
901 tccattccat cacggttttg gaatgtttac tacactcgga tatttgatat gtggatttcg
961 agtcgtctta atgtatagat ttgaagaaga gctgtttctg aggagccttc aggattacaa
1021 gattcaaagt gcgctgctgg tgccaaccct attctccttc ttcgccaaaa gcactctgat
1081 tgacaaatac gatttatcta atttacacga aattgcttct ggtggcgctc ccctctctaa
1141 ggaagtcggg gaagcggttg ccaagaggtt ccatctgcca ggtatcaggc aaggatatgg
1201 gctcactgag actacatcag ctattctgat tacacccgag ggggatgata aaccgggcgc
1261 ggtcggtaaa gttgttccat tttttgaagc gaaggttgtg gatctggata ccgggaaaac
1321 gctgggcgtt aatcaaagag gcgaactgtg tgtgagaggt cctatgatta tgtccggtta
1381 tgtaaacaat ccggaagcga ccaacgcctt gattgacaag gatggatggc tacattctgg
1441 agacatagct tactgggacg aagacgaaca cttcttcatc gttgaccgcc tgaagtctct
1501 gattaagtac aaaggctatc aggtggctcc cgctgaattg gaatccatct tgctccaaca
1561 ccccaacatc ttcgacgcag gtgtcgcagg tcttcccgac gatgacgccg gtgaacttcc
1621 cgccgccgtt gttgttttgg agcacggaaa gacgatgacg gaaaaagaga tcgtggatta
1681 cgtcgccagt caagtaacaa ccgcgaaaaa gttgcgcgga ggagttgtgt ttgtggacga
1741 agtaccgaaa ggtcttaccg gaaaactcga cgcaagaaaa atcagagaga tcctcataaa
1801 ggccaagaag ggcggaaaga tcgccgtgta attctagagt cggggcggcc ggccgcttcg
1861 agcagacatg ataagataca ttgatgagtt tggacaaacc acaactagaa tgcagtgaaa
1921 aaaatgcttt atttgtgaaa tttgtgatgc tattgcttta tttgtaacca ttataagctg
1981 caataaacaa gttaacaaca acaattgcat tcattttatg tttcaggttc agggggaggt
2041 gtgggaggtt ttttaaagca agtaaaacct ctacaaatgt ggtaaaatcg ataaggatcc
2101 gtcgaccgat gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca
2161 tgactatcgt cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc
2221 cggcagcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg
2281 cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac
2341 gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg
2401 ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca
2461 agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc
2521 tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc
2581 ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag
2641 gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc
2701 ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca
2761 gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg
2821 aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat ttggtatctg cgctctgctg
2881 aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct
2941 ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa
3001 gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa
3061 gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa
3121 tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc
3181 ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga
3241 ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca
3301 atgataccgc gagacccacg ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc
3361 ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat
3421 tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc
3481 attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt
3541 tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc
3601 ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg
3661 gcagcactgc ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt
3721 gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg
3781 gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga
3841 aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg
3901 taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg
3961 tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt
4021 tgaatactca tactcttcct ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc
4081 atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca
4141 tttccccgaa aagtgccacc tgacgcgccc tgtagcggcg cattaagcgc ggcgggtgtg
4201 gtggttacgc gcagcgtgac cgctacactt gccagcgccc tagcgcccgc tcctttcgct
4261 ttcttccctt cctttctcgc cacgttcgcc ggctttcccc gtcaagctct aaatcggggg
4321 ctccctttag ggttccgatt tagtgcttta cggcacctcg accccaaaaa acttgattag
4381 ggtgatggtt cacgtagtgg gccatcgccc tgatagacgg tttttcgccc tttgacgttg
4441 gagtccacgt tctttaatag tggactcttg ttccaaactg gaacaacact caaccctatc
4501 tcggtctatt cttttgattt ataagggatt ttgccgattt cggcctattg gttaaaaaat
4561 gagctgattt aacaaaaatt taacgcgaat tttaacaaaa tattaacgct tacaatttgc
4621 cattcgccat tcaggctgcg caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta
4681 ttacgccagc ccaagctacc atgataagta agtaatatta aggtacggga ggtacttgga
4741 gcggccgcaa taaaatatct ttattttcat tacatctgtg tgttggtttt ttgtgtgaat
4801 cgatagtact aacatacgct ctccatcaaa acaaaacgaa acaaaacaaa ctagcaaaat
4861 aggctgtccc cagtgcaagt gcaggtgcca gaacatttct ct
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pNF-kB-TA-LUC哺乳报告质粒
别称: pNFkB-TA-Luc
| 启动子: | TK |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，信号通路报告载体 |
| 质粒大小: | 4.9kb |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | Sv40-polyA-R：GAAATTTGTGATGCTATTGC |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 启动子检测 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | Promoter |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： | fLuc |
质粒简介
pNF-KB-TA-LUC哺乳报告质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4902 bp ds-DNA circular SYN 13-MAR-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4902)
FEATURES Location/Qualifiers
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/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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promoter 86..117
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/note="minimal TATA-box promoter with low basal activity"
regulatory 173..182
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/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 179..1831
/codon_start=1
/gene="luc+"
/product="firefly luciferase"
/label=luciferase
/note="enhanced luc+ version of the luciferase gene"
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GLTETTSAILITPEGDDKPGAVGKVVPFFEAKVVDLDTGKTLGVNQRGELCVRGPMIMS
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replication"
CDS complement(3171..4031)
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related antibiotics"
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PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
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/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
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polyA_signal 4749..4797
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misc_feature 4811..4902
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the human alpha-2 globin gene"
BASE COUNT 1275 a 1159 c 1181 g 1286 t
ORIGIN
1 atcgataggt accgagctct tacgcgtgct agcgggaatt tccgggaatt tccgggaatt
61 tccgggaatt tccagatcta gactctagag ggtatataat ggaagctcga attccagctt
121 ggcattccgg tactgttggt aaaaagcttg gcattccggt actgttggta aagccaccat
181 ggaagacgcc aaaaacataa agaaaggccc ggcgccattc tatccgctgg aagatggaac
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421 cagtgaaaac tctcttcaat tctttatgcc ggtgttgggc gcgttattta tcggagttgc
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1201 gctcactgag actacatcag ctattctgat tacacccgag ggggatgata aaccgggcgc
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1321 gctgggcgtt aatcaaagag gcgaactgtg tgtgagaggt cctatgatta tgtccggtta
1381 tgtaaacaat ccggaagcga ccaacgcctt gattgacaag gatggatggc tacattctgg
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1861 agcagacatg ataagataca ttgatgagtt tggacaaacc acaactagaa tgcagtgaaa
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1981 caataaacaa gttaacaaca acaattgcat tcattttatg tttcaggttc agggggaggt
2041 gtgggaggtt ttttaaagca agtaaaacct ctacaaatgt ggtaaaatcg ataaggatcc
2101 gtcgaccgat gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca
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2221 cggcagcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg
2281 cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac
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2881 aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct
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3121 tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc
3181 ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga
3241 ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca
3301 atgataccgc gagacccacg ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc
3361 ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat
3421 tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
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