pGL4.29[luc2P-CRE-Hygro]哺乳报告质粒

基本信息
名称：pGL4.29[luc2P-CRE-Hygro]哺乳报告质粒
别称: pGL4.29[luc2P-CRE-Hygro]

启动子:	CRE
复制子:	pUC
终止子:	SV40 poly(A) signal
质粒分类:	哺乳细胞，信号通路报告载体
质粒大小:	6084bp
原核抗性:	Amp
筛选标记:	Hyg
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	哺乳细胞
诱导方式:	无须诱导，瞬时表达
5'测序引物:	RVP3:CTAGCAAAATAGGCTGTCCC
3'测序引物:	根据序列设计引物

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	启动子检测
基因种属：	空载体
基因类型：	Promoter
原核抗性：	Amp
真核抗性：	Hyg
荧光蛋白：	fLuc

质粒简介
The pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro] Vector(a–f) contains a cAMP response element (CRE) that drives the transcription of the luciferase reporter gene luc2P (Photinus pyralis). luc2P is a synthetically-derived luciferase sequence with humanized codon optimization that is designed for high expression and reduced anomalous transcription. The luc2P gene contains hPEST, a protein destabilization sequence. The protein encoded by luc2P responds more quickly than the protein encoded by the luc2 gene upon induction. The vector backbone contains an ampicillin resistance gene to allow selection in E. coli and a mammalian selectable marker for hygromycin resistance
 
质粒图谱


质粒序列

LOCUS       Exported                6084 bp ds-DNA     circular SYN 04-SEP-2016
DEFINITION  Vector with a minimal promoter and a cAMP response element for 
            studying cell signaling using destabilized luciferase.
ACCESSION   DQ904461
VERSION     .
KEYWORDS    pGL4.29[luc2PCREHygro]
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 6084)
  AUTHORS   Promega
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6084
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /lab_host="Mammalian Cells"
                     /mol_type="other DNA"
     protein_bind    44..109
                     /bound_moiety="cAMP response element-binding protein CREB"
                     /note="CRE"
                     /note="cyclic AMP response element (3 copies)"
     promoter        151..182
                     /note="minP"
                     /note="minimal TATA-box promoter with low basal activity"
     CDS             215..1864
                     /codon_start=1
                     /product="firefly luciferase"
                     /note="luciferase"
                     /note="synthetic luc2 version of the luciferase gene"
                     /translation="MEDAKNIKKGPAPFYPLEDGTAGEQLHKAMKRYALVPGTIAFTDA
                     HIEVDITYAEYFEMSVRLAEAMKRYGLNTNHRIVVCSENSLQFFMPVLGALFIGVAVAP
                     ANDIYNERELLNSMGISQPTVVFVSKKGLQKILNVQKKLPIIQKIIIMDSKTDYQGFQS
                     MYTFVTSHLPPGFNEYDFVPESFDRDKTIALIMNSSGSTGLPKGVALPHRTACVRFSHA
                     RDPIFGNQIIPDTAILSVVPFHHGFGMFTTLGYLICGFRVVLMYRFEEELFLRSLQDYK
                     IQSALLVPTLFSFFAKSTLIDKYDLSNLHEIASGGAPLSKEVGEAVAKRFHLPGIRQGY
                     GLTETTSAILITPEGDDKPGAVGKVVPFFEAKVVDLDTGKTLGVNQRGELCVRGPMIMS
                     GYVNNPEATNALIDKDGWLHSGDIAYWDEDEHFFIVDRLKSLIKYKGYQVAPAELESIL
                     LQHPNIFDAGVAGLPDDDAGELPAAVVVLEHGKTMTEKEIVDYVASQVTTAKKLRGGVV
                     FVDEVPKGLTGKLDARKIREILIKAKKGGKIAV"
     CDS             1868..1987
                     /codon_start=1
                     /product="PEST degradation sequence from mouse ornithine 
                     decarboxylase"
                     /note="hPEST"
                     /note="human codon-optimized"
                     /translation="SHGFPPEVEEQAAGTLPMSCAQESGMDRHPAACASARINV"
     polyA_signal    2039..2160
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     promoter        2354..2711
                     /note="SV40 promoter"
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     CDS             2742..3779
                     /codon_start=1
                     /product="hygromycin B phosphotransferase"
                     /note="HygR"
                     /note="confers resistance to hygromycin"
                     /translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG
                     YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLP
                     ETELPAVLQPVAEAMD-AIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ
                     TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF
                     GDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG
                     NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPRAK
                     EVGRV"
     polyA_signal    3803..3851
                     /note="synthetic polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(4178..4766)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(4966..5826)
                     /codon_start=1
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     polyA_signal    5931..5979
                     /note="synthetic polyadenylation signal"
     misc_feature    5993..6084
                     /note="pause site"
                     /note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from 
                     the human alpha-2 globin gene"
ORIGIN
        1 ggcctaactg gccggtacct gagctcgcta gcgcaccaga cagtgacgtc agctgccaga
       61 tcccatggcc gtcatactgt gacgtctttc agacacccca ttgacgtcaa tgggagaaca
      121 gatctggcct cggcggccaa gcttagacac tagagggtat ataatggaag ctcgacttcc
      181 agcttggcaa tccggtactg ttggtaaagc caccatggaa gatgccaaaa acattaagaa
      241 gggcccagcg ccattctacc cactcgaaga cgggaccgcc ggcgagcagc tgcacaaagc
      301 catgaagcgc tacgccctgg tgcccggcac catcgccttt accgacgcac atatcgaggt
      361 ggacattacc tacgccgagt acttcgagat gagcgttcgg ctggcagaag ctatgaagcg
      421 ctatgggctg aatacaaacc atcggatcgt ggtgtgcagc gagaatagct tgcagttctt
      481 catgcccgtg ttgggtgccc tgttcatcgg tgtggctgtg gccccagcta acgacatcta
      541 caacgagcgc gagctgctga acagcatggg catcagccag cccaccgtcg tattcgtgag
      601 caagaaaggg ctgcaaaaga tcctcaacgt gcaaaagaag ctaccgatca tacaaaagat
      661 catcatcatg gatagcaaga ccgactacca gggcttccaa agcatgtaca ccttcgtgac
      721 ttcccatttg ccacccggct tcaacgagta cgacttcgtg cccgagagct tcgaccggga
      781 caaaaccatc gccctgatca tgaacagtag tggcagtacc ggattgccca agggcgtagc
      841 cctaccgcac cgcaccgctt gtgtccgatt cagtcatgcc cgcgacccca tcttcggcaa
      901 ccagatcatc cccgacaccg ctatcctcag cgtggtgcca tttcaccacg gcttcggcat
      961 gttcaccacg ctgggctact tgatctgcgg ctttcgggtc gtgctcatgt accgcttcga
     1021 ggaggagcta ttcttgcgca gcttgcaaga ctataagatt caatctgccc tgctggtgcc
     1081 cacactattt agcttcttcg ctaagagcac tctcatcgac aagtacgacc taagcaactt
     1141 gcacgagatc gccagcggcg gggcgccgct cagcaaggag gtaggtgagg ccgtggccaa
     1201 acgcttccac ctaccaggca tccgccaggg ctacggcctg acagaaacaa ccagcgccat
     1261 tctgatcacc cccgaagggg acgacaagcc tggcgcagta ggcaaggtgg tgcccttctt
     1321 cgaggctaag gtggtggact tggacaccgg taagacactg ggtgtgaacc agcgcggcga
     1381 gctgtgcgtc cgtggcccca tgatcatgag cggctacgtt aacaaccccg aggctacaaa
     1441 cgctctcatc gacaaggacg gctggctgca cagcggcgac atcgcctact gggacgagga
     1501 cgagcacttc ttcatcgtgg accggctgaa gagcctgatc aaatacaagg gctaccaggt
     1561 agccccagcc gaactggaga gcatcctgct gcaacacccc aacatcttcg acgccggggt
     1621 cgccggcctg cccgacgacg atgccggcga gctgcccgcc gcagtcgtcg tgctggaaca
     1681 cggtaaaacc atgaccgaga aggagatcgt ggactatgtg gccagccagg ttacaaccgc
     1741 caagaagctg cgcggtggtg ttgtgttcgt ggacgaggtg cctaaaggac tgaccggcaa
     1801 gttggacgcc cgcaagatcc gcgagattct cattaaggcc aagaagggcg gcaagatcgc
     1861 cgtgaattct cacggcttcc ctcccgaggt ggaggagcag gccgccggca ccctgcccat
     1921 gagctgcgcc caggagagcg gcatggatag acaccctgct gcttgcgcca gcgccaggat
     1981 caacgtctaa ggccgcgact ctagagtcgg ggcggccggc cgcttcgagc agacatgata
     2041 agatacattg atgagtttgg acaaaccaca actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt
     2101 tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt
     2161 aacaacaaca attgcattca ttttatgttt caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt
     2221 taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt aaaatcgata aggatccgtt tgcgtattgg
     2281 gcgctcttcc gctgatctgc gcagcaccat ggcctgaaat aacctctgaa agaggaactt
     2341 ggttagctac cttctgaggc ggaaagaacc agctgtggaa tgtgtgtcag ttagggtgtg
     2401 gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag
     2461 caaccaggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc
     2521 tcaattagtc agcaaccata gtcccgcccc taactccgcc catcccgccc ctaactccgc
     2581 ccagttccgc ccattctccg ccccatggct gactaatttt ttttatttat gcagaggccg
     2641 aggccgcctc tgcctctgag ctattccaga agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag
     2701 gcttttgcaa aaagctcgat tcttctgaca ctagcgccac catgaagaag cccgaactca
     2761 ccgctaccag cgttgaaaaa tttctcatcg agaagttcga cagtgtgagc gacctgatgc
     2821 agttgtcgga gggcgaagag agccgagcct tcagcttcga tgtcggcgga cgcggctatg
     2881 tactgcgggt gaatagctgc gctgatggct tctacaaaga ccgctacgtg taccgccact
     2941 tcgccagcgc tgcactaccc atccccgaag tgttggacat cggcgagttc agcgagagcc
     3001 tgacatactg catcagtaga cgcgcccaag gcgttactct ccaagacctc cccgaaacag
     3061 agctgcctgc tgtgttacag cctgtcgccg aagctatgga tgctattgcc gccgccgacc
     3121 tcagtcaaac cagcggcttc ggcccattcg ggccccaagg catcggccag tacacaacct
     3181 ggcgggattt catttgcgcc attgctgatc cccatgtcta ccactggcag accgtgatgg
     3241 acgacaccgt gtccgccagc gtagctcaag ccctggacga actgatgctg tgggccgaag
     3301 actgtcccga ggtgcgccac ctcgtccatg ccgacttcgg cagcaacaac gtcctgaccg
     3361 acaacggccg catcaccgcc gtaatcgact ggtccgaagc tatgttcggg gacagtcagt
     3421 acgaggtggc caacatcttc ttctggcggc cctggctggc ttgcatggag cagcagactc
     3481 gctacttcga gcgccggcat cccgagctgg ccggcagccc tcgtctgcga gcctacatgc
     3541 tgcgcatcgg cctggatcag ctctaccaga gcctcgtgga cggcaacttc gacgatgctg
     3601 cctgggctca aggccgctgc gatgccatcg tccgcagcgg ggccggcacc gtcggtcgca
     3661 cacaaatcgc tcgccggagc gcagccgtat ggaccgacgg ctgcgtcgag gtgctggccg
     3721 acagcggcaa ccgccggccc agtacacgac cgcgcgctaa ggaggtaggt cgagtttaaa
     3781 ctctagaacc ggtcatggcc gcaataaaat atctttattt tcattacatc tgtgtgttgg
     3841 ttttttgtgt gttcgaacta gatgctgtcg accgatgccc ttgagagcct tcaacccagt
     3901 cagctccttc cggtgggcgc ggggcatgac tatcgtcgcc gcacttatga ctgtcttctt
     3961 tatcatgcaa ctcgtaggac aggtgccggc agcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact
     4021 cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac
     4081 ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa
     4141 aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg
     4201 acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa
     4261 gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc
     4321 ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac
     4381 gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac
     4441 cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg
     4501 taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt
     4561 atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa
     4621 cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct
     4681 cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga
     4741 ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg
     4801 ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct
     4861 tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt
     4921 aaacttggtc tgacagcggc cgcaaatgct aaaccactgc agtggttacc agtgcttgat
     4981 cagtgaggca ccgatctcag cgatctgcct atttcgttcg tccatagtgg cctgactccc
     5041 cgtcgtgtag atcactacga ttcgtgaggg cttaccatca ggccccagcg cagcaatgat
     5101 gccgcgagag ccgcgttcac cggcccccga tttgtcagca atgaaccagc cagcagggag
     5161 ggccgagcga agaagtggtc ctgctacttt gtccgcctcc atccagtcta tgagctgctg
     5221 tcgtgatgct agagtaagaa gttcgccagt gagtagtttc cgaagagttg tggccattgc
     5281 tactggcatc gtggtatcac gctcgtcgtt cggtatggct tcgttcaact ctggttccca
     5341 gcggtcaagc cgggtcacat gatcacccat attatgaaga aatgcagtca gctccttagg
     5401 gcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcggtgttg tcgctcatgg taatggcagc
     5461 actacacaat tctcttaccg tcatgccatc cgtaagatgc ttttccgtga ccggcgagta
     5521 ctcaaccaag tcgttttgtg agtagtgtat acggcgacca agctgctctt gcccggcgtc
     5581 tatacgggac aacaccgcgc cacatagcag tactttgaaa gtgctcatca tcgggaatcg
     5641 ttcttcgggg cggaaagact caaggatctt gccgctattg agatccagtt cgatatagcc
     5701 cactcttgca cccagttgat cttcagcatc ttttactttc accagcgttt cggggtgtgc
     5761 aaaaacaggc aagcaaaatg ccgcaaagaa gggaatgagt gcgacacgaa aatgttggat
     5821 gctcatactc gtcctttttc aatattattg aagcatttat cagggttact agtacgtctc
     5881 tcaaggataa gtaagtaata ttaaggtacg ggaggtattg gacaggccgc aataaaatat
     5941 ctttattttc attacatctg tgtgttggtt ttttgtgtga atcgatagta ctaacatacg
     6001 ctctccatca aaacaaaacg aaacaaaaca aactagcaaa ataggctgtc cccagtgcaa
     6061 gtgcaggtgc cagaacattt ctct
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3494/pENTR223-CD27人源基因质粒

P3495/pENTR223-KCNG4人源基因质粒

P3496/pENTR223-SPIN1人源基因质粒

P3497/pENTR223-RAB3IP人源基因质粒

P3498/pENTR223-THAP12人源基因质粒

P3499/pENTR223-USP29（2点突变）人源基因质粒

P3500/pENTR223-CENPK人源基因质粒

P3501/pENTR223-NCF2（2点突变）人源基因质粒

P3502/pENTR223-SLC45A2（2点突变）人源基因质粒

P3503/pENTR223-ACVR1B（1点突变）人源基因质粒

P3504/pENTR223-DARS人源基因质粒

P3505/pENTR223-EP400人源基因质粒