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- 上海
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- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pN3
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pN3哺乳表达质粒
别称: pN3
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3996 bp ds-DNA circular SYN 31-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3996)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Wednesday, August 31, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3996
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
polyA_signal 784..905
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(912..1367)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1394..1498
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 1500..1857
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 1708..1843
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 1892..2686
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 2918..2965
/note="HSV TK poly(A) signal"
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 3294..3882
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggactcag atctcgagct caagcttcga attctgcagt cgacggtacc gcgggcccgg
661 gatcggccgc gactctagat cataatcagc cataccacat ttgtagaggt tttacttgct
721 ttaaaaaacc tcccacacct ccccctgaac ctgaaacata aaatgaatgc aattgttgtt
781 gttaacttgt ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc
841 acaaataaag catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta
901 tcttaaggcg taaattgtaa gcgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta
961 aatcagctca ttttttaacc aataggccga aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga
1021 atagaccgag atagggttga gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac tattaaagaa
1081 cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga
1141 accatcaccc taatcaagtt ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa atcggaaccc
1201 taaagggagc ccccgattta gagcttgacg gggaaagccg gcgaacgtgg cgagaaagga
1261 agggaagaaa gcgaaaggag cgggcgctag ggcgctggca agtgtagcgg tcacgctgcg
1321 cgtaaccacc acacccgccg cgcttaatgc gccgctacag ggcgcgtcag gtggcacttt
1381 tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta
1441 tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtcc
1501 tgaggcggaa agaaccagct gtggaatgtg tgtcagttag ggtgtggaaa gtccccaggc
1561 tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac caggtgtgga
1621 aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca
1681 accatagtcc cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat
1741 tctccgcccc atggctgact aatttttttt atttatgcag aggccgaggc cgcctcggcc
1801 tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt ttgcaaagat
1861 cgatcaagag acaggatgag gatcgtttcg catgattgaa caagatggat tgcacgcagg
1921 ttctccggcc gcttgggtgg agaggctatt cggctatgac tgggcacaac agacaatcgg
1981 ctgctctgat gccgccgtgt tccggctgtc agcgcagggg cgcccggttc tttttgtcaa
2041 gaccgacctg tccggtgccc tgaatgaact gcaagacgag gcagcgcggc tatcgtggct
2101 ggccacgacg ggcgttcctt gcgcagctgt gctcgacgtt gtcactgaag cgggaaggga
2161 ctggctgcta ttgggcgaag tgccggggca ggatctcctg tcatctcacc ttgctcctgc
2221 cgagaaagta tccatcatgg ctgatgcaat gcggcggctg catacgcttg atccggctac
2281 ctgcccattc gaccaccaag cgaaacatcg catcgagcga gcacgtactc ggatggaagc
2341 cggtcttgtc gatcaggatg atctggacga agagcatcag gggctcgcgc cagccgaact
2401 gttcgccagg ctcaaggcga gcatgcccga cggcgaggat ctcgtcgtga cccatggcga
2461 tgcctgcttg ccgaatatca tggtggaaaa tggccgcttt tctggattca tcgactgtgg
2521 ccggctgggt gtggcggacc gctatcagga catagcgttg gctacccgtg atattgctga
2581 agagcttggc ggcgaatggg ctgaccgctt cctcgtgctt tacggtatcg ccgctcccga
2641 ttcgcagcgc atcgccttct atcgccttct tgacgagttc ttctgagcgg gactctgggg
2701 ttcgaaatga ccgaccaagc gacgcccaac ctgccatcac gagatttcga ttccaccgcc
2761 gccttctatg aaaggttggg cttcggaatc gttttccggg acgccggctg gatgatcctc
2821 cagcgcgggg atctcatgct ggagttcttc gcccacccta gggggaggct aactgaaaca
2881 cggaaggaga caataccgga aggaacccgc gctatgacgg caataaaaag acagaataaa
2941 acgcacggtg ttgggtcgtt tgttcataaa cgcggggttc ggtcccaggg ctggcactct
3001 gtcgataccc caccgagacc ccattggggc caatacgccc gcgtttcttc cttttcccca
3061 ccccaccccc caagttcggg tgaaggccca gggctcgcag ccaacgtcgg ggcggcaggc
3121 cctgccatag cctcaggtta ctcatatata ctttagattg atttaaaact tcatttttaa
3181 tttaaaagga tctaggtgaa gatccttttt gataatctca tgaccaaaat cccttaacgt
3241 gagttttcgt tccactgagc gtcagacccc gtagaaaaga tcaaaggatc ttcttgagat
3301 cctttttttc tgcgcgtaat ctgctgcttg caaacaaaaa aaccaccgct accagcggtg
3361 gtttgtttgc cggatcaaga gctaccaact ctttttccga aggtaactgg cttcagcaga
3421 gcgcagatac caaatactgt ccttctagtg tagccgtagt taggccacca cttcaagaac
3481 tctgtagcac cgcctacata cctcgctctg ctaatcctgt taccagtggc tgctgccagt
3541 ggcgataagt cgtgtcttac cgggttggac tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag
3601 cggtcgggct gaacgggggg ttcgtgcaca cagcccagct tggagcgaac gacctacacc
3661 gaactgagat acctacagcg tgagctatga gaaagcgcca cgcttcccga agggagaaag
3721 gcggacaggt atccggtaag cggcagggtc ggaacaggag agcgcacgag ggagcttcca
3781 gggggaaacg cctggtatct ttatagtcct gtcgggtttc gccacctctg acttgagcgt
3841 cgatttttgt gatgctcgtc aggggggcgg agcctatgga aaaacgccag caacgcggcc
3901 tttttacggt tcctggcctt ttgctggcct tttgctcaca tgttctttcc tgcgttatcc
3961 cctgattctg tggataaccg tattaccgcc atgcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pN3哺乳表达质粒
别称: pN3
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，荧光蛋白报告载体 |
| 质粒大小: | 3996bp |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3996 bp ds-DNA circular SYN 31-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3996)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Wednesday, August 31, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3996
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
polyA_signal 784..905
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(912..1367)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1394..1498
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 1500..1857
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 1708..1843
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 1892..2686
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
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(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
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/note="HSV TK poly(A) signal"
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 3294..3882
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
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2101 ggccacgacg ggcgttcctt gcgcagctgt gctcgacgtt gtcactgaag cgggaaggga
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2221 cgagaaagta tccatcatgg ctgatgcaat gcggcggctg catacgcttg atccggctac
2281 ctgcccattc gaccaccaag cgaaacatcg catcgagcga gcacgtactc ggatggaagc
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2701 ttcgaaatga ccgaccaagc gacgcccaac ctgccatcac gagatttcga ttccaccgcc
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3361 gtttgtttgc cggatcaaga gctaccaact ctttttccga aggtaactgg cttcagcaga
3421 gcgcagatac caaatactgt ccttctagtg tagccgtagt taggccacca cttcaagaac
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3541 ggcgataagt cgtgtcttac cgggttggac tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag
3601 cggtcgggct gaacgggggg ttcgtgcaca cagcccagct tggagcgaac gacctacacc
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3841 cgatttttgt gatgctcgtc aggggggcgg agcctatgga aaaacgccag caacgcggcc
3901 tttttacggt tcctggcctt ttgctggcct tttgctcaca tgttctttcc tgcgttatcc
3961 cctgattctg tggataaccg tattaccgcc atgcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4673/pCMV-SPORT6-IRF6人源基因质粒 |
| P4674/pCMV-SPORT6-LIPA（2点突变）人源基因质粒 |
| P4675/pCMV-SPORT6-CMBL人源基因质粒 |
| P4676/pCMV-SPORT6-ZNF607人源基因质粒 |
| P4677/pCMV-SPORT6-BECN1人源基因质粒 |
| P4678/pCMV-SPORT6-CLIP4人源基因质粒 |
| P4679/pCMV-SPORT6-OMA1人源基因质粒 |
| P4680/pCMV-SPORT6-HDAC6人源基因质粒 |
| P4681/pCMV-SPORT6-PPIG人源基因质粒 |
| P4682/pCMV-SPORT6-MAPK6人源基因质粒 |
| P4683/pCMV-SPORT6-CMAS人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
核酸疫苗载体及表达调控元件 基因免疫 载体常用真核细胞表达质粒，如能在哺乳动物细胞中高效表达真核启动子的质粒，包括长末端重复序列(LTR)、猴空泡病毒(SV40)及巨细胞病毒(CMV)等启动子等。基因免疫载体由3个部分组成：①目的蛋白基因编码序列；②细菌质粒骨架元件，包括复制起点、多克隆位点和选择标记；③转录表达调控元件，包括真核启动子／增强子、转录终止／多聚腺苷酸化信号序列。表达抗原蛋白能力的强弱，取决于其启动子的强弱。目前携带CMV启动子的真核表达质粒
蛋白转位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。 mRFP-GFP-LC3 双荧光自噬指示体系： mRFP-GFP-LC3 融合蛋白的病毒产品 mRFP 用于标记及追踪 LC3，GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体。由于 GFP 荧光蛋白对酸性敏感(pH 敏感)，当自噬体与溶酶体融合后 GFP 荧光发生淬灭,而 mRFP 相对稳定，因此只能检测到红色荧光。 1. 哺乳动物 LC3 表达质粒
pBAD24 大肠杆菌质粒 pLAFR-3 大肠杆菌质粒 Tet 不需要诱导，组成性表达质粒，大质粒，不能用试剂盒提取 pT-GroE 大肠杆菌质粒 Chl 伴侣分子 T载体 大肠
pN3哺乳表达质粒
￥100 - 1000
