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-20
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2年
- 英文名：
pCAG-GFP
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCAG-GFP哺乳表达质粒
别称: pCAG-GFP
质粒属性
质粒简介
pCAG-GFP是一种可在哺乳动物细胞中表达的质粒，CAG启动子驱动目的基因和绿色荧光蛋白EGFP的融合表达，可选用EcoRI、KpnI和XmaI酶切位点克隆进目的基因。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5556 bp ds-DNA circular SYN 19-9-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pCAG-GFP
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5556)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2016年9月19日 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5556
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/mol_type="other DNA"
enhancer 4..383
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 386..661
/note="chicken beta-actin promoter"
CDS 1773..2492
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
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/note="beta-globin poly(A) signal"
/note="rabbit beta-globin polyadenylation signal"
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/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 3083..3099
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3107..3137)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 3152..3173
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 3232..3427
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 early promoter"
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/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
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/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
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/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4565..5425)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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LIKHW"
promoter complement(5426..5530)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gtcgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata
61 gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc
121 ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag
181 ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggact atttacggta aactgcccac ttggcagtac
241 atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg
301 cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg
361 tattagtcat cgctattacc atgggtcgag gtgagcccca cgttctgctt cactctcccc
421 atctcccccc cctccccacc cccaattttg tatttattta ttttttaatt attttgtgca
481 gcgatggggg cggggggggg gggggcgcgc gccaggcggg gcggggcggg gcgaggggcg
541 gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag agcggcgcgc tccgaaagtt
601 tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa aagcgaagcg cgcggcgggc
661 gggagtcgct gcgttgcctt cgccccgtgc cccgctccgc gccgcctcgc gccgcccgcc
721 ccggctctga ctgaccgcgt tactcccaca ggtgagcggg cgggacggcc cttctcctcc
781 gggctgtaat tagcgcttgg tttaatgacg gctcgtttct tttctgtggc tgcgtgaaag
841 ccttaaaggg ctccgggagg gccctttgtg cgggggggag cggctcgggg ggtgcgtgcg
901 tgtgtgtgtg cgtggggagc gccgcgtgcg gcccgcgctg cccggcggct gtgagcgctg
961 cgggcgcggc gcggggcttt gtgcgctccg cgtgtgcgcg aggggagcgc ggccgggggc
1021 ggtgccccgc ggtgcggggg ggctgcgagg ggaacaaagg ctgcgtgcgg ggtgtgtgcg
1081 tgggggggtg agcagggggt gtgggcgcgg cggtcgggct gtaacccccc cctgcacccc
1141 cctccccgag ttgctgagca cggcccggct tcgggtgcgg ggctccgtgc ggggcgtggc
1201 gcggggctcg ccgtgccggg cggggggtgg cggcaggtgg gggtgccggg cggggcgggg
1261 ccgcctcggg ccggggaggg ctcgggggag gggcgcggcg gcccccggag cgccggcggc
1321 tgtcgaggcg cggcgagccg cagccattgc cttttatggt aatcgtgcga gagggcgcag
1381 ggacttcctt tgtcccaaat ctgtgcggag ccgaaatctg ggaggcgccg ccgcaccccc
1441 tctagcgggc gcggggcgaa gcggtgcggc gccggcagga aggaaatggg cggggagggc
1501 cttcgtgcgt cgccgcgccg ccgtcccctt ctccctctcc agcctcgggg ctgtccgcgg
1561 ggggacggct gccttcgggg gggacggggc agggcggggt tcggcttctg gcgtgtgacc
1621 ggcggctcta gagcctctgc taaccatgtt catgccttct tctttttcct acagctcctg
1681 ggcaacgtgc tggttattgt gctgtctcat cattttggca aagaattctg cagtcgacgg
1741 taccgcgggc ccgggatcca ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gagctgttca
1801 ccggggtggt gcccatcctg gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg
1861 tgtccggcga gggcgagggc gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca
1921 ccaccggcaa gctgcccgtg ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc tacggcgtgc
1981 agtgcttcag ccgctacccc gaccacatga agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc
2041 ccgaaggcta cgtccaggag cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc
2101 gcgccgaggt gaagttcgag ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg
2161 acttcaagga ggacggcaac atcctggggc acaagctgga gtacaactac aacagccaca
2221 acgtctatat catggccgac aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc aagatccgcc
2281 acaacatcga ggacggcagc gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg
2341 gcgacggccc cgtgctgctg cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca
2401 aagaccccaa cgagaagcgc gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga
2461 tcactctcgg catggacgag ctgtacaagt aaagcggccg cactcctcag gtgcaggctg
2521 cctatcagaa ggtggtggct ggtgtggcca atgccctggc tcacaaatac cactgagatc
2581 tttttccctc tgccaaaaat tatggggaca tcatgaagcc ccttgagcat ctgacttctg
2641 gctaataaag gaaatttatt ttcattgcaa tagtgtgttg gaattttttg tgtctctcac
2701 tcggaaggac atatgggagg gcaaatcatt taaaacatca gaatgagtat ttggtttaga
2761 gtttggcaac atatgcccat atgctggctg ccatgaacaa aggtggctat aaagaggtca
2821 tcagtatatg aaacagcccc ctgctgtcca ttccttattc catagaaaag ccttgacttg
2881 aggttagatt ttttttatat tttgttttgt gttatttttt tctttaacat ccctaaaatt
2941 ttccttacat gttttactag ccagattttt cctcctctcc tgactactcc cagtcatagc
3001 tgtccctctt ctcttatgaa gatccctcga cctgcagccc aagcttggcg taatcatggt
3061 catagctgtt tcctgtgtga aattgttatc cgctcacaat tccacacaac atacgagccg
3121 gaagcataaa gtgtaaagcc tggggtgcct aatgagtgag ctaactcaca ttaattgcgt
3181 tgcgctcact gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg ccagcggatc cgcatctcaa
3241 ttagtcagca accatagtcc cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag
3301 ttccgcccat tctccgcccc atggctgact aatttttttt atttatgcag aggccgaggc
3361 cgcctcggcc tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt
3421 ttgcaaaaag ctaacttgtt tattgcagct tataatggtt acaaataaag caatagcatc
3481 acaaatttca caaataaagc atttttttca ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc
3541 atcaatgtat cttatcatgt ctggatccgc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga
3601 gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg
3661 tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag
3721 aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc
3781 gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca
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3901 ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc
3961 tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca atgctcacgc tgtaggtatc
4021 tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc
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5521 gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCAG-GFP哺乳表达质粒
别称: pCAG-GFP
| 启动子: | CAG |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | β-globin poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳系列质粒；哺乳表达质粒；pCAG系列质粒 |
| 质粒大小: | 5556bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | C-EGFP |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 293T等哺乳细胞 |
| 培养条件: | 37℃，5%CO2 |
| 诱导方式: | 无需诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | PCAG-F（GCAACGTGCTGGTTATTGTG） |
| 3'测序引物: | β-globin-R（GTCCTTCCGAGTGAGAGACAC） |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： | 绿色 |
质粒简介
pCAG-GFP是一种可在哺乳动物细胞中表达的质粒，CAG启动子驱动目的基因和绿色荧光蛋白EGFP的融合表达，可选用EcoRI、KpnI和XmaI酶切位点克隆进目的基因。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5556 bp ds-DNA circular SYN 19-9-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pCAG-GFP
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5556)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2016年9月19日 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5556
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 4..383
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/product="enhanced GFP"
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variants"
protein_bind 3083..3099
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/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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protein_bind 3152..3173
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/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 3232..3427
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/note="SV40 early promoter"
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LIKHW"
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ORIGIN
1 gtcgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata
61 gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc
121 ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag
181 ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggact atttacggta aactgcccac ttggcagtac
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301 cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg
361 tattagtcat cgctattacc atgggtcgag gtgagcccca cgttctgctt cactctcccc
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1801 ccggggtggt gcccatcctg gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg
1861 tgtccggcga gggcgagggc gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca
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2221 acgtctatat catggccgac aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc aagatccgcc
2281 acaacatcga ggacggcagc gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg
2341 gcgacggccc cgtgctgctg cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca
2401 aagaccccaa cgagaagcgc gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga
2461 tcactctcgg catggacgag ctgtacaagt aaagcggccg cactcctcag gtgcaggctg
2521 cctatcagaa ggtggtggct ggtgtggcca atgccctggc tcacaaatac cactgagatc
2581 tttttccctc tgccaaaaat tatggggaca tcatgaagcc ccttgagcat ctgacttctg
2641 gctaataaag gaaatttatt ttcattgcaa tagtgtgttg gaattttttg tgtctctcac
2701 tcggaaggac atatgggagg gcaaatcatt taaaacatca gaatgagtat ttggtttaga
2761 gtttggcaac atatgcccat atgctggctg ccatgaacaa aggtggctat aaagaggtca
2821 tcagtatatg aaacagcccc ctgctgtcca ttccttattc catagaaaag ccttgacttg
2881 aggttagatt ttttttatat tttgttttgt gttatttttt tctttaacat ccctaaaatt
2941 ttccttacat gttttactag ccagattttt cctcctctcc tgactactcc cagtcatagc
3001 tgtccctctt ctcttatgaa gatccctcga cctgcagccc aagcttggcg taatcatggt
3061 catagctgtt tcctgtgtga aattgttatc cgctcacaat tccacacaac atacgagccg
3121 gaagcataaa gtgtaaagcc tggggtgcct aatgagtgag ctaactcaca ttaattgcgt
3181 tgcgctcact gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg ccagcggatc cgcatctcaa
3241 ttagtcagca accatagtcc cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag
3301 ttccgcccat tctccgcccc atggctgact aatttttttt atttatgcag aggccgaggc
3361 cgcctcggcc tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt
3421 ttgcaaaaag ctaacttgtt tattgcagct tataatggtt acaaataaag caatagcatc
3481 acaaatttca caaataaagc atttttttca ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc
3541 atcaatgtat cttatcatgt ctggatccgc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga
3601 gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg
3661 tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag
3721 aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc
3781 gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca
3841 aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt
3901 ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc
3961 tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca atgctcacgc tgtaggtatc
4021 tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc
4081 ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact
4141 tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg
4201 ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaaggaca gtatttggta
4261 tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca
4321 aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa
4381 aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg
4441 aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc
4501 ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg
4561 acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat
4621 ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg
4681 gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa
4741 taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca
4801 tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc
4861 gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt
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4981 aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3265/pENTR223-GPN3(1点突变）人源基因质粒 |
| P3266/pENTR223-DDRGK1人源基因质粒 |
| P3267/pENTR223-FSTL1人源基因质粒 |
| P3268/pENTR223-POLA2人源基因质粒 |
| P3269/pENTR223-DYNC1I1（1同义突变3点突变）人源基因质粒 |
| P3439/pENTR223-RHBDD1人源基因质粒 |
| P3440/pENTR223-PYCR1人源基因质粒 |
| P3441/pENTR223-VAPA人源基因质粒 |
| P3442/pENTR223-TAF9人源基因质粒 |
| P3443/pENTR223-PMM1人源基因质粒 |
| P3444/pENTR223-TLE6人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
蛋白转位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。 mRFP-GFP-LC3 双荧光自噬指示体系： mRFP-GFP-LC3 融合蛋白的病毒产品 mRFP 用于标记及追踪 LC3，GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体。由于 GFP 荧光蛋白对酸性敏感(pH 敏感)，当自噬体与溶酶体融合后 GFP 荧光发生淬灭,而 mRFP 相对稳定，因此只能检测到红色荧光。 1. 哺乳动物 LC3 表达质粒
lf2003128245 本人手上有个慢病毒的质粒，目的基因是通过SalI酶切位点插入的，我想将这个基因切下来重新构建，希望有经验的大侠能够指点，可以选择些什么样的质粒呀，最好是带有GFP标记的非病毒质粒，还有个问题请教就是，病毒载体是不是不需要类似于G418筛选的标记呀？如果我找到个质粒，将这个基因连上去之后，怎么才能鉴别/筛选目的基因正反向的问题？谢谢了！ fjxie 目的基因是通过SalI酶切位点插入的，我想将这个基因
作为细胞生物学专业的博士生，在基因功能研究上已经有五年的经验了，今天我给大家讲讲其中经常用到并且非常重要的一种技术--慢病毒包装的过表达体系。下面我就从引物设计，慢病毒表达质粒构建等方面详细讲述。下面以 plex-MCS 载体为例。1. 选择酶切位点，为了避免移码突变，上游的酶切位点选择起始密码子 ATG 前面的 spel，下游选择 xho1。2. 构建方法的选择。连接法对于连接法，首先设计引物将目的基因 PCR 出来，即酶切位点加基因引物，此时应注意，为了防止酶切将基因破坏，通常习惯在两端
pCAG-GFP哺乳表达质粒
￥100 - 1000
