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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pCAG-IRES-Puro
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCAG-IRES-Puro哺乳表达质粒
别称: pCAG-IRES-Puro
质粒属性
质粒简介
pCAG-IRES-Puro是一个哺乳细胞pCAG系列表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6034 bp ds-DNA circular SYN 21-NOV-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6034
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 4..1674
/label=CAG promoter
misc_feature 1766..2339
/label=IRES
/note="internal ribosome entry site (IRES) of the
encephalomyocarditis virus (EMCV)"
CDS 2372..2971
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces alboniger"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/label=PuroR
/note="confers resistance to puromycin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
polyA_site 3122..3177
/label=-beta-globin poly(A) signal
/note="rabbit beta-globin polyadenylation signal"
promoter 3710..3905
/label=SV40 promoter
/note="SV40 early promoter"
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/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
polyA_signal 3911..4045
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4284..4872)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5043..5903)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5904..6008)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gtcgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata
61 gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc
121 ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag
181 ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggact atttacggta aactgcccac ttggcagtac
241 atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg
301 cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg
361 tattagtcat cgctattacc atgggtcgag gtgagcccca cgttctgctt cactctcccc
421 atctcccccc cctccccacc cccaattttg tatttattta ttttttaatt attttgtgca
481 gcgatggggg cggggggggg gggggcgcgc gccaggcggg gcggggcggg gcgaggggcg
541 gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag agcggcgcgc tccgaaagtt
601 tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa aagcgaagcg cgcggcgggc
661 gggagtcgct gcgttgcctt cgccccgtgc cccgctccgc gccgcctcgc gccgcccgcc
721 ccggctctga ctgaccgcgt tactcccaca ggtgagcggg cgggacggcc cttctcctcc
781 gggctgtaat tagcgcttgg tttaatgacg gctcgtttct tttctgtggc tgcgtgaaag
841 ccttaaaggg ctccgggagg gccctttgtg cgggggggag cggctcgggg ggtgcgtgcg
901 tgtgtgtgtg cgtggggagc gccgcgtgcg gcccgcgctg cccggcggct gtgagcgctg
961 cgggcgcggc gcggggcttt gtgcgctccg cgtgtgcgcg aggggagcgc ggccgggggc
1021 ggtgccccgc ggtgcggggg ggctgcgagg ggaacaaagg ctgcgtgcgg ggtgtgtgcg
1081 tgggggggtg agcagggggt gtgggcgcgg cggtcgggct gtaacccccc cctgcacccc
1141 cctccccgag ttgctgagca cggcccggct tcgggtgcgg ggctccgtgc ggggcgtggc
1201 gcggggctcg ccgtgccggg cggggggtgg cggcaggtgg gggtgccggg cggggcgggg
1261 ccgcctcggg ccggggaggg ctcgggggag gggcgcggcg gcccccggag cgccggcggc
1321 tgtcgaggcg cggcgagccg cagccattgc cttttatggt aatcgtgcga gagggcgcag
1381 ggacttcctt tgtcccaaat ctgtgcggag ccgaaatctg ggaggcgccg ccgcaccccc
1441 tctagcgggc gcggggcgaa gcggtgcggc gccggcagga aggaaatggg cggggagggc
1501 cttcgtgcgt cgccgcgccg ccgtcccctt ctccctctcc agcctcgggg ctgtccgcgg
1561 ggggacggct gccttcgggg gggacggggc agggcggggt tcggcttctg gcgtgtgacc
1621 ggcggctcta gagcctctgc taaccatgtt catgccttct tctttttcct acagctcctg
1681 ggcaacgtgc tggttattgt gctgtctcat cattttggca aagaattctg cagtcgacgg
1741 taccgcgggc ccgggatcca ccggtcccct ctccctcccc cccccctaac gttactggcc
1801 gaagccgctt ggaataaggc cggtgtgcgt ttgtctatat gttattttcc accatattgc
1861 cgtcttttgg caatgtgagg gcccggaaac ctggccctgt cttcttgacg agcattccta
1921 ggggtctttc ccctctcgcc aaaggaatgc aaggtctgtt gaatgtcgtg aaggaagcag
1981 ttcctctgga agcttcttga agacaaacaa cgtctgtagc gaccctttgc aggcagcgga
2041 accccccacc tggcgacagg tgcctctgcg gccaaaagcc acgtgtataa gatacacctg
2101 caaaggcggc acaaccccag tgccacgttg tgagttggat agttgtggaa agagtcaaat
2161 ggctctcctc aagcgtattc aacaaggggc tgaaggatgc ccagaaggta ccccattgta
2221 tgggatctga tctggggcct cggtgcacat gctttacatg tgtttagtcg aggttaaaaa
2281 aacgtctagg ccccccgaac cacggggacg tggttttcct ttgaaaaaca cgatgataag
2341 cttgccacaa cccacaagga gacgaccttc catgaccgag tacaagccca cggtgcgcct
2401 cgccacccgc gacgacgtcc cccgggccgt acgcaccctc gccgccgcgt tcgccgacta
2461 ccccgccacg cgccacaccg tcgacccgga ccgccacatc gagcgggtca ccgagctgca
2521 agaactcttc ctcacgcgcg tcgggctcga catcggcaag gtgtgggtcg cggacgacgg
2581 cgccgcggtg gcggtctgga ccacgccgga gagcgtcgaa gcgggggcgg tgttcgccga
2641 gatcggcccg cgcatggccg agttgagcgg ttcccggctg gccgcgcagc aacagatgga
2701 aggcctcctg gcgccgcacc ggcccaagga gcccgcgtgg ttcctggcca ccgtcggcgt
2761 ctcgcccgac caccagggca agggtctggg cagcgccgtc gtgctccccg gagtggaggc
2821 ggccgagcgc gccggggtgc ccgccttcct ggagacctcc gcgccccgca acctcccctt
2881 ctacgagcgg ctcggcttca ccgtcaccgc cgacgtcgag gtgcccgaag gaccgcgcac
2941 ctggtgcatg acccgcaagc ccggtgccta ggcggccgca ctcctcaggt gcaggctgcc
3001 tatcagaagg tggtggctgg tgtggccaat gccctggctc acaaatacca ctgagatctt
3061 tttccctctg ccaaaaatta tggggacatc atgaagcccc ttgagcatct gacttctggc
3121 taataaagga aatttatttt cattgcaata gtgtgttgga attttttgtg tctctcactc
3181 ggaaggacat atgggagggc aaatcattta aaacatcaga atgagtattt ggtttagagt
3241 ttggcaacat atgcccatat gctggctgcc atgaacaaag gtggctataa agaggtcatc
3301 agtatatgaa acagccccct gctgtccatt ccttattcca tagaaaagcc ttgacttgag
3361 gttagatttt ttttatattt tgttttgtgt tatttttttc tttaacatcc ctaaaatttt
3421 ccttacatgt tttactagcc agatttttcc tcctctcctg actactccca gtcatagctg
3481 tccctcttct cttatgaaga tccctcgacc tgcagcccaa gcttggcgta atcatggtca
3541 tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga
3601 agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg
3661 cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc agcggatccg catctcaatt
3721 agtcagcaac catagtcccg cccctaactc cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt
3781 ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa ttttttttat ttatgcagag gccgaggccg
3841 cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt ttttggaggc ctaggctttt
3901 gcaaaaagct aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac
3961 aaatttcaca aataaagcat ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat
4021 caatgtatct tatcatgtct ggatccgctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga
4081 ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc
4141 gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa
4201 tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt
4261 aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa
4321 aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt
4381 ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg
4441 tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcaat gctcacgctg taggtatctc
4501 agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc
4561 gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta
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4681 acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc
4741 tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa
4801 caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa
4861 aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa
4921 aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt
4981 ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac
5041 agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc
5101 atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc
5161 cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata
5221 aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc
5281 cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc
5341 aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca
5401 ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa
5461 gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca
5521 ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt
5581 tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt
5641 tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg
5701 ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga
5761 tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc
5821 agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg
5881 acacggaaat gttgaatact catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag
5941 ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg
6001 gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCAG-IRES-Puro哺乳表达质粒
别称: pCAG-IRES-Puro
| 启动子: | CAG |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Puro |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Puro |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pCAG-IRES-Puro是一个哺乳细胞pCAG系列表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6034 bp ds-DNA circular SYN 21-NOV-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6034
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 4..1674
/label=CAG promoter
misc_feature 1766..2339
/label=IRES
/note="internal ribosome entry site (IRES) of the
encephalomyocarditis virus (EMCV)"
CDS 2372..2971
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces alboniger"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/label=PuroR
/note="confers resistance to puromycin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
polyA_site 3122..3177
/label=-beta-globin poly(A) signal
/note="rabbit beta-globin polyadenylation signal"
promoter 3710..3905
/label=SV40 promoter
/note="SV40 early promoter"
rep_origin 3756..3891
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
polyA_signal 3911..4045
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4284..4872)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5043..5903)
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/label=AmpR
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related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5904..6008)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gtcgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata
61 gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc
121 ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag
181 ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggact atttacggta aactgcccac ttggcagtac
241 atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg
301 cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg
361 tattagtcat cgctattacc atgggtcgag gtgagcccca cgttctgctt cactctcccc
421 atctcccccc cctccccacc cccaattttg tatttattta ttttttaatt attttgtgca
481 gcgatggggg cggggggggg gggggcgcgc gccaggcggg gcggggcggg gcgaggggcg
541 gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag agcggcgcgc tccgaaagtt
601 tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa aagcgaagcg cgcggcgggc
661 gggagtcgct gcgttgcctt cgccccgtgc cccgctccgc gccgcctcgc gccgcccgcc
721 ccggctctga ctgaccgcgt tactcccaca ggtgagcggg cgggacggcc cttctcctcc
781 gggctgtaat tagcgcttgg tttaatgacg gctcgtttct tttctgtggc tgcgtgaaag
841 ccttaaaggg ctccgggagg gccctttgtg cgggggggag cggctcgggg ggtgcgtgcg
901 tgtgtgtgtg cgtggggagc gccgcgtgcg gcccgcgctg cccggcggct gtgagcgctg
961 cgggcgcggc gcggggcttt gtgcgctccg cgtgtgcgcg aggggagcgc ggccgggggc
1021 ggtgccccgc ggtgcggggg ggctgcgagg ggaacaaagg ctgcgtgcgg ggtgtgtgcg
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1321 tgtcgaggcg cggcgagccg cagccattgc cttttatggt aatcgtgcga gagggcgcag
1381 ggacttcctt tgtcccaaat ctgtgcggag ccgaaatctg ggaggcgccg ccgcaccccc
1441 tctagcgggc gcggggcgaa gcggtgcggc gccggcagga aggaaatggg cggggagggc
1501 cttcgtgcgt cgccgcgccg ccgtcccctt ctccctctcc agcctcgggg ctgtccgcgg
1561 ggggacggct gccttcgggg gggacggggc agggcggggt tcggcttctg gcgtgtgacc
1621 ggcggctcta gagcctctgc taaccatgtt catgccttct tctttttcct acagctcctg
1681 ggcaacgtgc tggttattgt gctgtctcat cattttggca aagaattctg cagtcgacgg
1741 taccgcgggc ccgggatcca ccggtcccct ctccctcccc cccccctaac gttactggcc
1801 gaagccgctt ggaataaggc cggtgtgcgt ttgtctatat gttattttcc accatattgc
1861 cgtcttttgg caatgtgagg gcccggaaac ctggccctgt cttcttgacg agcattccta
1921 ggggtctttc ccctctcgcc aaaggaatgc aaggtctgtt gaatgtcgtg aaggaagcag
1981 ttcctctgga agcttcttga agacaaacaa cgtctgtagc gaccctttgc aggcagcgga
2041 accccccacc tggcgacagg tgcctctgcg gccaaaagcc acgtgtataa gatacacctg
2101 caaaggcggc acaaccccag tgccacgttg tgagttggat agttgtggaa agagtcaaat
2161 ggctctcctc aagcgtattc aacaaggggc tgaaggatgc ccagaaggta ccccattgta
2221 tgggatctga tctggggcct cggtgcacat gctttacatg tgtttagtcg aggttaaaaa
2281 aacgtctagg ccccccgaac cacggggacg tggttttcct ttgaaaaaca cgatgataag
2341 cttgccacaa cccacaagga gacgaccttc catgaccgag tacaagccca cggtgcgcct
2401 cgccacccgc gacgacgtcc cccgggccgt acgcaccctc gccgccgcgt tcgccgacta
2461 ccccgccacg cgccacaccg tcgacccgga ccgccacatc gagcgggtca ccgagctgca
2521 agaactcttc ctcacgcgcg tcgggctcga catcggcaag gtgtgggtcg cggacgacgg
2581 cgccgcggtg gcggtctgga ccacgccgga gagcgtcgaa gcgggggcgg tgttcgccga
2641 gatcggcccg cgcatggccg agttgagcgg ttcccggctg gccgcgcagc aacagatgga
2701 aggcctcctg gcgccgcacc ggcccaagga gcccgcgtgg ttcctggcca ccgtcggcgt
2761 ctcgcccgac caccagggca agggtctggg cagcgccgtc gtgctccccg gagtggaggc
2821 ggccgagcgc gccggggtgc ccgccttcct ggagacctcc gcgccccgca acctcccctt
2881 ctacgagcgg ctcggcttca ccgtcaccgc cgacgtcgag gtgcccgaag gaccgcgcac
2941 ctggtgcatg acccgcaagc ccggtgccta ggcggccgca ctcctcaggt gcaggctgcc
3001 tatcagaagg tggtggctgg tgtggccaat gccctggctc acaaatacca ctgagatctt
3061 tttccctctg ccaaaaatta tggggacatc atgaagcccc ttgagcatct gacttctggc
3121 taataaagga aatttatttt cattgcaata gtgtgttgga attttttgtg tctctcactc
3181 ggaaggacat atgggagggc aaatcattta aaacatcaga atgagtattt ggtttagagt
3241 ttggcaacat atgcccatat gctggctgcc atgaacaaag gtggctataa agaggtcatc
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3361 gttagatttt ttttatattt tgttttgtgt tatttttttc tttaacatcc ctaaaatttt
3421 ccttacatgt tttactagcc agatttttcc tcctctcctg actactccca gtcatagctg
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3541 tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga
3601 agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg
3661 cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc agcggatccg catctcaatt
3721 agtcagcaac catagtcccg cccctaactc cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt
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3961 aaatttcaca aataaagcat ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat
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4081 ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc
4141 gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa
4201 tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt
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5461 gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca
5521 ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt
5581 tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt
5641 tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg
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6001 gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctg
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0606/Smad3人源基因质粒 |
| P0618/DACH1人源基因质粒 |
| P0619/PCSK9人源基因质粒 |
| P0630/pCMV-SPORT6-C1QBP人源基因质粒 |
| P3490/pCMV-SPORT6-SNF8人源基因质粒 |
| P3824/pCMV-SPORT6-CDK9（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3825/pCMV-SPORT6-AGT人源基因质粒 |
| P0632/pCMV-SPORT6-MB21D1人源基因质粒 |
| P2916/pCMV-SPORT6-ZNF251人源基因质粒 |
| P2933/pCMV-SPORT6-CAPN3-G1988人源基因质粒 |
| P2934/pCMV-SPORT6-MRC2（2同义突变1点突变）人源基因质粒 |
| P3152/pCMV-SPORT6-METTL7A人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
Amp Tet-pLKO-Puro 哺乳细胞质粒 四环素调控系统 pTRE2pur 哺乳细胞质粒 Amp Tet-on，Tet-off psiCHECK2 哺乳细胞质粒 双荧光分析质粒
地表达。Mielke等构建了一种能够在哺乳动物中稳定表达异二聚体蛋白的载体系统，在这个系统中，编码抗体重链和轻链的cDNA及嘌呤霉素抗性基因被转录成三顺反子mRNA。内部的顺反子通过内核糖体进入位点(IREs)介导进行翻译，通过持续选择压力，无需繁琐的筛选过程，便可获得持久、稳定表达抗体分子的重组体。 哺乳动物细胞表达系统常用的宿主细胞有CHO、COS、BHK、SP2/0、NIH3T3等，不同的宿主细胞对蛋白表达水平和蛋白质的糖基化有不同的影响，因此在选择宿主细胞时应根据具体情况而定
，编码抗体重链和轻链的cDNA及嘌呤霉素抗性基因被转录成三顺反子mRNA。内部的顺反子通过内核糖体进入位点(IREs)介导进行翻译，通过持续选择压力，无需繁琐的筛选过程，便可获得持久、稳定表达抗体分子的重组体。 哺乳动物细胞表达系统常用的宿主细胞有CHO、COS、BHK、SP2/0、NIH3T3等，不同的宿主细胞对蛋白表达水平和蛋白质的糖基化有不同的影响，因此在选择宿主细胞时应根据具体情况而定。 利用基因工程技术表达外源蛋白。其产量还不高，难以满足大规模的实际应用。通过转
pCAG-IRES-Puro哺乳表达质粒
￥100 - 1000
