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- Xybio
- 上海
- P2236
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pCMV-MCS-FLAG-IRES2-EGFP
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCMV-MCS-FLAG-IRES2-EGFP哺乳表达质粒
别称: pCMV-MCS-FLAG-IRES2-EGFP
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： | 绿色 |
质粒简介
pCMV-MCS-FLAG-IRES2-EGFP质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3254/pENTR223-NFIC人源基因质粒 |
| P3255/pENTR223-IGK人源基因质粒 |
| P3256/pENTR223-RND3人源基因质粒 |
| P3257/pENTR223-NDUFAF1人源基因质粒 |
| P3258/pENTR223-BUB3人源基因质粒 |
| P3259/pENTR223-MELTF(1同义突变）人源基因质粒 |
| P3260/pENTR223-HAGHL人源基因质粒 |
| P3261/pENTR223-FAM49B人源基因质粒 |
| P3262/pENTR223-PRKAG1(1点突变）人源基因质粒 |
| P3263/pENTR223-COPE(2同义突变）人源基因质粒 |
| P3264/pENTR223-RIMS3(1点突变）人源基因质粒 |
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文献和实验GFP应该位于VEGF的C端 N端会干扰其分泌信号 影响其分泌 GFP很大 很可能影响VEGF的分泌 如果只是要筛带荧光的细胞 不需要标记VEGF 建议用pIRES2-EGFP非融合载体 要是需要标记的话 可以加小分子tag 比如flag 实在需要荧光标记VEGF的话 把GFP加在C端 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿
的真核表达载体 amp/neo pcDNA 3.1(-) myc-hisC 含His标签的真核表达载体 amp/neo pcDNA4/HisB 含His标签的真核表达载体 amp/neo pcDNA3 flag 含flag标签的真核表达载体 amp/neo pIRES 一个真核双表达载体，外源序列只要是带有起始密码子和终止密码子就可以进行表达了，载体提供了转录装置PCMV和polyA。载体本身没有阅读框，只有转录起始位点，翻译的起始就由插入序列自己完成了。MCSB的共翻译
pCDNA5to 哺乳细胞质粒 Amp pVAX1 哺乳细胞质粒 Kan 真核表达 pCMV-Flag-N 哺乳细胞质粒 Amp pOG44 哺乳细胞质粒
