pcDNA4-V5-HisA哺乳表达质粒

基本信息
名称：pcDNA4-V5-HisA哺乳表达质粒
别称: pCDNA4-V5-HisA

启动子:	CMV
复制子:	pUC
原核抗性:	Amp
筛选标记:	Zeo
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
真核抗性：	Zeo
荧光蛋白：

质粒简介
 pcDNA4-V5-HisA是一个哺乳细胞pCDNA系列表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5092 bp ds-DNA     circular SYN 21-DEC-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5092
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        235..614
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        615..818
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        863..881
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     CDS             1009..1050
                     /codon_start=1
                     /product="epitope tag from simian virus 5"
                     /label=V5 tag
                     /translation="GKPIPNPLLGLDST"
     CDS             1060..1077
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /label=6xHis
                     /translation="HHHHHH"
     polyA_signal    1106..1330
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      1376..1804
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        1818..2147
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      1998..2133
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     promoter        2195..2242
                     /label=EM7 promoter
                     /note="synthetic bacterial promoter "
     CDS             2261..2635
                     /codon_start=1
                     /gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus"
                     /product="antibiotic-binding protein"
                     /label=Zeo
                     /note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and 
                     Zeocin(TM)"
                     /translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD
                     VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR
                     EFALRDPAGNCVHFVAEEQD"
     polyA_signal    2765..2886
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(3337..3925)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(4096..4956)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(4957..5061)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
       61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
      121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
      181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
      241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
      301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
      361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
      421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
      481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
      541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
      601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
      661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
      721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
      781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
      841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
      901 gtttaaactt aagcttggta ccgagctcgg atccactagt ccagtgtggt ggaattctgc
      961 agatatccag cacagtggcg gccgctcgag tctagagggc ccttcgaagg taagcctatc
     1021 cctaaccctc tcctcggtct cgattctacg cgtaccggtc atcatcacca tcaccattga
     1081 gtttaaaccc gctgatcagc ctcgactgtg ccttctagtt gccagccatc tgttgtttgc
     1141 ccctcccccg tgccttcctt gaccctggaa ggtgccactc ccactgtcct ttcctaataa
     1201 aatgaggaaa ttgcatcgca ttgtctgagt aggtgtcatt ctattctggg gggtggggtg
     1261 gggcaggaca gcaaggggga ggattgggaa gacaatagca ggcatgctgg ggatgcggtg
     1321 ggctctatgg cttctgaggc ggaaagaacc agctggggct ctagggggta tccccacgcg
     1381 ccctgtagcg gcgcattaag cgcggcgggt gtggtggtta cgcgcagcgt gaccgctaca
     1441 cttgccagcg ccctagcgcc cgctcctttc gctttcttcc cttcctttct cgccacgttc
     1501 gccggctttc cccgtcaagc tctaaatcgg gggctccctt tagggttccg atttagtgct
     1561 ttacggcacc tcgaccccaa aaaacttgat tagggtgatg gttcacgtag tgggccatcg
     1621 ccctgataga cggtttttcg ccctttgacg ttggagtcca cgttctttaa tagtggactc
     1681 ttgttccaaa ctggaacaac actcaaccct atctcggtct attcttttga tttataaggg
     1741 attttgccga tttcggccta ttggttaaaa aatgagctga tttaacaaaa atttaacgcg
     1801 aattaattct gtggaatgtg tgtcagttag ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag
     1861 gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac caggtgtgga aagtccccag
     1921 gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accatagtcc
     1981 cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc
     2041 atggctgact aatttttttt atttatgcag aggccgaggc cgcctctgcc tctgagctat
     2101 tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt ttgcaaaaag ctcccgggag
     2161 cttgtatatc cattttcgga tctgatcagc acgtgttgac aattaatcat cggcatagta
     2221 tatcggcata gtataatacg acaaggtgag gaactaaacc atggccaagt tgaccagtgc
     2281 cgttccggtg ctcaccgcgc gcgacgtcgc cggagcggtc gagttctgga ccgaccggct
     2341 cgggttctcc cgggacttcg tggaggacga cttcgccggt gtggtccggg acgacgtgac
     2401 cctgttcatc agcgcggtcc aggaccaggt ggtgccggac aacaccctgg cctgggtgtg
     2461 ggtgcgcggc ctggacgagc tgtacgccga gtggtcggag gtcgtgtcca cgaacttccg
     2521 ggacgcctcc gggccggcca tgaccgagat cggcgagcag ccgtgggggc gggagttcgc
     2581 cctgcgcgac ccggccggca actgcgtgca cttcgtggcc gaggagcagg actgacacgt
     2641 gctacgagat ttcgattcca ccgccgcctt ctatgaaagg ttgggcttcg gaatcgtttt
     2701 ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg cggggatctc atgctggagt tcttcgccca
     2761 ccccaacttg tttattgcag cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt
     2821 cacaaataaa gcattttttt cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt
     2881 atcttatcat gtctgtatac cgtcgacctc tagctagagc ttggcgtaat catggtcata
     2941 gctgtttcct gtgtgaaatt gttatccgct cacaattcca cacaacatac gagccggaag
     3001 cataaagtgt aaagcctggg gtgcctaatg agtgagctaa ctcacattaa ttgcgttgcg
     3061 ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca
     3121 acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc
     3181 gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg
     3241 gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa
     3301 ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga
     3361 cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag
     3421 ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct
     3481 taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg
     3541 ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc
     3601 ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt
     3661 aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta
     3721 tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac
     3781 agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc
     3841 ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat
     3901 tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc
     3961 tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt
     4021 cacctagatc cttttaaatt aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta tatatgagta
     4081 aacttggtct gacagttacc aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct
     4141 atttcgttca tccatagttg cctgactccc cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg
     4201 cttaccatct ggccccagtg ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac cggctccaga
     4261 tttatcagca ataaaccagc cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt
     4321 atccgcctcc atccagtcta ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta gttcgccagt
     4381 taatagtttg cgcaacgttg ttgccattgc tacaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt
     4441 tggtatggct tcattcagct ccggttccca acgatcaagg cgagttacat gatcccccat
     4501 gttgtgcaaa aaagcggtta gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc
     4561 cgcagtgtta tcactcatgg ttatggcagc actgcataat tctcttactg tcatgccatc
     4621 cgtaagatgc ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat
     4681 gcggcgaccg agttgctctt gcccggcgtc aatacgggat aataccgcgc cacatagcag
     4741 aactttaaaa gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct caaggatctt
     4801 accgctgttg agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc
     4861 ttttactttc accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa
     4921 gggaataagg gcgacacgga aatgttgaat actcatactc ttcctttttc aatattattg
     4981 aagcatttat cagggttatt gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa
     5041 taaacaaata ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tc
//
 

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2459/pENTR223-POMT2人源基因质粒

P2460/pENTR223-CLPB人源基因质粒

P2461/pENTR223-KIF1B人源基因质粒

P2462/pENTR223-MSTO1人源基因质粒

P2463/pENTR223-ITIH5(3点突变）人源基因质粒

P2464/pENTR223-DVL3人源基因质粒

P2465/pENTR223-IGHM人源基因质粒

P2466/pENTR223-TAP2-1395A人源基因质粒

P2467/pENTR223-OXR1-G3T人源基因质粒

P2468/pENTR223-CFB人源基因质粒

P2469/pENTR223-TTC14人源基因质粒

P2470/pENTR223-USHBP1人源基因质粒