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- Xybio
- 上海
- P1384
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pSNAP-Tag(T7)2
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pSNAP-Tag(T7)2大肠表达质粒
别称: pSNAP-Tag(T7)2
| 启动子: | T7 promoter |
|---|---|
| 复制子: | Ori，F1 ori |
| 终止子: | rrnB T1 terminator |
| 质粒分类: | 大肠杆菌质粒；大肠其它质粒；其它大肠质粒 |
| 质粒大小: | 6495bp |
| 质粒标签: | SNAP-tag |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pSNAP-Tag(T7)2是一个大肠杆菌表达质粒，T7启动子驱动SNAP标签和目的基因融合表达。
质粒图谱
质粒序列
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2376/pECMV-3×FLAG-MRP4(2364-3837bp)人源基因质粒 |
| P2377/pEGFP-C3-ATG5人源基因质粒 |
| P2412/pECMV-3×FLAG-MAPK15人源基因质粒 |
| P2413/pECMV-3×FLAG-MS4A3人源基因质粒 |
| P2414/pECMV-3×FLAG-C19orf36人源基因质粒 |
| P2415/pECMV-3×FLAG-TIGIT人源基因质粒 |
| P2416/pECMV-3×FLAG-STXBP1人源基因质粒 |
| P2417/pECMV-3×FLAG-HDAC7人源基因质粒 |
| P2418/pECMV-3×FLAG-CXCR4人源基因质粒 |
| P2961/pECMV-3×FLAG-GUCY2C人源基因质粒 |
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文献和实验中，如在金属蛋白的纯化。 如果对比两个系统耐受的pH值，Strep-tag®系统则耐受pH范围在4-10，在pH敏感蛋白的纯化选择上具有优势。His-tag系统不应该被使用在低pH条件的纯化中，在pH4.5-6的情况下，会导致蛋白的洗脱而造成流失。 表达宿主 在生产蛋白质过程中，宿主的选择十分重要，因其不仅影响蛋白的表达，而且也影响随后的纯化过程。除耐受缓冲液条件有限外，当选择宿主表达系统时，His-tag也有一些局限。 His-tag大肠杆菌表达系统中较为有利，但实际情况下对于酵母，哺乳
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凝集素，四聚体球蛋白，含有糖基结合位点，因此 ConA 是一种糖类结合蛋白。ConA 磁珠能与细胞膜上的糖蛋白结合，从而吸附细胞，使对细胞的实验操作可视化，减少在后续实验过程中的细胞的损失。 不建议使用离心法代替 ConA beads，因为离心法不适合于低细胞数，在洗涤的过程中，损失很大，而且大肠杆菌残留的 DNA 无法进行可靠的校准。 5.做 ChIP-seq 的时候不需要二抗，CUT&Tag 二抗的作用是什么？二抗是必须的吗？可以用带修饰（比如 HRP 修饰）的二抗
