pEZZ18大肠表达质粒

基本信息
名称：pEZZ18大肠表达质粒
别称: pEZZ18

质粒分类:	大肠杆菌载体：蛋白表达质粒
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	大肠杆菌
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pEZZ18是一个蛋白表达载体，可以利用蛋白质A的信号肽将目标蛋白分泌到细胞外，避免蛋白在胞内被降解，利用Z基因产生的功能区蛋白进行筛选．
质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4591 bp ds-DNA     circular SYN 30-SEP-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pEZZ18
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4591)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4591
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        96..200
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     CDS             201..1061
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      1232..1820
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     misc_feature    2247..2431
                     /note="spa promoter"
     misc_feature    2432..2539
                     /note="protein A signal"
     CDS             2561..2731
                     /codon_start=1
                     /product="IgG-binding unit of Staphylococcus aureus protein
                     A"
                     /note="ProtA"
                     /translation="DNKFNKEQQNAFYEILHLPNLNEEQRNAFIQSLKDDPSQSANLLA
                     EAKKLNDAQAPK"
     CDS             2735..2905
                     /codon_start=1
                     /product="IgG-binding unit of Staphylococcus aureus protein
                     A"
                     /note="ProtA"
                     /translation="DNKFNKEQQNAFYEILHLPNLNEEQRNAFIQSLKDDPSQSANLLA
                     EAKKLNDAQAPK"
     misc_feature    2914..2970
                     /note="MCS"
                     /note="pUC18/19 multiple cloning site"
     rep_origin      3431..3944
                     /direction=RIGHT
                     /note="M13 ori"
                     /note="M13 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
        1 gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata ataatggttt
       61 cttagacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt
      121 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat
      181 aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt
      241 ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg
      301 ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga
      361 tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc
      421 tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac
      481 actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg
      541 gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca
      601 acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg
      661 gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg
      721 acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg
      781 gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag
      841 ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg
      901 gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct
      961 cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac
     1021 agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac caagtttact
     1081 catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga
     1141 tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt
     1201 cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct
     1261 gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc
     1321 taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgtcc
     1381 ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc
     1441 tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg
     1501 ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt
     1561 cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg
     1621 agcattgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg
     1681 gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt
     1741 atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag
     1801 gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt
     1861 gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta
     1921 ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt
     1981 cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc
     2041 cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca
     2101 acgcaattaa tgtgagttag ctcactcatt aggcacccca ggctttacac tttatgcttc
     2161 cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg
     2221 accatgatta cgaattagcg gccgctagcc gaaatagcgt gattttgcgg ttttaagcct
     2281 tttacttcct gaataaatct ttcagcaaaa tatttatttt ataagttgta aaacttacct
     2341 ttaaatttaa ttataaatat agattttagt attgcaatac ataattcgtt atattatgat
     2401 gactttacaa atacatacag ggggtattaa tttgaaaaag aaaaacattt attcaattcg
     2461 taaactaggt gtaggtattg catctgtaac tttaggtaca ttacttatat ctggtggcgt
     2521 aacacctgct gcaaatgctg cgcaacacga tgaagccgta gacaacaaat tcaacaaaga
     2581 acaacaaaac gcgttctatg agatcttaca tttacctaac ttaaacgaag aacaacgaaa
     2641 cgccttcatc caaagtttaa aagatgaccc aagccaaagc gctaaccttt tagcagaagc
     2701 taaaaagcta aatgatgctc aggcgccgaa agtagacaac aaattcaaca aagaacaaca
     2761 aaacgcgttc tatgagatct tacatttacc taacttaaac gaagaacaac gaaacgcctt
     2821 catccaaagt ttaaaagatg acccaagcca aagcgctaac cttttagcag aagctaaaaa
     2881 gctaaatgat gctcaggcgc cgaaagtaga cgcgaattcg agctcggtac ccggggatcc
     2941 tctagagtcg acctgcaggc atgcaagctt ggcactggcc gtcgttttac aacgtcgtga
     3001 ctgggaaaac cctggcgtta cccaacttaa tcgccttgca gcacatcccc ctttcgccag
     3061 ctggcgtaat agcgaagagg cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc gcagcctgaa
     3121 tggcgaatgg cgattccgtt gcaatggctg gcggtaatat tgttctggat attaccagca
     3181 aggccgatag tttgagttct tctactcagg caagtgatgt tattactaat caaagaagta
     3241 ttgcgacaac ggttaatttg cgtgatggac agactctttt actcggtggc ctcactgatt
     3301 ataaaaacac ttctcaggat tctggcgtac cgttcctgtc taaaatccct ttaatcggcc
     3361 tcctgtttag ctcccgctct gattctaacg aggaaagcac gttatacgtg ctcgtcaaag
     3421 caaccatagt acgcgccctg tagcggcgca ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc
     3481 agcgtgaccg ctacacttgc cagcgcccta gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc
     3541 tttctcgcca cgttcgccgg ctttccccgt caagctctaa atcgggggct ccctttaggg
     3601 ttccgattta gtgctttacg gcacctcgac cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca
     3661 cgtagtgggc catcgccctg atagacggtt tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc
     3721 tttaatagtg gactcttgtt ccaaactgga acaacactca accctatctc ggtctattct
     3781 tttgatttat aagggatttt gccgatttcg gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa
     3841 caaaaattta acgcgaattt taacaaaata ttaacgttta caatttaaat atttgcttat
     3901 acaatcttcc tgtttttggg gcttttctga ttatcaaccg gggtacatat gattgacatg
     3961 ctagttttac gattaccgtt catcgattct cttgtttgct ccagactctc aggcaatgac
     4021 ctgatagcct ttgtagagac ctctcaaaaa tagctaccct ctccggcatg aatttatcag
     4081 ctagaacggt tgaatatcat attgatggtg atttgactgt ctccggcctt tctcacccgt
     4141 ttgaatcttt acctacacat tactcaggca ttgcatttaa aatatatgag ggttctaaaa
     4201 atttttatcc ttgcgttgaa ataaaggctt ctcccgcaaa agtattacag ggtcataatg
     4261 tttttggtac aaccgattta gctttatgct ctgaggcttt attgcttaat tttgctaatt
     4321 ctttgccttg cctgtatgat ttattggatg ttggaattga tgcggtattt tctccttacg
     4381 catctgtgcg gtatttcaca ccgcatatgg tgcactctca gtacaatctg ctctgatgcc
     4441 gcatagttaa gccagccccg acacccgcca acacccgctg acgcgccctg acgggcttgt
     4501 ctgctcccgg catccgctta cagacaagct gtgaccgtct ccgggagctg catgtgtcag
     4561 aggttttcac cgtcatcacc gaaacgcgcg a
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1464/EPI300大肠克隆菌(需要配套试剂)

P1465/EPI400大肠克隆菌

P1466/BW25113大肠克隆菌

P1467/ET12567(pUZ8002)大肠克隆菌

P1468/TG1大肠克隆菌

P1469/HB2151大肠克隆菌

P1470/BL21大肠表达菌

P1471/pREP4/BL21大肠表达菌

P1472/BL21(DE3)大肠表达菌

P1473/pREP4/BL21(DE3)大肠表达菌

P1474/BL21(DE3)pLysS大肠有毒蛋白表达菌