- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P0096
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pKD4
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pKD4大肠敲除质粒菌种
别称: pKD4
| 复制子: | R6K |
|---|---|
| 原核抗性: | Amp,Kan |
| 克隆菌株: | S17-1λpir |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 基因敲除 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | Red |
| 原核抗性： | Amp,Kan |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pKD4质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1741/pGAS-TA-Luc哺乳报告质粒 |
| P0471/pMIR-Report Luciferase哺乳报告质粒 |
| P1829/pMIR-REPORT β-gal Control哺乳报告质粒 |
| P0697/pP53-TA-luc哺乳报告质粒 |
| P0698/pStat3-TA-luc哺乳报告质粒 |
| P0756/pSBE-Luc哺乳报告质粒 |
| P0788/pGluc-Basic哺乳报告质粒 |
| P0861/pTRE3G-LUC哺乳报告质粒 |
| P1044/pAP1-Luc哺乳报告质粒 |
| P1742/pHSE-Luc哺乳报告质粒 |
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文献和实验明书的操作步骤操作以确保残留的 Rinse B 被甩干。 7.为什么提出的质粒的多是二聚体和多聚体形式？ 是在质粒复制过程中形成的，与宿主菌相关，电泳可检测出。 8.质粒为何会丢失？ 细菌培养不要超过 16 小时，否则细菌会崩溃，引起细菌大量死亡，导致质粒丢失。有些质粒本身不能在某些菌种中稳定存在，经多次转接后有可能造成质粒丢失。因此不要频繁转接，每次接种时应接种单菌落。另外，检查筛选用抗生素使用浓度是否正确。 9. 大肠杆菌老化： 请涂布平板培养后，重新挑选新菌落进行液体培养。 10
douermm 最近需要扩增质粒，RNAi用的。接大肠杆菌种用的LB培养基，看有的文章上写的配成PH=7.0的，有的写配成PH=7.5的，到底应该配成多少呢？还有，用买的比如麦康凯培养基，会不会比自己配的效果好？谢谢~！ slytjiaofei ph7或7.5对大肠杆菌生长基本没有任何影响。 douermm 谢谢楼上~ 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿
微生物基因组编辑微生物被广泛应用于制药、农药生产、食品工业、能源以及一系列新兴的应用，通过对微生物开展基因组研究，不断发现新的特殊酶基因及重要代谢过程和代谢产物生成相关的功能基因，并将其应用于生产以及传统工业、工艺的改造，在生物制药、污染治理、能源及化学品生物制造产业具有一定的应用价值。早期的菌种改造主要集中于随机筛选和简单的理性筛选，但是传统方法耗时、费力、工作量大且诱变结果不具定向性的缺点随着时间推移也逐渐暴露出来。随着现代分子生物学技术的发展，出现许多更具定向性和正突变性的菌种
