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- 2025年07月15日
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- 详细信息
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- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pET24a
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pET-24a大肠表达质粒
别称: pET24a
质粒属性
质粒简介
The pET-24a-d(+) vectors carry an N-terminal T7•Tag® sequence plus an optional C-terminal His•Tag® sequence. These vectors differ from pET-21a-d(+) only by their selectable marker (kanamycin vs. ampicillin resistance). Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, singlestranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer .
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5310 bp ds-DNA circular SYN 31-7-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 4
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5310)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-7-31 MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5310
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
source 247..269
/organism="Enterobacteria phage T7"
/mol_type="genomic DNA"
/db_xref="taxon:10760"
terminator 26..73
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(140..157)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS complement(207..239)
/codon_start=1
/product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
/note="T7 tag (gene 10 leader)"
/note="promotes efficient translation in E. coli"
/translation="MASMTGGQQMG"
RBS 247..269
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
protein_bind 284..308
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(309..327)
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter 636..713
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
CDS 714..1796
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
CDS 2605..2796
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
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/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(3226..3814)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS 3936..4751
/codon_start=1
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
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ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
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/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgt
181 cgacggagct cgaattcgga tccgcgaccc atttgctgtc caccagtcat gctagccata
241 tgtatatctc cttcttaaag ttaaacaaaa ttatttctag aggggaattg ttatccgctc
301 acaattcccc tatagtgagt cgtattaatt tcgcgggatc gagatctcga tcctctacgc
361 cggacgcatc gtggccggca tcaccggcgc cacaggtgcg gttgctggcg cctatatcgc
421 cgacatcacc gatggggaag atcgggctcg ccacttcggg ctcatgagcg cttgtttcgg
481 cgtgggtatg gtggcaggcc ccgtggccgg gggactgttg ggcgccatct ccttgcatgc
541 accattcctt gcggcggcgg tgctcaacgg cctcaaccta ctactgggct gcttcctaat
601 gcaggagtcg cataagggag agcgtcgaga tcccggacac catcgaatgg cgcaaaacct
661 ttcgcggtat ggcatgatag cgcccggaag agagtcaatt cagggtggtg aatgtgaaac
721 cagtaacgtt atacgatgtc gcagagtatg ccggtgtctc ttatcagacc gtttcccgcg
781 tggtgaacca ggccagccac gtttctgcga aaacgcggga aaaagtggaa gcggcgatgg
841 cggagctgaa ttacattccc aaccgcgtgg cacaacaact ggcgggcaaa cagtcgttgc
901 tgattggcgt tgccacctcc agtctggccc tgcacgcgcc gtcgcaaatt gtcgcggcga
961 ttaaatctcg cgccgatcaa ctgggtgcca gcgtggtggt gtcgatggta gaacgaagcg
1021 gcgtcgaagc ctgtaaagcg gcggtgcaca atcttctcgc gcaacgcgtc agtgggctga
1081 tcattaacta tccgctggat gaccaggatg ccattgctgt ggaagctgcc tgcactaatg
1141 ttccggcgtt atttcttgat gtctctgacc agacacccat caacagtatt attttctccc
1201 atgaagacgg tacgcgactg ggcgtggagc atctggtcgc attgggtcac cagcaaatcg
1261 cgctgttagc gggcccatta agttctgtct cggcgcgtct gcgtctggct ggctggcata
1321 aatatctcac tcgcaatcaa attcagccga tagcggaacg ggaaggcgac tggagtgcca
1381 tgtccggttt tcaacaaacc atgcaaatgc tgaatgaggg catcgttccc actgcgatgc
1441 tggttgccaa cgatcagatg gcgctgggcg caatgcgcgc cattaccgag tccgggctgc
1501 gcgttggtgc ggatatctcg gtagtgggat acgacgatac cgaagacagc tcatgttata
1561 tcccgccgtt aaccaccatc aaacaggatt ttcgcctgct ggggcaaacc agcgtggacc
1621 gcttgctgca actctctcag ggccaggcgg tgaagggcaa tcagctgttg cccgtctcac
1681 tggtgaaaag aaaaaccacc ctggcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg
1741 ccgattcatt aatgcagctg gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc
1801 aacgcaatta atgtaagtta gctcactcat taggcaccgg gatctcgacc gatgcccttg
1861 agagccttca acccagtcag ctccttccgg tgggcgcggg gcatgactat cgtcgccgca
1921 cttatgactg tcttctttat catgcaactc gtaggacagg tgccggcagc gctctgggtc
1981 attttcggcg aggaccgctt tcgctggagc gcgacgatga tcggcctgtc gcttgcggta
2041 ttcggaatct tgcacgccct cgctcaagcc ttcgtcactg gtcccgccac caaacgtttc
2101 ggcgagaagc aggccattat cgccggcatg gcggccccac gggtgcgcat gatcgtgctc
2161 ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca
2221 ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc tgctgcaaaa cgtctgcgac ctgagcaaca
2281 acatgaatgg tcttcggttt ccgtgtttcg taaagtctgg aaacgcggaa gtcagcgccc
2341 tgcaccatta tgttccggat ctgcatcgca ggatgctgct ggctaccctg tggaacacct
2401 acatctgtat taacgaagcg ctggcattga ccctgagtga tttttctctg gtcccgccgc
2461 atccataccg ccagttgttt accctcacaa cgttccagta accgggcatg ttcatcatca
2521 gtaacccgta tcgtgagcat cctctctcgt ttcatcggta tcattacccc catgaacaga
2581 aatccccctt acacggaggc atcagtgacc aaacaggaaa aaaccgccct taacatggcc
2641 cgctttatca gaagccagac attaacgctt ctggagaaac tcaacgagct ggacgcggat
2701 gaacaggcag acatctgtga atcgcttcac gaccacgctg atgagcttta ccgcagctgc
2761 ctcgcgcgtt tcggtgatga cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc
2821 acagcttgtc tgtaagcgga tgccgggagc agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt
2881 gttggcgggt gtcggggcgc agccatgacc cagtcacgta gcgatagcgg agtgtatact
2941 ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg tactgagagt gcaccatata tgcggtgtga
3001 aataccgcac agatgcgtaa ggagaaaata ccgcatcagg cgctcttccg cttcctcgct
3061 cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc
3121 ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg
3181 ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg
3241 cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg
3301 actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac
3361 cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca
3421 tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt
3481 gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc
3541 caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag
3601 agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac
3661 tagaaggaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt
3721 tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa
3781 gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg
3841 gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga acaataaaac
3901 tgtctgctta cataaacagt aatacaaggg gtgttatgag ccatattcaa cgggaaacgt
3961 cttgctctag gccgcgatta aattccaaca tggatgctga tttatatggg tataaatggg
4021 ctcgcgataa tgtcgggcaa tcaggtgcga caatctatcg attgtatggg aagcccgatg
4081 cgccagagtt gtttctgaaa catggcaaag gtagcgttgc caatgatgtt acagatgaga
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4201 gtactcctga tgatgcatgg ttactcacca ctgcgatccc cgggaaaaca gcattccagg
4261 tattagaaga atatcctgat tcaggtgaaa atattgttga tgcgctggca gtgttcctgc
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4561 ggaaattaat aggttgtatt gatgttggac gagtcggaat cgcagaccga taccaggatc
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4681 aaaaatatgg tattgataat cctgatatga ataaattgca gtttcatttg atgctcgatg
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4801 caaatagggg ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgaaattgt aaacgttaat
4861 attttgttaa aattcgcgtt aaatttttgt taaatcagct cattttttaa ccaataggcc
4921 gaaatcggca aaatccctta taaatcaaaa gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt
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5281 gcgccgctac agggcgcgtc ccattcgcca
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pET-24a大肠表达质粒
别称: pET24a
| 启动子: | T7 |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 终止子: | T7 terminator |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；PET系列表达质粒 |
| 质粒大小: | 5310bp |
| 质粒标签: | N-T7, C-6×His |
| 原核抗性: | Kan |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 大肠杆菌BL21(DE3) |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3'测序引物: | T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
The pET-24a-d(+) vectors carry an N-terminal T7•Tag® sequence plus an optional C-terminal His•Tag® sequence. These vectors differ from pET-21a-d(+) only by their selectable marker (kanamycin vs. ampicillin resistance). Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, singlestranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer .
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5310 bp ds-DNA circular SYN 31-7-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 4
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5310)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-7-31 MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5310
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
source 247..269
/organism="Enterobacteria phage T7"
/mol_type="genomic DNA"
/db_xref="taxon:10760"
terminator 26..73
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(140..157)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
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/codon_start=1
/product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
/note="T7 tag (gene 10 leader)"
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RBS 247..269
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
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/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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/note="lacI promoter"
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/codon_start=1
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/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
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ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
CDS 2605..2796
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number"
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DELYRSCLARFGDDGENL"
misc_feature 2898..3040
/note="bom"
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/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS 3936..4751
/codon_start=1
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
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KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
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ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin complement(4844..5299)
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/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgt
181 cgacggagct cgaattcgga tccgcgaccc atttgctgtc caccagtcat gctagccata
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481 cgtgggtatg gtggcaggcc ccgtggccgg gggactgttg ggcgccatct ccttgcatgc
541 accattcctt gcggcggcgg tgctcaacgg cctcaaccta ctactgggct gcttcctaat
601 gcaggagtcg cataagggag agcgtcgaga tcccggacac catcgaatgg cgcaaaacct
661 ttcgcggtat ggcatgatag cgcccggaag agagtcaatt cagggtggtg aatgtgaaac
721 cagtaacgtt atacgatgtc gcagagtatg ccggtgtctc ttatcagacc gtttcccgcg
781 tggtgaacca ggccagccac gtttctgcga aaacgcggga aaaagtggaa gcggcgatgg
841 cggagctgaa ttacattccc aaccgcgtgg cacaacaact ggcgggcaaa cagtcgttgc
901 tgattggcgt tgccacctcc agtctggccc tgcacgcgcc gtcgcaaatt gtcgcggcga
961 ttaaatctcg cgccgatcaa ctgggtgcca gcgtggtggt gtcgatggta gaacgaagcg
1021 gcgtcgaagc ctgtaaagcg gcggtgcaca atcttctcgc gcaacgcgtc agtgggctga
1081 tcattaacta tccgctggat gaccaggatg ccattgctgt ggaagctgcc tgcactaatg
1141 ttccggcgtt atttcttgat gtctctgacc agacacccat caacagtatt attttctccc
1201 atgaagacgg tacgcgactg ggcgtggagc atctggtcgc attgggtcac cagcaaatcg
1261 cgctgttagc gggcccatta agttctgtct cggcgcgtct gcgtctggct ggctggcata
1321 aatatctcac tcgcaatcaa attcagccga tagcggaacg ggaaggcgac tggagtgcca
1381 tgtccggttt tcaacaaacc atgcaaatgc tgaatgaggg catcgttccc actgcgatgc
1441 tggttgccaa cgatcagatg gcgctgggcg caatgcgcgc cattaccgag tccgggctgc
1501 gcgttggtgc ggatatctcg gtagtgggat acgacgatac cgaagacagc tcatgttata
1561 tcccgccgtt aaccaccatc aaacaggatt ttcgcctgct ggggcaaacc agcgtggacc
1621 gcttgctgca actctctcag ggccaggcgg tgaagggcaa tcagctgttg cccgtctcac
1681 tggtgaaaag aaaaaccacc ctggcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg
1741 ccgattcatt aatgcagctg gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc
1801 aacgcaatta atgtaagtta gctcactcat taggcaccgg gatctcgacc gatgcccttg
1861 agagccttca acccagtcag ctccttccgg tgggcgcggg gcatgactat cgtcgccgca
1921 cttatgactg tcttctttat catgcaactc gtaggacagg tgccggcagc gctctgggtc
1981 attttcggcg aggaccgctt tcgctggagc gcgacgatga tcggcctgtc gcttgcggta
2041 ttcggaatct tgcacgccct cgctcaagcc ttcgtcactg gtcccgccac caaacgtttc
2101 ggcgagaagc aggccattat cgccggcatg gcggccccac gggtgcgcat gatcgtgctc
2161 ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca
2221 ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc tgctgcaaaa cgtctgcgac ctgagcaaca
2281 acatgaatgg tcttcggttt ccgtgtttcg taaagtctgg aaacgcggaa gtcagcgccc
2341 tgcaccatta tgttccggat ctgcatcgca ggatgctgct ggctaccctg tggaacacct
2401 acatctgtat taacgaagcg ctggcattga ccctgagtga tttttctctg gtcccgccgc
2461 atccataccg ccagttgttt accctcacaa cgttccagta accgggcatg ttcatcatca
2521 gtaacccgta tcgtgagcat cctctctcgt ttcatcggta tcattacccc catgaacaga
2581 aatccccctt acacggaggc atcagtgacc aaacaggaaa aaaccgccct taacatggcc
2641 cgctttatca gaagccagac attaacgctt ctggagaaac tcaacgagct ggacgcggat
2701 gaacaggcag acatctgtga atcgcttcac gaccacgctg atgagcttta ccgcagctgc
2761 ctcgcgcgtt tcggtgatga cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc
2821 acagcttgtc tgtaagcgga tgccgggagc agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt
2881 gttggcgggt gtcggggcgc agccatgacc cagtcacgta gcgatagcgg agtgtatact
2941 ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg tactgagagt gcaccatata tgcggtgtga
3001 aataccgcac agatgcgtaa ggagaaaata ccgcatcagg cgctcttccg cttcctcgct
3061 cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc
3121 ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg
3181 ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg
3241 cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg
3301 actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac
3361 cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca
3421 tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt
3481 gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc
3541 caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag
3601 agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac
3661 tagaaggaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt
3721 tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa
3781 gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg
3841 gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga acaataaaac
3901 tgtctgctta cataaacagt aatacaaggg gtgttatgag ccatattcaa cgggaaacgt
3961 cttgctctag gccgcgatta aattccaaca tggatgctga tttatatggg tataaatggg
4021 ctcgcgataa tgtcgggcaa tcaggtgcga caatctatcg attgtatggg aagcccgatg
4081 cgccagagtt gtttctgaaa catggcaaag gtagcgttgc caatgatgtt acagatgaga
4141 tggtcagact aaactggctg acggaattta tgcctcttcc gaccatcaag cattttatcc
4201 gtactcctga tgatgcatgg ttactcacca ctgcgatccc cgggaaaaca gcattccagg
4261 tattagaaga atatcctgat tcaggtgaaa atattgttga tgcgctggca gtgttcctgc
4321 gccggttgca ttcgattcct gtttgtaatt gtccttttaa cagcgatcgc gtatttcgtc
4381 tcgctcaggc gcaatcacga atgaataacg gtttggttga tgcgagtgat tttgatgacg
4441 agcgtaatgg ctggcctgtt gaacaagtct ggaaagaaat gcataaactt ttgccattct
4501 caccggattc agtcgtcact catggtgatt tctcacttga taaccttatt tttgacgagg
4561 ggaaattaat aggttgtatt gatgttggac gagtcggaat cgcagaccga taccaggatc
4621 ttgccatcct atggaactgc ctcggtgagt tttctccttc attacagaaa cggctttttc
4681 aaaaatatgg tattgataat cctgatatga ataaattgca gtttcatttg atgctcgatg
4741 agtttttcta agaattaatt catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa
4801 caaatagggg ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgaaattgt aaacgttaat
4861 attttgttaa aattcgcgtt aaatttttgt taaatcagct cattttttaa ccaataggcc
4921 gaaatcggca aaatccctta taaatcaaaa gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt
4981 ccagtttgga acaagagtcc actattaaag aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa
5041 accgtctatc agggcgatgg cccactacgt gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg
5101 tcgaggtgcc gtaaagcact aaatcggaac cctaaaggga gcccccgatt tagagcttga
5161 cggggaaagc cggcgaacgt ggcgagaaag gaagggaaga aagcgaaagg agcgggcgct
5221 agggcgctgg caagtgtagc ggtcacgctg cgcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat
5281 gcgccgctac agggcgcgtc ccattcgcca
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2698/pENTR223-IMAGE4341068人源基因质粒 |
| P2699/pENTR223-MRPS27人源基因质粒 |
| P2700/pENTR223-VPS29人源基因质粒 |
| P2701/pENTR223-PARD6A人源基因质粒 |
| P2702/pENTR223-CDC37L1-A997人源基因质粒 |
| P2703/pENTR223-CYSLTR1-G815C人源基因质粒 |
| P2704/pENTR223-CAB39L-G278A人源基因质粒 |
| P2705/pENTR223-AGPAT2-G598人源基因质粒 |
| P2706/pENTR223-CGREF1人源基因质粒 |
| P2707/pENTR223-KCNE3人源基因质粒 |
| P2708/pENTR223-FHL3人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的，但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌中表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction system（pET系列质粒）的发明者。 T7系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了，但凡表达蛋白的兄弟姐妹们的不可能不知道这个系统
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
pET22b 大肠杆菌质粒 Amp pET23a 大肠杆菌质粒 Amp pET24a 大肠杆菌质粒 Kan pET25b 大肠杆菌质粒 Amp
pET-24a大肠表达质粒
￥100 - 1000
