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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pACYC-184
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pACYC184大肠克隆质粒
别称: pACYC-184
复制子: p15A
质粒分类: 大肠系列质粒；大肠克隆质粒；基因克隆质粒
质粒大小：4245bp
原核抗性: Chl,Tet
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：空载体
基因类型：cDNA
原核抗性：Chl,Tet
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pACYC184质粒是一种原核表达载体，含有p15A复制起点的大肠杆菌质粒克隆载体。这允许pACYC184在与ColE1相容性组的质粒（例如pBR322，pUC19）的细胞中共存。它是一个低拷贝数载体，每个细胞约15个拷贝，但可以用壮观霉素放大。由于cat基因的存在，氯霉素不能用于提高质粒产量（阻碍菌体复制，不阻碍质粒扩增）。
pACYC184 is an E. coli plasmid cloning vector containing the p15A origin of replication (1-4). This allows pACYC184 to coexist in cells with plasmids of the ColE1 compatibility group (e.g., pBR322, pUC19). It is a low copy number vector, at about 15 copies per cell (5), but can be amplifed with spectinomycin. Chloramphenicol cannot be used for amplifcation due to the presence of the cat gene.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4245 bp ds-DNA circular SYN 26-8-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 2
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4245)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-8-26 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4245
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter complement(220..322)
/note="cat promoter"
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
rep_origin complement(848..1393)
/direction=LEFT
/note="p15A ori"
/note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A
origin of replication can be propagated in E. coli cells
that contain a second plasmid with the ColE1 origin."
promoter 1505..1533
/note="tet promoter"
/note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
gene"
CDS 1581..2771
/codon_start=1
/gene="tet"
/product="tetracycline efflux protein"
/note="TcR"
/note="confers resistance to tetracycline"
/translation="MKSNNALIVILGTVTLDAVGIGLVMPVLPGLLRDIVHSDSIASHY
GVLLALYALMQFLCAPVLGAL-SDRFGRRPVLLASLLGATIDYAIMATTPVLWILYAGRI
VAGITGATGAVAGAYIADITDGEDRARHFGLMSACFGVGMVAGPVAGGLLGAISLHAPF
LAAAVLNGLNLLLGCFLMQESHKGERRPMPLRAFNPVSSFRWARGMTIVAALMTVFFIM
QLVGQVPAALWVIFGEDRFRWSATMIGLSLAVFGILHALAQAFVTGPATKRFGEKQAII
AGMAADALGYVLLAFATRGWMAFPIMILLASGGIGMPALQAMLSRQVDDDHQGQLQGSL
AALTSLTSITGPLIVTAIYAASASTWNGLAWIVGAALYLVCLPALRRGAWSRATST"
CDS complement(3805..219)
/codon_start=1
/gene="cat"
/product="chloramphenicol acetyltransferase"
/note="CmR"
/note="confers resistance to chloramphenicol"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
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DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"
ORIGIN
1 gaattccgga tgagcattca tcaggcgggc aagaatgtga ataaaggccg gataaaactt
61 gtgcttattt ttctttacgg tctttaaaaa ggccgtaata tccagctgaa cggtctggtt
121 ataggtacat tgagcaactg actgaaatgc ctcaaaatgt tctttacgat gccattggga
181 tatatcaacg gtggtatatc cagtgatttt tttctccatt ttagcttcct tagctcctga
241 aaatctcgat aactcaaaaa atacgcccgg tagtgatctt atttcattat ggtgaaagtt
301 ggaacctctt acgtgccgat caacgtctca ttttcgccaa aagttggccc agggcttccc
361 ggtatcaaca gggacaccag gatttattta ttctgcgaag tgatcttccg tcacaggtat
421 ttattcggcg caaagtgcgt cgggtgatgc tgccaactta ctgatttagt gtatgatggt
481 gtttttgagg tgctccagtg gcttctgttt ctatcagctg tccctcctgt tcagctactg
541 acggggtggt gcgtaacggc aaaagcaccg ccggacatca gcgctagcgg agtgtatact
601 ggcttactat gttggcactg atgagggtgt cagtgaagtg cttcatgtgg caggagaaaa
661 aaggctgcac cggtgcgtca gcagaatatg tgatacagga tatattccgc ttcctcgctc
721 actgactcgc tacgctcggt cgttcgactg cggcgagcgg aaatggctta cgaacggggc
781 ggagatttcc tggaagatgc caggaagata cttaacaggg aagtgagagg gccgcggcaa
841 agccgttttt ccataggctc cgcccccctg acaagcatca cgaaatctga cgctcaaatc
901 agtggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggcggctccc
961 tcgtgcgctc tcctgttcct gcctttcggt ttaccggtgt cattccgctg ttatggccgc
1021 gtttgtctca ttccacgcct gacactcagt tccgggtagg cagttcgctc caagctggac
1081 tgtatgcacg aaccccccgt tcagtccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt
1141 gagtccaacc cggaaagaca tgcaaaagca ccactggcag cagccactgg taattgattt
1201 agaggagtta gtcttgaagt catgcgccgg ttaaggctaa actgaaagga caagttttgg
1261 tgactgcgct cctccaagcc agttacctcg gttcaaagag ttggtagctc agagaacctt
1321 cgaaaaaccg ccctgcaagg cggttttttc gttttcagag caagagatta cgcgcagacc
1381 aaaacgatct caagaagatc atcttattaa tcagataaaa tatttctaga tttcagtgca
1441 atttatctct tcaaatgtag cacctgaagt cagccccata cgatataagt tgtaattctc
1501 atgtttgaca gcttatcatc gataagcttt aatgcggtag tttatcacag ttaaattgct
1561 aacgcagtca ggcaccgtgt atgaaatcta acaatgcgct catcgtcatc ctcggcaccg
1621 tcaccctgga tgctgtaggc ataggcttgg ttatgccggt actgccgggc ctcttgcggg
1681 atatcgtcca ttccgacagc atcgccagtc actatggcgt gctgctagcg ctatatgcgt
1741 tgatgcaatt tctatgcgca cccgttctcg gagcactgtc cgaccgcttt ggccgccgcc
1801 cagtcctgct cgcttcgcta cttggagcca ctatcgacta cgcgatcatg gcgaccacac
1861 ccgtcctgtg gatcctctac gccggacgca tcgtggccgg catcaccggc gccacaggtg
1921 cggttgctgg cgcctatatc gccgacatca ccgatgggga agatcgggct cgccacttcg
1981 ggctcatgag cgcttgtttc ggcgtgggta tggtggcagg ccccgtggcc gggggactgt
2041 tgggcgccat ctccttgcat gcaccattcc ttgcggcggc ggtgctcaac ggcctcaacc
2101 tactactggg ctgcttccta atgcaggagt cgcataaggg agagcgtcga ccgatgccct
2161 tgagagcctt caacccagtc agctccttcc ggtgggcgcg gggcatgact atcgtcgccg
2221 cacttatgac tgtcttcttt atcatgcaac tcgtaggaca ggtgccggca gcgctctggg
2281 tcattttcgg cgaggaccgc tttcgctgga gcgcgacgat gatcggcctg tcgcttgcgg
2341 tattcggaat cttgcacgcc ctcgctcaag ccttcgtcac tggtcccgcc accaaacgtt
2401 tcggcgagaa gcaggccatt atcgccggca tggcggccga cgcgctgggc tacgtcttgc
2461 tggcgttcgc gacgcgaggc tggatggcct tccccattat gattcttctc gcttccggcg
2521 gcatcgggat gcccgcgttg caggccatgc tgtccaggca ggtagatgac gaccatcagg
2581 gacagcttca aggatcgctc gcggctctta ccagcctaac ttcgatcact ggaccgctga
2641 tcgtcacggc gatttatgcc gcctcggcga gcacatggaa cgggttggca tggattgtag
2701 gcgccgccct ataccttgtc tgcctccccg cgttgcgtcg cggtgcatgg agccgggcca
2761 cctcgacctg aatggaagcc ggcggcacct cgctaacgga ttcaccactc caagaattgg
2821 agccaatcaa ttcttgcgga gaactgtgaa tgcgcaaacc aacccttggc agaacatatc
2881 catcgcgtcc gccatctcca gcagccgcac gcggcgcatc tcgggcagcg ttgggtcctg
2941 gccacgggtg cgcatgatcg tgctcctgtc gttgaggacc cggctaggct ggcggggttg
3001 ccttactggt tagcagaatg aatcaccgat acgcgagcga acgtgaagcg actgctgctg
3061 caaaacgtct gcgacctgag caacaacatg aatggtcttc ggtttccgtg tttcgtaaag
3121 tctggaaacg cggaagtccc ctacgtgctg ctgaagttgc ccgcaacaga gagtggaacc
3181 aaccggtgat accacgatac tatgactgag agtcaacgcc atgagcggcc tcatttctta
3241 ttctgagtta caacagtccg caccgctgtc cggtagctcc ttccggtggg cgcggggcat
3301 gactatcgtc gccgcactta tgactgtctt ctttatcatg caactcgtag gacaggtgcc
3361 ggcagcgccc aacagtcccc cggccacggg gcctgccacc atacccacgc cgaaacaagc
3421 gccctgcacc attatgttcc ggatctgcat cgcaggatgc tgctggctac cctgtggaac
3481 acctacatct gtattaacga agcgctaacc gtttttatca ggctctggga ggcagaataa
3541 atgatcatat cgtcaattat tacctccacg gggagagcct gagcaaactg gcctcaggca
3601 tttgagaagc acacggtcac actgcttccg gtagtcaata aaccggtaaa ccagcaatag
3661 acataagcgg ctatttaacg accctgccct gaaccgacga ccgggtcgaa tttgctttcg
3721 aatttctgcc attcatccgc ttattatcac ttattcaggc gtagcaccag gcgtttaagg
3781 gcaccaataa ctgccttaaa aaaattacgc cccgccctgc cactcatcgc agtactgttg
3841 taattcatta agcattctgc cgacatggaa gccatcacag acggcatgat gaacctgaat
3901 cgccagcggc atcagcacct tgtcgccttg cgtataatat ttgcccatgg tgaaaacggg
3961 ggcgaagaag ttgtccatat tggccacgtt taaatcaaaa ctggtgaaac tcacccaggg
4021 attggctgag acgaaaaaca tattctcaat aaacccttta gggaaatagg ccaggttttc
4081 accgtaacac gccacatctt gcgaatatat gtgtagaaac tgccggaaat cgtcgtggta
4141 ttcactccag agcgatgaaa acgtttcagt ttgctcatgg aaaacggtgt aacaagggtg
4201 aacactatcc catatcacca gctcaccgtc tttcattgcc atacg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pACYC184大肠克隆质粒
别称: pACYC-184
复制子: p15A
质粒分类: 大肠系列质粒；大肠克隆质粒；基因克隆质粒
质粒大小：4245bp
原核抗性: Chl,Tet
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
| 5'测序引物: | Tcr-F（GAAGTCATGCGCCGGTTAAG） |
|---|---|
| 3'测序引物: | pBRrevBam-R (GGTGATGTCGGCGATATAGG) |
| 备注: | 丰富的酶切位点 |
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：空载体
基因类型：cDNA
原核抗性：Chl,Tet
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pACYC184质粒是一种原核表达载体，含有p15A复制起点的大肠杆菌质粒克隆载体。这允许pACYC184在与ColE1相容性组的质粒（例如pBR322，pUC19）的细胞中共存。它是一个低拷贝数载体，每个细胞约15个拷贝，但可以用壮观霉素放大。由于cat基因的存在，氯霉素不能用于提高质粒产量（阻碍菌体复制，不阻碍质粒扩增）。
pACYC184 is an E. coli plasmid cloning vector containing the p15A origin of replication (1-4). This allows pACYC184 to coexist in cells with plasmids of the ColE1 compatibility group (e.g., pBR322, pUC19). It is a low copy number vector, at about 15 copies per cell (5), but can be amplifed with spectinomycin. Chloramphenicol cannot be used for amplifcation due to the presence of the cat gene.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4245 bp ds-DNA circular SYN 26-8-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 2
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4245)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-8-26 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4245
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter complement(220..322)
/note="cat promoter"
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
rep_origin complement(848..1393)
/direction=LEFT
/note="p15A ori"
/note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A
origin of replication can be propagated in E. coli cells
that contain a second plasmid with the ColE1 origin."
promoter 1505..1533
/note="tet promoter"
/note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
gene"
CDS 1581..2771
/codon_start=1
/gene="tet"
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/note="TcR"
/note="confers resistance to tetracycline"
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CDS complement(3805..219)
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ORIGIN
1 gaattccgga tgagcattca tcaggcgggc aagaatgtga ataaaggccg gataaaactt
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241 aaatctcgat aactcaaaaa atacgcccgg tagtgatctt atttcattat ggtgaaagtt
301 ggaacctctt acgtgccgat caacgtctca ttttcgccaa aagttggccc agggcttccc
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421 ttattcggcg caaagtgcgt cgggtgatgc tgccaactta ctgatttagt gtatgatggt
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1021 gtttgtctca ttccacgcct gacactcagt tccgggtagg cagttcgctc caagctggac
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2221 cacttatgac tgtcttcttt atcatgcaac tcgtaggaca ggtgccggca gcgctctggg
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2581 gacagcttca aggatcgctc gcggctctta ccagcctaac ttcgatcact ggaccgctga
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2701 gcgccgccct ataccttgtc tgcctccccg cgttgcgtcg cggtgcatgg agccgggcca
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2941 gccacgggtg cgcatgatcg tgctcctgtc gttgaggacc cggctaggct ggcggggttg
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3121 tctggaaacg cggaagtccc ctacgtgctg ctgaagttgc ccgcaacaga gagtggaacc
3181 aaccggtgat accacgatac tatgactgag agtcaacgcc atgagcggcc tcatttctta
3241 ttctgagtta caacagtccg caccgctgtc cggtagctcc ttccggtggg cgcggggcat
3301 gactatcgtc gccgcactta tgactgtctt ctttatcatg caactcgtag gacaggtgcc
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3421 gccctgcacc attatgttcc ggatctgcat cgcaggatgc tgctggctac cctgtggaac
3481 acctacatct gtattaacga agcgctaacc gtttttatca ggctctggga ggcagaataa
3541 atgatcatat cgtcaattat tacctccacg gggagagcct gagcaaactg gcctcaggca
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3721 aatttctgcc attcatccgc ttattatcac ttattcaggc gtagcaccag gcgtttaagg
3781 gcaccaataa ctgccttaaa aaaattacgc cccgccctgc cactcatcgc agtactgttg
3841 taattcatta agcattctgc cgacatggaa gccatcacag acggcatgat gaacctgaat
3901 cgccagcggc atcagcacct tgtcgccttg cgtataatat ttgcccatgg tgaaaacggg
3961 ggcgaagaag ttgtccatat tggccacgtt taaatcaaaa ctggtgaaac tcacccaggg
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4226/pCMV-SPORT6-DOCK10人源基因质粒 |
| P4227/pCMV-SPORT6-SLC25A46人源基因质粒 |
| P4228/pCMV-SPORT6-HNRPA0人源基因质粒 |
| P4229/pCMV-SPORT6-TBC1D23（1055-2055bp1同义突变）人源基因质粒 |
| P4230/pCMV-SPORT6-SIAH2人源基因质粒 |
| P4231/pCMV-SPORT6-TCTN2人源基因质粒 |
| P4232/pCMV-SPORT6-IRF2人源基因质粒 |
| P4233/pCMV-SPORT6-ACAD11（724-2343bp）人源基因质粒 |
| P4234/pCMV-SPORT6-TIMP4人源基因质粒 |
| P4235/pCMV-SPORT6-PPP1CC人源基因质粒 |
| P4236/pCMV-SPORT6-FAM122A人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
系列）：高拷贝会导致大片段质粒复制压力大，易丢失或断裂，优先用低拷贝载体（如 pACYC184，拷贝数 10-15）或大片段专用载体（如 BAC 载体 pBeloBAC11，可容纳 100kb 以上片段，在大肠杆菌中稳定存在）； ④选择合适的连接方法，比如 Gibson 组装（无缝克隆）的方法更适合 10-20kb 大片段的连接，相比传统的 T4 连接的方法，成功率更高，操作更简便； ⑤选择重组缺陷型感受态，提高大质粒的转化效率，如 Stbl3、DH10B 等，此外转化方式也会影响转化
冲液后，PCR扩增TFPI基因。 (二)TFPI基因的体外重组与测序 以EcoRI和BamHI双酶切扩增出的TFPI基因和pGEM-3Zf(-)质粒，在T4DNA连接酶的作用下，将TFPI基因与pGEM-3Zf(-)质粒重组获得pGEM-3Zf(-)-TFPI克隆质粒，转化大肠杆菌DH5α，涂LBA平板，挑阳性克隆。 为了保证所获基因的准确性，必须对其进行DNA序列测定。现有许多生物技术公司能够提供测序服务，其快捷、方便，且价格合理，为大多数实验室所采用。 (三)表达
pACYC184大肠克隆质粒
￥100 - 1000
