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- 上海
- P1355
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
PEPC;PGII
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pET14b-PGC人源基因质粒
别称: PEPC;PGII
启动子: T7
复制子: pBR322
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：ORF
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pET14b-PGC是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5835 bp ds-DNA circular SYN 10-七月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5835
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 104..208
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 209..1069
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 1240..1828
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature 2014..2156
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
CDS complement(2258..2449)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
promoter 4010..4028
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 4101..4118
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS 4128..4145
/codon_start=1
/product="thrombin recognition and cleavage site"
/note="thrombin site"
/translation="LVPRGS"
CDS 4149..5315
/codon_start=1
/product="Homo sapiens progastricsin (PGC), transcript
variant 1, mRNA
NCBI Reference Sequence: NM_002630.3"
/note="PGC"
/note="Homo sapiens progastricsin (PGC), transcript variant
1, mRNA
NCBI Reference Sequence: NM_002630.3"
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LTVPQQYMSALLQATGAQEDEYGQFLVNCNSIQNLPSLTFIINGVEFPLPPSSYILSNN
GYCTVGVEPTYLSSQNGQPLWILGDVFLRSYYSVYDLGNNRVGFATAA"
terminator 5385..5432
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
promoter complement(5798..5826)
/note="tet promoter"
/note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
gene"
ORIGIN
1 ttcttgaaga cgaaagggcc tcgtgatacg cctattttta taggttaatg tcatgataat
61 aatggtttct tagacgtcag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg
121 tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat
181 gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat
241 tccctttttt gcggcatttt gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt
301 aaaagatgct gaagatcagt tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag
361 cggtaagatc cttgagagtt ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa
421 agttctgcta tgtggcgcgg tattatcccg tgttgacgcc gggcaagagc aactcggtcg
481 ccgcatacac tattctcaga atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct
541 tacggatggc atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac
601 tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca
661 caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat
721 accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc tgcagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact
781 attaactggc gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc
841 ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga
901 taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg
961 taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg
1021 aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca
1081 agtttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta
1141 ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca
1201 ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg
1261 cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga
1321 tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa
1381 tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc
1441 tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg
1501 tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac
1561 ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct
1621 acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc
1681 ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg
1741 gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg
1801 ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct
1861 ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga
1921 taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg
1981 cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga gcgcctgatg cggtattttc tccttacgca
2041 tctgtgcggt atttcacacc gcatatatgg tgcactctca gtacaatctg ctctgatgcc
2101 gcatagttaa gccagtatac actccgctat cgctacgtga ctgggtcatg gctgcgcccc
2161 gacacccgcc aacacccgct gacgcgccct gacgggcttg tctgctcccg gcatccgctt
2221 acagacaagc tgtgaccgtc tccgggagct gcatgtgtca gaggttttca ccgtcatcac
2281 cgaaacgcgc gaggcagctg cggtaaagct catcagcgtg gtcgtgaagc gattcacaga
2341 tgtctgcctg ttcatccgcg tccagctcgt tgagtttctc cagaagcgtt aatgtctggc
2401 ttctgataaa gcgggccatg ttaagggcgg ttttttcctg tttggtcact gatgcctccg
2461 tgtaaggggg atttctgttc atgggggtaa tgataccgat gaaacgagag aggatgctca
2521 cgatacgggt tactgatgat gaacatgccc ggttactgga acgttgtgag ggtaaacaac
2581 tggcggtatg gatgcggcgg gaccagagaa aaatcactca gggtcaatgc cagcgcttcg
2641 ttaatacaga tgtaggtgtt ccacagggta gccagcagca tcctgcgatg cagatccgga
2701 acataatggt gcagggcgct gacttccgcg tttccagact ttacgaaaca cggaaaccga
2761 agaccattca tgttgttgct caggtcgcag acgttttgca gcagcagtcg cttcacgttc
2821 gctcgcgtat cggtgattca ttctgctaac cagtaaggca accccgccag cctagccggg
2881 tcctcaacga caggagcacg atcatgcgca cccgtggcca ggacccaacg ctgcccgaga
2941 tgcgccgcgt gcggctgctg gagatggcgg acgcgatgga tatgttctgc caagggttgg
3001 tttgcgcatt cacagttctc cgcaagaatt gattggctcc aattcttgga gtggtgaatc
3061 cgttagcgag gtgccgccgg cttccattca ggtcgaggtg gcccggctcc atgcaccgcg
3121 acgcaacgcg gggaggcaga caaggtatag ggcggcgcct acaatccatg ccaacccgtt
3181 ccatgtgctc gccgaggcgg cataaatcgc cgtgacgatc agcggtccag tgatcgaagt
3241 taggctggta agagccgcga gcgatccttg aagctgtccc tgatggtcgt catctacctg
3301 cctggacagc atggcctgca acgcgggcat cccgatgccg ccggaagcga gaagaatcat
3361 aatggggaag gccatccagc ctcgcgtcgc gaacgccagc aagacgtagc ccagcgcgtc
3421 ggccgccatg ccggcgataa tggcctgctt ctcgccgaaa cgtttggtgg cgggaccagt
3481 gacgaaggct tgagcgaggg cgtgcaagat tccgaatacc gcaagcgaca ggccgatcat
3541 cgtcgcgctc cagcgaaagc ggtcctcgcc gaaaatgacc cagagcgctg ccggcacctg
3601 tcctacgagt tgcatgataa agaagacagt cataagtgcg gcgacgatag tcatgccccg
3661 cgcccaccgg aaggagctga ctgggttgaa ggctctcaag ggcatcggtc gacgctctcc
3721 cttatgcgac tcctgcatta ggaagcagcc cagtagtagg ttgaggccgt tgagcaccgc
3781 cgccgcaagg aatggtgcat gcaaggagat ggcgcccaac agtcccccgg ccacggggcc
3841 tgccaccata cccacgccga aacaagcgct catgagcccg aagtggcgag cccgatcttc
3901 cccatcggtg atgtcggcga tataggcgcc agcaaccgca cctgtggcgc cggtgatgcc
3961 ggccacgatg cgtccggcgt agaggatcga gatctcgatc ccgcgaaatt aatacgactc
4021 actataggga gaccacaacg gtttccctct agaaataatt ttgtttaact ttaagaagga
4081 gatataccat gggcagcagc catcatcatc atcatcacag cagcggcctg gtgccgcgcg
4141 gcagccatat gaagtggatg gtggtggtct tggtctgcct ccagctcttg gaggcagcag
4201 tggtcaaagt gcccctgaag aaatttaagt ctatccgtga gaccatgaag gagaagggct
4261 tgctggggga gttcctgagg acccacaagt atgatcctgc ttggaagtac cgctttggtg
4321 acctcagcgt gacctacgag cccatggcct acatggatgc tgcctacttt ggtgagatca
4381 gcatcgggac tccaccccag aacttcctgg tcctttttga caccggctcc tccaacttgt
4441 gggtgccctc tgtctactgc cagagccagg cctgcaccag tcactcccgc ttcaacccca
4501 gcgagtcgtc cacctactcc accaatgggc agaccttctc cctgcagtat ggcagtggca
4561 gcctcaccgg cttctttggc tatgacaccc tgactgtcca gagcatccag gtccccaacc
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4681 gcatcatggg cctggcctac cctgctctgt ccgtggatga ggccaccaca gctatgcagg
4741 gcatggtgca ggagggcgcc ctcaccagcc ccgtcttcag cgtctacctc agcaaccagc
4801 agggctccag cgggggagcg gttgtctttg ggggtgtgga tagcagcctg tacacggggc
4861 agatctactg ggcgcctgtc acccaggaac tctactggca gattggcatt gaagagttcc
4921 tcatcggcgg ccaggcctcc ggctggtgtt ctgagggttg ccaggccatc gtggacacag
4981 gcacctctct gctcactgtg ccccagcagt acatgagtgc tcttctgcag gccacagggg
5041 cccaggagga tgagtatgga cagtttctcg tgaactgtaa cagcattcag aatctgccca
5101 gcttgacctt catcatcaat ggtgtggagt tccctctgcc accttcctcc tatatcctca
5161 gtaacaacgg ctactgcacc gtgggagtcg agcccaccta cctgtcctcc cagaacggcc
5221 agcccctgtg gatcctcggg gatgtcttcc tcaggtccta ctattccgtc tacgacttgg
5281 gcaacaacag agtaggcttt gccactgccg cctagctcga ggatccggct gctaacaaag
5341 cccgaaagga agctgagttg gctgctgcca ccgctgagca ataactagca taaccccttg
5401 gggcctctaa acgggtcttg aggggttttt tgctgaaagg aggaactata tccggatatc
5461 cacaggacgg gtgtggtcgc catgatcgcg tagtcgatag tggctccaag tagcgaagcg
5521 agcaggactg ggcggcggcc aaagcggtcg gacagtgctc cgagaacggg tgcgcataga
5581 aattgcatca acgcatatag cgctagcagc acgccatagt gactggcgat gctgtcggaa
5641 tggacgatat cccgcaagag gcccggcagt accggcataa ccaagcctat gcctacagca
5701 tccagggtga cggtgccgag gatgacgatg agcgcattgt tagatttcat acacggtgcc
5761 tgactgcgtt agcaatttaa ctgtgataaa ctaccgcatt aaagcttatc gatgataagc
5821 tgtcaaacat gagaa
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pET14b-PGC人源基因质粒
别称: PEPC;PGII
启动子: T7
复制子: pBR322
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：ORF
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pET14b-PGC是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5835 bp ds-DNA circular SYN 10-七月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5835
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CDS 4128..4145
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1, mRNA
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ENEPGTNFVYAQFDGIMGLAYPALSVDEATTAMQGMVQEGALTSPVFSVYLSNQQGSSG
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GYCTVGVEPTYLSSQNGQPLWILGDVFLRSYYSVYDLGNNRVGFATAA"
terminator 5385..5432
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promoter complement(5798..5826)
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gene"
ORIGIN
1 ttcttgaaga cgaaagggcc tcgtgatacg cctattttta taggttaatg tcatgataat
61 aatggtttct tagacgtcag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg
121 tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat
181 gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat
241 tccctttttt gcggcatttt gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt
301 aaaagatgct gaagatcagt tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag
361 cggtaagatc cttgagagtt ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa
421 agttctgcta tgtggcgcgg tattatcccg tgttgacgcc gggcaagagc aactcggtcg
481 ccgcatacac tattctcaga atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct
541 tacggatggc atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac
601 tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca
661 caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat
721 accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc tgcagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact
781 attaactggc gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc
841 ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga
901 taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg
961 taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg
1021 aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca
1081 agtttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta
1141 ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca
1201 ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg
1261 cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga
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1441 tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg
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1681 ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg
1741 gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg
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1861 ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga
1921 taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg
1981 cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga gcgcctgatg cggtattttc tccttacgca
2041 tctgtgcggt atttcacacc gcatatatgg tgcactctca gtacaatctg ctctgatgcc
2101 gcatagttaa gccagtatac actccgctat cgctacgtga ctgggtcatg gctgcgcccc
2161 gacacccgcc aacacccgct gacgcgccct gacgggcttg tctgctcccg gcatccgctt
2221 acagacaagc tgtgaccgtc tccgggagct gcatgtgtca gaggttttca ccgtcatcac
2281 cgaaacgcgc gaggcagctg cggtaaagct catcagcgtg gtcgtgaagc gattcacaga
2341 tgtctgcctg ttcatccgcg tccagctcgt tgagtttctc cagaagcgtt aatgtctggc
2401 ttctgataaa gcgggccatg ttaagggcgg ttttttcctg tttggtcact gatgcctccg
2461 tgtaaggggg atttctgttc atgggggtaa tgataccgat gaaacgagag aggatgctca
2521 cgatacgggt tactgatgat gaacatgccc ggttactgga acgttgtgag ggtaaacaac
2581 tggcggtatg gatgcggcgg gaccagagaa aaatcactca gggtcaatgc cagcgcttcg
2641 ttaatacaga tgtaggtgtt ccacagggta gccagcagca tcctgcgatg cagatccgga
2701 acataatggt gcagggcgct gacttccgcg tttccagact ttacgaaaca cggaaaccga
2761 agaccattca tgttgttgct caggtcgcag acgttttgca gcagcagtcg cttcacgttc
2821 gctcgcgtat cggtgattca ttctgctaac cagtaaggca accccgccag cctagccggg
2881 tcctcaacga caggagcacg atcatgcgca cccgtggcca ggacccaacg ctgcccgaga
2941 tgcgccgcgt gcggctgctg gagatggcgg acgcgatgga tatgttctgc caagggttgg
3001 tttgcgcatt cacagttctc cgcaagaatt gattggctcc aattcttgga gtggtgaatc
3061 cgttagcgag gtgccgccgg cttccattca ggtcgaggtg gcccggctcc atgcaccgcg
3121 acgcaacgcg gggaggcaga caaggtatag ggcggcgcct acaatccatg ccaacccgtt
3181 ccatgtgctc gccgaggcgg cataaatcgc cgtgacgatc agcggtccag tgatcgaagt
3241 taggctggta agagccgcga gcgatccttg aagctgtccc tgatggtcgt catctacctg
3301 cctggacagc atggcctgca acgcgggcat cccgatgccg ccggaagcga gaagaatcat
3361 aatggggaag gccatccagc ctcgcgtcgc gaacgccagc aagacgtagc ccagcgcgtc
3421 ggccgccatg ccggcgataa tggcctgctt ctcgccgaaa cgtttggtgg cgggaccagt
3481 gacgaaggct tgagcgaggg cgtgcaagat tccgaatacc gcaagcgaca ggccgatcat
3541 cgtcgcgctc cagcgaaagc ggtcctcgcc gaaaatgacc cagagcgctg ccggcacctg
3601 tcctacgagt tgcatgataa agaagacagt cataagtgcg gcgacgatag tcatgccccg
3661 cgcccaccgg aaggagctga ctgggttgaa ggctctcaag ggcatcggtc gacgctctcc
3721 cttatgcgac tcctgcatta ggaagcagcc cagtagtagg ttgaggccgt tgagcaccgc
3781 cgccgcaagg aatggtgcat gcaaggagat ggcgcccaac agtcccccgg ccacggggcc
3841 tgccaccata cccacgccga aacaagcgct catgagcccg aagtggcgag cccgatcttc
3901 cccatcggtg atgtcggcga tataggcgcc agcaaccgca cctgtggcgc cggtgatgcc
3961 ggccacgatg cgtccggcgt agaggatcga gatctcgatc ccgcgaaatt aatacgactc
4021 actataggga gaccacaacg gtttccctct agaaataatt ttgtttaact ttaagaagga
4081 gatataccat gggcagcagc catcatcatc atcatcacag cagcggcctg gtgccgcgcg
4141 gcagccatat gaagtggatg gtggtggtct tggtctgcct ccagctcttg gaggcagcag
4201 tggtcaaagt gcccctgaag aaatttaagt ctatccgtga gaccatgaag gagaagggct
4261 tgctggggga gttcctgagg acccacaagt atgatcctgc ttggaagtac cgctttggtg
4321 acctcagcgt gacctacgag cccatggcct acatggatgc tgcctacttt ggtgagatca
4381 gcatcgggac tccaccccag aacttcctgg tcctttttga caccggctcc tccaacttgt
4441 gggtgccctc tgtctactgc cagagccagg cctgcaccag tcactcccgc ttcaacccca
4501 gcgagtcgtc cacctactcc accaatgggc agaccttctc cctgcagtat ggcagtggca
4561 gcctcaccgg cttctttggc tatgacaccc tgactgtcca gagcatccag gtccccaacc
4621 aggagttcgg cttgagtgag aatgagcctg gtaccaactt cgtctatgcg cagtttgatg
4681 gcatcatggg cctggcctac cctgctctgt ccgtggatga ggccaccaca gctatgcagg
4741 gcatggtgca ggagggcgcc ctcaccagcc ccgtcttcag cgtctacctc agcaaccagc
4801 agggctccag cgggggagcg gttgtctttg ggggtgtgga tagcagcctg tacacggggc
4861 agatctactg ggcgcctgtc acccaggaac tctactggca gattggcatt gaagagttcc
4921 tcatcggcgg ccaggcctcc ggctggtgtt ctgagggttg ccaggccatc gtggacacag
4981 gcacctctct gctcactgtg ccccagcagt acatgagtgc tcttctgcag gccacagggg
5041 cccaggagga tgagtatgga cagtttctcg tgaactgtaa cagcattcag aatctgccca
5101 gcttgacctt catcatcaat ggtgtggagt tccctctgcc accttcctcc tatatcctca
5161 gtaacaacgg ctactgcacc gtgggagtcg agcccaccta cctgtcctcc cagaacggcc
5221 agcccctgtg gatcctcggg gatgtcttcc tcaggtccta ctattccgtc tacgacttgg
5281 gcaacaacag agtaggcttt gccactgccg cctagctcga ggatccggct gctaacaaag
5341 cccgaaagga agctgagttg gctgctgcca ccgctgagca ataactagca taaccccttg
5401 gggcctctaa acgggtcttg aggggttttt tgctgaaagg aggaactata tccggatatc
5461 cacaggacgg gtgtggtcgc catgatcgcg tagtcgatag tggctccaag tagcgaagcg
5521 agcaggactg ggcggcggcc aaagcggtcg gacagtgctc cgagaacggg tgcgcataga
5581 aattgcatca acgcatatag cgctagcagc acgccatagt gactggcgat gctgtcggaa
5641 tggacgatat cccgcaagag gcccggcagt accggcataa ccaagcctat gcctacagca
5701 tccagggtga cggtgccgag gatgacgatg agcgcattgt tagatttcat acacggtgcc
5761 tgactgcgtt agcaatttaa ctgtgataaa ctaccgcatt aaagcttatc gatgataagc
5821 tgtcaaacat gagaa
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2419/pcDNA6-HA-AML1-ETO人源基因质粒 |
| P2420/p2xFLAG CMV2 Lats1-PY1+2 mutant人源基因质粒 |
| P2421/pLVML-3×FLAG-TPST1-IRES-Puro人源基因质粒 |
| P2422/pLVML-3×FLAG-TPST2-IRES-Puro人源基因质粒 |
| P2423/pLVX-TK-Puro人源基因质粒 |
| P2495/pLVX-TRE3G-ZsGreen1-RIPK1人源基因质粒 |
| P2496/pCMV FLAG WT-PTEN人源基因质粒 |
| P2552/pECMV-3×FLAG-ZNF706人源基因质粒 |
| P2553/pECMV-3×FLAG-NBR2人源基因质粒 |
| P2635/pIRESpuro3-ITGB3人源基因质粒 |
| P2636/pLVX-IL12A-IL12B-IRES-ZsGreen1人源基因质粒 |
| P2672/pcDNA3 236HSC WT (BRCA2)人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
载体主要有病毒和非病毒两大类，其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori，即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ 多l克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段 P/E：启动子/增强子
条件:①容易进入寄主细胞；②进入寄主细胞后能够独立进行自主的复制和表达；③容易从宿主细胞中分离纯化。 在基因工程中常用的载体有： 1.质粒——环状双链小型 DNA 分子，种类丰富,常见的有pUC系列、pET系列等。 2.噬菌体——如λ噬菌体，用于细菌细胞。 3.病毒——如猿猴空泡病毒SV40，常用作动物细胞基因工程的载体。 含有目的基因的DNA片段和载体DNA连接技术即DNA重组技术，其核心步骤是DNA片段之间的体外连接，涉及限制酶、连接酶等的酶促反应。把目的
【专题讨论】原核表达秘笈之宿主菌株的选择！（接原原核表达研究者关心的10个问题贴）
表达真核基因的时候，真核基因中的一些密码子对于原核细胞来说可能是稀有密码子，从而导致表达效率和表达水平很低。改造基因是比较麻烦的做法，Rosetta 2系列就是更好的选择——这种携带pRARE2质粒的BL21衍生菌，补充大肠杆菌缺乏的七种（AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA 及CGG）稀有密码子对应的 tRNA，提高外源基因、尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。（已经携带有氯霉素抗性质粒）。 当要表达的蛋白质需要形成二硫键以形成正确的折叠时，可以选择K–12衍生菌
pET14b-PGC人源基因质粒
￥100 - 1000
