- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P0316
- 2025年07月12日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pBV220-EK
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pBV220-EK肠激酶基因质粒
别称: pBV220-EK
启动子：pR,pL
复制子: pUC
终止子: rrnB T1，rrnB T2
质粒分类: 蛋白酶表达质粒
质粒标签：EK
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 30度
| 表达宿主: | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | 42℃诱导 |
| 5'测序引物: | pBV220-F: AAGAAGGGCAGCATTCAAAG |
| 3'测序引物: | pBV220-R: CTGCGTTCTGATTTAATCTG |
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
质粒简介
本质粒在大肠杆菌中表达为包涵体，需复性。
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
|
|||||||||||
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验用于克隆筛选).因为引物上带了EcoRV位点,又可以进一步做成T载体,再把基因克进去,如此反复... 关键是T载体要制备的好，筛选的时候多挑几个克隆,如果需要定向克隆基因的话可利用载体上的引物筛选之,然后利用基因内部合适的酶切位点来验证... 欢迎交流! qianjing930 我做过三段重复片段的串联,用的是pBV220载体. 第一对引物为EcoRI_KpnI_____BamHI;第一段单体插入pBV220载体中的EcoRI
表达效率往往更高。 将IL基因以5’端 Eco RI和3’端 Bam HI酶切位点插入pBV220载体多克隆位点中，转化到大肠杆菌JMl03内，便能通过温度的变换控制CI蛋白的活性，继而调节启动子的活性，使IL基因连同其5’端上游带SD序列转录成mRNA并转录终止于rrnB位点，SD序列与ATG的间距为6bp，mRNA作为模板使核糖体高效翻译出IL产物。 实验材料和试剂 （一）实验材料
酶切割位点(凝血酶、因子 Xa 和肠激酶)的载体，可以在纯化后选择性去除一个或多个标签。 pET-30 Ek/LIC 、 pET-32 Ek/LIC 、 pET-34 Ek/LIC 和 pET-36 Ek/LIC 是细胞定位和亲和标签配置良好的代表。 pET Ek/LIC 载体 Combo 试剂盒包括所有 4 种即用型载体，可直接用于构建数种目标基因构型。 pET NusA 融合系统 43.1 在大肠杆菌中生产可溶性活性蛋白 新推出的 pET NusA 融合系统设计用于克隆
