pCMV-HA-Ub-m小鼠基因质粒

基本信息
名称：pCMV-HA-Ub-m小鼠基因质粒
别称: 1×UB
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：小鼠
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pCMV-HA-Ub-m质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4000 bp ds-DNA     circular SYN 21-JAN-2018
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4000
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        27..330
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        331..534
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     intron          672..768
                     /label=SV40 intron
                     /note="modified SV40 intron with splice donor and acceptor 
                     sites"
     CDS             832..858
                     /codon_start=1
                     /product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
                     /label=HA
                     /translation="YPYDVPDYA"
     CDS             886..1113
                     /codon_start=1
                     /product="mouse ubiquitin"
                     /label=UB-m
                     /translation="MQIFVKTLTGKTITLEVEPSDTIENVKAKIQDKEGIPPDQQRLIF
                     AGKQLEDGRTL-SDYNIQKESTLHLVLRLRGG"
     polyA_signal    1139..1273
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(1786..2374)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(2545..3405)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(3406..3510)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gagttcgagc ttgcatgcct gcaggtcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc
       61 tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg
      121 ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg
      181 gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa
      241 tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac
      301 atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg
      361 cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg
      421 agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca
      481 ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctcgttta
      541 gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca tagaagacac
      601 cgggaccgat ccagcctccg gactctagag gatccggtac tagaggaact gaaaaaccag
      661 aaagttaact ggtaagttta gtctttttgt cttttatttc aggtcccgga tccggtggtg
      721 gtgcaaatca aagaactgct cctcagtgga tgttgccttt acttctaggc ctgtacggaa
      781 gtgttacttc tgctctaaaa gctgcggaat tgtacccgcg ggcccaccat gtacccatac
      841 gatgttccag attacgctct tatggccatg gaggcccgaa ttcgcatgca gatctttgtg
      901 aaaaccttaa ctggtaagac catcaccctg gaggtcgagc ccagtgacac cattgagaat
      961 gtcaaggcaa agatccagga caaggagggc atcccccctg accagcagag gctgatcttt
     1021 gcaggcaagc agctggaaga tggccgcacc ctgtcagact acaacatcca gaaagagtcc
     1081 accctgcacc tggtccttcg cctcagaggt ggctagagtg cggtaccgcg gccgcgggga
     1141 tccagacatg ataagataca ttgatgagtt tggacaaacc acaactagaa tgcagtgaaa
     1201 aaaatgcttt atttgtgaaa tttgtgatgc tattgcttta tttgtaacca ttataagctg
     1261 caataaacaa gttaacaaca acaattgcat tcattttatg tttcaggttc agggggaggt
     1321 gtgggaggtt ttttcggatc ctctagagtc gatctgcagg catgctagct tggcgtaatc
     1381 atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg ttatccgctc acaattccac acaacatacg
     1441 agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat
     1501 tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg
     1561 aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct
     1621 cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc
     1681 ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg
     1741 ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg
     1801 cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg
     1861 actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac
     1921 cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca
     1981 tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt
     2041 gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc
     2101 caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag
     2161 agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac
     2221 tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt
     2281 tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa
     2341 gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg
     2401 gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa
     2461 aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat
     2521 atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc
     2581 gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat
     2641 acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc
     2701 ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc
     2761 tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag
     2821 ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg
     2881 ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg
     2941 atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag
     3001 taagttggcc gcagtgttat cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt
     3061 catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga
     3121 atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc
     3181 acatagcaga actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc
     3241 aaggatctta ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc
     3301 ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc
     3361 cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca
     3421 atattattga agcatttatc agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat
     3481 ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt
     3541 ctaagaaacc attattatca tgacattaac ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt
     3601 tcgtctcgcg cgtttcggtg atgacggtga aaacctctga cacatgcagc tcccggagac
     3661 ggtcacagct tgtctgtaag cggatgccgg gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc
     3721 gggtgttggc gggtgtcggg gctggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag
     3781 agtgcaccat atgcggtgtg aaataccgca cagatgcgta aggagaaaat accgcatcag
     3841 gcgccattcg ccattcaggc tgcgcaactg ttgggaaggg cgatcggtgc gggcctcttc
     3901 gctattacgc cagctggcga aagggggatg tgctgcaagg cgattaagtt gggtaacgcc
     3961 agggttttcc cagtcacgac gttgtaaaac gacggccagt
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P0502/pCXLE-hOCT3/4-shp53-F人源基因质粒

P0503/pCXWB-EBNA1人源基因质粒

P0504/pCXLE-EGFP人源基因质粒

P0496/pEGFP-Rnd1人源基因质粒

P0497/pEGFP-Rnd2人源基因质粒

P1768/pEGFP-KIF3b人源基因质粒

P0544/pCDNA3-HA-p53人源基因质粒

P2919/pCDNA3.1-P53-N-GST人源基因质粒

P2938/pCDNA3.1-P53-DB-GST人源基因质粒

P0545/pCDNA3-mTOR人源基因质粒

P0546/pCMV-FLAG-TRAF3人源基因质粒

P0547/pCDEF-FLAG-β-catenin人源基因质粒