pECMV-3×FLAG-OPN4-m小鼠基因质粒

基本信息
名称：pECMV-3×FLAG-OPN4-m小鼠基因质粒
别称: NM_013887.2
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：小鼠
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
 pECMV-3×FLAG-OPN4-m质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                7039 bp ds-DNA     circular SYN 28-SEP-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pECMV-3×FLAG-OPN4-m
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 7039)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Sep 28, 2017 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7039
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        235..614
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        615..818
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        863..881
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     regulatory      913..922
                     /regulatory_class="other"
                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                     of translation (Kozak, 1987)"
     CDS             922..987
                     /codon_start=1
                     /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
                     enterokinase cleavage site"
                     /label=3xFLAG
                     /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
     CDS             997..2562
                     /codon_start=1
                     /label=OPN4
                     /translation="MDSPSGPRVLSSLTQDPSFTTSPALQGIWNGTQNVSVRAQLLSVS
                     PTTSAHQAAAWVPFPTVDVPDHAHYTLGTVILLVGLTGMLGNLTVIYTFCRNRGLRTPA
                     NMFIINLAVSDFLMSVTQAPVFFASSLYKKWLFGETGCEFYAFCGAVFGITSMITLTAI
                     AMDRYLVITRPLATIGRGSKRRTALVLLGVWLYALAWSLPPFFGWSAYVPEGLLTSCSW
                     DYMTFTPQVRAYTMLLFCFVFFLPLLIIIFCYIFIFRAIRETGRACEGCGESPLRQRRQ
                     WQRLQSEWKMAKVALIVILLFVLSWAPYSTVALVAFAGYSHILTPYMSSVPAVIAKASA
                     IHNPIIYAITHPKYRVAIAQHLPCLGVLLGVSGQRSHPSLSYRSTHRSTLSSQSSDLSW
                     ISGRKRQESLGSESEVGWTDTETTAAWGAAQQASGQSFCSQNLEDGELKASSSPQVQRS
                     KTPKVPGPSTCRPMKGQGARPSSLRGDQKGRLAVCTGLSECP-HPHTSQFPLAFLEDDVT
                     LRHL"
     polyA_signal    2639..2863
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      2909..3337
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        3351..3680
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      3531..3666
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             3747..4541
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=Neo
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    4715..4836
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(5287..5872)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(6043..6903)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(6904..7008)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
       61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
      121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
      181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
      241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
      301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
      361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
      421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
      481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
      541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
      601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
      661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
      721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
      781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
      841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
      901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
      961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccatgg actctccttc aggaccaaga
     1021 gtcttgtcaa gcttaactca ggatcccagc ttcacaacca gtcctgccct gcaaggcatt
     1081 tggaacggca ctcagaacgt ctccgtaaga gcccagcttc tctctgttag ccccacgaca
     1141 tctgcacatc aggctgctgc ctgggtcccc ttccccacag tcgatgtccc agaccatgct
     1201 cactataccc taggcacggt gatcctgctg gtgggactca cagggatgct gggcaatctg
     1261 acggtcatct acaccttctg caggaacaga ggcctgcgga caccagcaaa catgttcatc
     1321 atcaacctcg cagtcagcga cttcctcatg tcagtcactc aggccccggt cttctttgcc
     1381 agcagcctct acaagaagtg gctctttggg gagacaggtt gcgagttcta tgccttctgc
     1441 ggggctgtct ttggcatcac ttccatgatc accctgacag ccatagccat ggaccgctat
     1501 ctggtgatca cacgtccact ggccaccatc ggcaggggat ccaaaagacg aacggcactc
     1561 gtcctgctag gcgtctggct ttatgccctg gcctggagtc tgccaccttt ctttggttgg
     1621 agtgcctacg tgcccgaggg gctgctgaca tcctgctcct gggactacat gaccttcaca
     1681 ccccaggtgc gtgcctacac catgctgctc ttctgctttg tcttcttcct ccccctgctc
     1741 atcatcatct tctgctacat cttcatcttc agggccatcc gagagacagg ccgggcctgt
     1801 gagggctgcg gtgagtcccc tctgcggcag aggcggcagt ggcagcggct gcagagtgag
     1861 tggaagatgg ccaaggtcgc actgattgtc attcttctct tcgtgctgtc ctgggctccc
     1921 tactccactg tggctctggt ggcctttgct ggatactcgc acatcctgac gccctacatg
     1981 agctcggtgc cagccgtcat cgccaaggct tctgccatcc acaatcccat tatctacgcc
     2041 atcactcacc ccaagtacag ggtggccatt gcccagcacc tgccttgcct tggggtgctt
     2101 ctcggtgtat caggccagcg cagccacccc tccctcagct accgctctac ccaccgctcc
     2161 acattgagca gccagtcctc agacctcagc tggatctctg gacggaagcg tcaagagtcc
     2221 ctgggttctg agagtgaagt gggctggaca gacacagaaa caaccgctgc atggggagct
     2281 gcccagcaag caagtggaca gtccttctgc agtcagaacc tagaagatgg agaactcaag
     2341 gcctcttcca gcccccaggt acagagatct aagactccca aggtgcctgg acccagtacc
     2401 tgccgcccta tgaaaggaca gggagccagg ccaagtagcc taaggggtga ccagaaaggc
     2461 aggcttgctg tgtgcacagg cctctcagag tgtccccatc cccatacatc ccagtttccc
     2521 cttgctttcc tagaggatga tgtgactctc agacatctgt aggaattctg cagatatcca
     2581 gcacagtggc ggccgctcga gtctagaggg cccgtttaaa cccgctgatc agcctcgact
     2641 gtgccttcta gttgccagcc atctgttgtt tgcccctccc ccgtgccttc cttgaccctg
     2701 gaaggtgcca ctcccactgt cctttcctaa taaaatgagg aaattgcatc gcattgtctg
     2761 agtaggtgtc attctattct ggggggtggg gtggggcagg acagcaaggg ggaggattgg
     2821 gaagacaata gcaggcatgc tggggatgcg gtgggctcta tggcttctga ggcggaaaga
     2881 accagctggg gctctagggg gtatccccac gcgccctgta gcggcgcatt aagcgcggcg
     2941 ggtgtggtgg ttacgcgcag cgtgaccgct acacttgcca gcgccctagc gcccgctcct
     3001 ttcgctttct tcccttcctt tctcgccacg ttcgccggct ttccccgtca agctctaaat
     3061 cgggggctcc ctttagggtt ccgatttagt gctttacggc acctcgaccc caaaaaactt
     3121 gattagggtg atggttcacg tagtgggcca tcgccctgat agacggtttt tcgccctttg
     3181 acgttggagt ccacgttctt taatagtgga ctcttgttcc aaactggaac aacactcaac
     3241 cctatctcgg tctattcttt tgatttataa gggattttgc cgatttcggc ctattggtta
     3301 aaaaatgagc tgatttaaca aaaatttaac gcgaattaat tctgtggaat gtgtgtcagt
     3361 tagggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca
     3421 attagtcagc aaccaggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa
     3481 gcatgcatct caattagtca gcaaccatag tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc
     3541 taactccgcc cagttccgcc cattctccgc cccatggctg actaattttt tttatttatg
     3601 cagaggccga ggccgcctct gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg
     3661 gaggcctagg cttttgcaaa aagctcccgg gagcttgtat atccattttc ggatctgatc
     3721 aagagacagg atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc
     3781 cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca atcggctgct
     3841 ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg
     3901 acctgtccgg tgccctgaat gaactgcagg acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca
     3961 cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga agggactggc
     4021 tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga
     4081 aagtatccat catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc
     4141 cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc
     4201 ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg
     4261 ccaggctcaa ggcgcgcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct
     4321 gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc
     4381 tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc
     4441 ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc
     4501 agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg agttcttctg agcgggactc tggggttcga
     4561 aatgaccgac caagcgacgc ccaacctgcc atcacgagat ttcgattcca ccgccgcctt
     4621 ctatgaaagg ttgggcttcg gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg
     4681 cggggatctc atgctggagt tcttcgccca ccccaacttg tttattgcag cttataatgg
     4741 ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc
     4801 tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttatcat gtctgtatac cgtcgacctc
     4861 tagctagagc ttggcgtaat catggtcata gctgtttcct gtgtgaaatt gttatccgct
     4921 cacaattcca cacaacatac gagccggaag cataaagtgt aaagcctggg gtgcctaatg
     4981 agtgagctaa ctcacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct
     5041 gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg
     5101 gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc
     5161 ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg
     5221 aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct
     5281 ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca
     5341 gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg gaagctccct
     5401 cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc
     5461 gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt
     5521 tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc
     5581 cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc
     5641 cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg
     5701 gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc
     5761 agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag
     5821 cggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc
     5881 tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt
     5941 ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt
     6001 taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag
     6061 tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt
     6121 cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc
     6181 gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc
     6241 cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg
     6301 ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac
     6361 aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg
     6421 atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc
     6481 tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact
     6541 gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc
     6601 aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat
     6661 acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc
     6721 ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac
     6781 tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa
     6841 aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact
     6901 catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg
     6961 atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg
     7021 aaaagtgcca cctgacgtc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3607/pET28a-NDH2-YH(密码子优化)人源基因质粒

P3735/pET15b-PABPC1人源基因质粒

P4097/pET28a-TNC人源基因质粒

P3057/pCDNA3.1-CDC42-HA-Hygro人源基因质粒

P1881/pQFLAG-USP7 WT puroR人源基因质粒

P0599/pShuttle-CMV-HMGB1人源基因质粒

P0600/pShuttle-CD1D人源基因质粒

P0690/pBabepuro-KIBRA人源基因质粒

P0777/p14-9VNA5人源基因质粒

P0749/EGFP-Tubulin-6人源基因质粒

P0750/mCherry-Tubulin-C-18人源基因质粒