pDsRed2-Mito线粒体定位质粒

基本信息
名称：pDsRed2-Mito线粒体定位质粒
别称: Plasmid #55838;DsRed2-Mito-7

启动子:	CMV
复制子:	pUC
终止子:	SV40 poly(A) signal
质粒分类:	哺乳系列质粒；哺乳荧光质粒；哺乳红色质粒
质粒大小:	4715bp
质粒标签:	N-DsRed2
原核抗性:	Kan
筛选标记:	G418
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	293T等哺乳细胞
培养条件:	37℃，5%CO2
诱导方式:	无须诱导，瞬时表达
5'测序引物:	CMV-F（CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG）
3'测序引物:	SV40-polyA-R（GAAATTTGTGATGCTATTGC）
备注:	哺乳细胞线粒体红色荧光定位质粒

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	亚细胞定位
基因种属：
基因类型：
原核抗性：	Kan
真核抗性：	Neo/G418
荧光蛋白：	红色

质粒简介
   pDsRed2-Mito是一个哺乳细胞线粒体定位质粒，含有密码子优化过的红色荧光蛋白基因DsRed2和人细胞色素c氧化酶（Mito）亚基VIII的线粒体靶向序列。     

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4715 bp ds-DNA    circular SYN 02-8-2017
KEYWORDS    pDsRed2-Mito
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4715)
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported 2017-8-2 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4715
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        61..364
                     /note="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        365..568
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     misc_feature    597..683
                     /note="Mito"
     CDS             705..1382
                     /codon_start=1
                     /product="improved tetrameric variant of DsRed fluorescent 
                     protein"
                     /note="DsRed2"
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MASSENVITEFMRFKVRMEGTVNGHEFEIEGEGEGRPYEGHNTVK
                     LKVTKGGPLPFAWDILSPQFQYGSKVYVKHPADIPDYKKLSFPEGFKWERVMNFEDGGV
                     ATVTQDSSLQDGCFIYKVKFIGVNFPSDGPVMQKKTMGWEASTERLYPRDGVLKGETHK
                     ALKLKDGGHYLVEFKSIYMAKKPVQLPGYYYVDAKLDITSHNEDYTIVEQYERTEGRHH
                     LFL"
     polyA_signal    1503..1624
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(1631..2086)
                     /direction=LEFT
                     /note="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        2113..2217
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     promoter        2219..2576
                     /note="SV40 promoter"
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      2427..2562
                     /note="SV40 ori"
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             2611..3405
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /note="NeoR/KanR"
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    3637..3684
                     /note="HSV TK poly(A) signal"
                     /note="herpes simplex virus thymidine kinase 
                     polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
     rep_origin      4013..4601
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
       61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
      121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
      181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
      241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
      301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
      361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
      421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
      481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
      541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcatgt
      601 ccgtcctgac gccgctgctg ctgcggggct tgacaggctc ggcccggcgg ctcccagtgc
      661 cgcgcgccaa gatccattcg ttgggggatc caccggtcgc caccatggcc tcctccgaga
      721 acgtcatcac cgagttcatg cgcttcaagg tgcgcatgga gggcaccgtg aacggccacg
      781 agttcgagat cgagggcgag ggcgagggcc gcccctacga gggccacaac accgtgaagc
      841 tgaaggtgac caagggcggc cccctgccct tcgcctggga catcctgtcc ccccagttcc
      901 agtacggctc caaggtgtac gtgaagcacc ccgccgacat ccccgactac aagaagctgt
      961 ccttccccga gggcttcaag tgggagcgcg tgatgaactt cgaggacggc ggcgtggcga
     1021 ccgtgaccca ggactcctcc ctgcaggacg gctgcttcat ctacaaggtg aagttcatcg
     1081 gcgtgaactt cccctccgac ggccccgtga tgcagaagaa gaccatgggc tgggaggcct
     1141 ccaccgagcg cctgtacccc cgcgacggcg tgctgaaggg cgagacccac aaggccctga
     1201 agctgaagga cggcggccac tacctggtgg agttcaagtc catctacatg gccaagaagc
     1261 ccgtgcagct gcccggctac tactacgtgg acgccaagct ggacatcacc tcccacaacg
     1321 aggactacac catcgtggag cagtacgagc gcaccgaggg ccgccaccac ctgttcctgt
     1381 agcggccgcg actctagatc ataatcagcc ataccacatt tgtagaggtt ttacttgctt
     1441 taaaaaacct cccacacctc cccctgaacc tgaaacataa aatgaatgca attgttgttg
     1501 ttaacttgtt tattgcagct tataatggtt acaaataaag caatagcatc acaaatttca
     1561 caaataaagc atttttttca ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat
     1621 cttaaggcgt aaattgtaag cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa
     1681 atcagctcat tttttaacca ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa
     1741 tagaccgaga tagggttgag tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac
     1801 gtggactcca acgtcaaagg gcgaaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa
     1861 ccatcaccct aatcaagttt tttggggtcg aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct
     1921 aaagggagcc cccgatttag agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa
     1981 gggaagaaag cgaaaggagc gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc
     2041 gtaaccacca cacccgccgc gcttaatgcg ccgctacagg gcgcgtcagg tggcactttt
     2101 cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat
     2161 ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtcct
     2221 gaggcggaaa gaaccagctg tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct
     2281 ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa
     2341 agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa
     2401 ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt
     2461 ctccgcccca tggctgacta atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct
     2521 ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaagatc
     2581 gatcaagaga caggatgagg atcgtttcgc atgattgaac aagatggatt gcacgcaggt
     2641 tctccggccg cttgggtgga gaggctattc ggctatgact gggcacaaca gacaatcggc
     2701 tgctctgatg ccgccgtgtt ccggctgtca gcgcaggggc gcccggttct ttttgtcaag
     2761 accgacctgt ccggtgccct gaatgaactg caagacgagg cagcgcggct atcgtggctg
     2821 gccacgacgg gcgttccttg cgcagctgtg ctcgacgttg tcactgaagc gggaagggac
     2881 tggctgctat tgggcgaagt gccggggcag gatctcctgt catctcacct tgctcctgcc
     2941 gagaaagtat ccatcatggc tgatgcaatg cggcggctgc atacgcttga tccggctacc
     3001 tgcccattcg accaccaagc gaaacatcgc atcgagcgag cacgtactcg gatggaagcc
     3061 ggtcttgtcg atcaggatga tctggacgaa gagcatcagg ggctcgcgcc agccgaactg
     3121 ttcgccaggc tcaaggcgag catgcccgac ggcgaggatc tcgtcgtgac ccatggcgat
     3181 gcctgcttgc cgaatatcat ggtggaaaat ggccgctttt ctggattcat cgactgtggc
     3241 cggctgggtg tggcggaccg ctatcaggac atagcgttgg ctacccgtga tattgctgaa
     3301 gagcttggcg gcgaatgggc tgaccgcttc ctcgtgcttt acggtatcgc cgctcccgat
     3361 tcgcagcgca tcgccttcta tcgccttctt gacgagttct tctgagcggg actctggggt
     3421 tcgaaatgac cgaccaagcg acgcccaacc tgccatcacg agatttcgat tccaccgccg
     3481 ccttctatga aaggttgggc ttcggaatcg ttttccggga cgccggctgg atgatcctcc
     3541 agcgcgggga tctcatgctg gagttcttcg cccaccctag ggggaggcta actgaaacac
     3601 ggaaggagac aataccggaa ggaacccgcg ctatgacggc aataaaaaga cagaataaaa
     3661 cgcacggtgt tgggtcgttt gttcataaac gcggggttcg gtcccagggc tggcactctg
     3721 tcgatacccc accgagaccc cattggggcc aatacgcccg cgtttcttcc ttttccccac
     3781 cccacccccc aagttcgggt gaaggcccag ggctcgcagc caacgtcggg gcggcaggcc
     3841 ctgccatagc ctcaggttac tcatatatac tttagattga tttaaaactt catttttaat
     3901 ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg
     3961 agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc
     4021 ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg
     4081 tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag
     4141 cgcagatacc aaatactgtt cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact
     4201 ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct gctgccagtg
     4261 gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact caagacgata gttaccggat aaggcgcagc
     4321 ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg
     4381 aactgagata cctacagcgt gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg
     4441 cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag
     4501 ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc
     4561 gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct
     4621 ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc
     4681 ctgattctgt ggataaccgt attaccgcca tgcat
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2771/pENTR223-MRPL37人源基因质粒

P2772/pENTR223-SPATA6L（有突变）人源基因质粒

P2773/pENTR223-DDI1（有突变）人源基因质粒

P2774/pENTR223-GNAT2（1同义突变）人源基因质粒

P2775/pENTR223-ZNF24（2点突变）人源基因质粒

P2776/pENTR223-B3GNT2人源基因质粒

P2777/pENTR223-SPATA17（1同义突变）人源基因质粒

P2778/pENTR223-ACTRT2（缺失和2同义突变）人源基因质粒

P2779/pENTR223-ATP6V1C1-G3T人源基因质粒

P2780/pENTR223-RCL1人源基因质粒

P2781/pENTR223-THUMPD1人源基因质粒

P2782/pENTR223-AFF4（1-1087bp）人源基因质粒