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- P3214
- 2026年04月16日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_003141.3;RNF81;Ro/SSA;RO52;SSA;SS
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCAGGS-HA-TRIM21人源基因质粒
别称: NM_003141.3;RNF81;Ro/SSA;RO52;SSA;SS
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pCAGGS-HA-TRIM21人源基因质粒
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2376/pECMV-3×FLAG-MRP4(2364-3837bp)人源基因质粒 |
| P2377/pEGFP-C3-ATG5人源基因质粒 |
| P2412/pECMV-3×FLAG-MAPK15人源基因质粒 |
| P2413/pECMV-3×FLAG-MS4A3人源基因质粒 |
| P2414/pECMV-3×FLAG-C19orf36人源基因质粒 |
| P2415/pECMV-3×FLAG-TIGIT人源基因质粒 |
| P2416/pECMV-3×FLAG-STXBP1人源基因质粒 |
| P2417/pECMV-3×FLAG-HDAC7人源基因质粒 |
| P2418/pECMV-3×FLAG-CXCR4人源基因质粒 |
| P2961/pECMV-3×FLAG-GUCY2C人源基因质粒 |
| P4839/pCDNA3.1-Myr-FALG-Akt1人源基因质粒 |
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文献和实验pCAGGS质粒载体图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5142565_0.html pET-3c质粒载体图谱http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1840731_0.html pGEX-4T3 载体图谱http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2017715_0.html 各种真核载体图谱，包括绿色荧光蛋白表达载体 PEGFPN和pDsRed1-N1
"把基因表达量调高"听起来是个简单需求，但用 CRISPRa 和用 cDNA 过表达质粒，得到的细胞模型和结论都可能完全不同。选错的话，表型实验从一开始就偏了。 先说结论：过表达质粒是在细胞质里额外生产一份蛋白，表达量远高于生理水平、不考虑 isoform 和调控背景、也无法保证定位正确；CRISPRa 是在内源基因组位点上激活转录，产物是天然的剪接 isoform、受内源调控元件约束、表达量更接近生理范围。想问"这个基因多了会怎样"用过表达，想问"把这个基因的内源表达调高
核酸疫苗（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｖａｃｃｉｎｅ），也叫基因疫苗（ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｃｃｉｎｅ）、核酸免疫（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）、ＤＮＡ免疫（ＤＮＡ ｂａｓｅｄ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ），它是利用基因重组技术直接将编码某种抗原蛋白的外源基因（ＤＮＡ）与质粒重组后，直接导入动物细胞内，并通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。核酸疫苗包括ＤＮＡ疫苗（ＤＮＡ ｖａｃｃｉｎｅ）和ＲＮＡ疫苗（ＲＮＡ
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