- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P2148
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#57484
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：mEos3.2-Tubulin-C-18人源基因质粒
别称: Plasmid#57484
复制子: pUC
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pCDNA3.0-HA-p53质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3963/pCMV-SPORT6-PAIP1（1点突变）人源基因质粒 |
| P3964/pCMV-SPORT6-TRIM63（1-975bpA709G）人源基因质粒 |
| P3965/pCMV-SPORT6-GALT（1点突变）人源基因质粒 |
| P3966/pCMV-SPORT6-SPSB1人源基因质粒 |
| P3967/pCMV-SPORT6-ZNF408人源基因质粒 |
| P3968/pCMV-SPORT6-ARHGDIA人源基因质粒 |
| P3969/pCMV-SPORT6-NCAPH2（219-1818bp）人源基因质粒 |
| P3971/pCMV-SPORT6-C11orf74人源基因质粒 |
| P3972/pCMV-SPORT6-PBXIP1人源基因质粒 |
| P3973/pCMV-SPORT6-USP48人源基因质粒 |
| P3974/pCMV-SPORT6-ABCD1人源基因质粒 |
| P3975/pCMV-SPORT6-C1D人源基因质粒 |
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文献和实验memoday 最近在做一个信号通路的下游磷酸化水平检测，但是做western没有看到任何条带,包括p-ERK,p85。麻烦各位战友帮我分析一下可能原因吧： 1.293T细胞转染质粒（带外源基因），24h 2.无血清培养18h 3.配体（外源基因是该配体的膜受体）激活，37度，10min 4.PLB（promega公司）裂解细胞，做western，抗体是SANTA CRUZ公司的p-ERK (Tyr 204)，以及cell
，也很难找到单一的酶切位点。 d. Ti质粒不能在大肠杆菌中复制，为了使重组质粒DNA 的大量扩增，须添加入大肠杆菌复制子。 加入植物细胞的筛选标记，如neor基因，使用植物细胞启动子及末端polyA化信号，加入多聚人工接头以利于外源基因的。 植物中一般不存在质粒，为利用农杆菌的Ti质粒，发展了共整合系统和双元载体系统，避免了在大的Ti质粒上进行分子重组操作的困难。 2. 植物细胞转化的共整合系统 T-DNA 在大肠杆菌质粒上，含有E.coli的选择标记和植物选择标记Kmr。首先在
毒载体。 2.慢病毒包装与纯化 慢病毒包装采用三质粒或四质粒系统进行包装，收集细胞培养上清，通过超速离心浓缩纯化和收集病毒。 3.慢病毒滴度检测 检测方法：定量PCR检测干扰后细胞基因组中外源DNA拷贝数 实验原理：慢病毒介导外源基因以逆转录方式整合进目的细胞基因组 4.慢病毒载体优势 ① 表达时间长：慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上，实现基因长时间稳定的表达，不随细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的首选，常用于构建稳转株 ② 安全性高：未发现致病性，慢病毒载体改造T细胞用于CAR-T
