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- Xybio
- 上海
- P2136
- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#21556
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pcDNA3-HA2-Keap1人源基因质粒
别称: Plasmid#21556
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
表达宿主: 哺乳细胞
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pcDNA3-HA2-Keap1是一个人源基因哺乳细胞表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7314 bp ds-DNA circular SYN 22-MAY-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7314
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin complement(234..822)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(993..1853)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(1854..1958)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
enhancer 2224..2603
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 2604..2807
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 2852..2870
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 2886..2912
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/note="HA"
/translation="YPYDVPDYA"
CDS 2916..2942
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/note="HA"
/translation="YPYDVPDYA"
misc_feature 2968..4840
/note="KEAP1"
promoter complement(4856..4874)
/note="SP6 promoter"
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
polyA_signal 4900..5124
/note="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 5170..5598
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 5612..5941
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 5792..5927
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 6008..6802
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="Neo"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 6976..7097
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
ORIGIN
1 cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct
61 tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac
121 tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga
181 gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat
241 aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac
301 ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct
361 gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg
421 ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg
481 ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt
541 cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg
601 attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac
661 ggctacacta gaagaacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga
721 aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt
781 gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt
841 tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga
901 ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc
961 taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct
1021 atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata
1081 actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca
1141 cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga
1201 agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga
1261 gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg
1321 gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga
1381 gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt
1441 gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct
1501 cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca
1561 ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat
1621 accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga
1681 aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc
1741 aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg
1801 caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc
1861 ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt
1921 gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca
1981 cctgacgtcg acggatcggg agatctcccg atcccctatg gtgcactctc agtacaatct
2041 gctctgatgc cgcatagtta agccagtatc tgctccctgc ttgtgtgttg gaggtcgctg
2101 agtagtgcgc gagcaaaatt taagctacaa caaggcaagg cttgaccgac aattgcatga
2161 agaatctgct tagggttagg cgttttgcgc tgcttcgcga tgtacgggcc agatatacgc
2221 gttgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata
2281 gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc
2341 ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag
2401 ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac
2461 atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg
2521 cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg
2581 tattagtcat cgctattacc atggtgatgc ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat
2641 agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt
2701 tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa aatgtcgtaa caactccgcc ccattgacgc
2761 aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg tctatataag cagagctctc tggctaacta
2821 gagaacccac tgcttactgg cttatcgaaa ttaatacgac tcactatagg gagacccaag
2881 ctatgtaccc atacgatgtt cctgactatg cgggctatcc ctatgacgtc ccggactatg
2941 caagcttggt accgttaaca tggatcccca tgcagccaga tcccaggcct agcggggctg
3001 gggcctgctg ccgattcctg cccctgcagt cacagtgccc tgagggggca ggggacgcgg
3061 tgatgtacgc ctccactgag tgcaaggcgg aggtgacgcc ctcccagcat ggcaaccgca
3121 ccttcagcta caccctggag gatcatacca agcaggcctt tggcatcatg aacgagctgc
3181 ggctcagcca gcagctgtgt gacgtcacac tgcaggtcaa gtaccaggat gcaccggccg
3241 cccagttcat ggcccacaag gtggtgctgg cctcatccag ccctgtcttc aaggccatgt
3301 tcaccaacgg gctgcgggag cagggcatgg aggtggtgtc cattgagggt atccacccca
3361 aggtcatgga gcgcctcatt gaattcgcct acacggcctc catctccatg ggcgagaagt
3421 gtgtcctcca cgtcatgaac ggtgctgtca tgtaccagat cgacagcgtt gtccgtgcct
3481 gcagtgactt cctggtgcag cagctggacc ccagcaatgc catcggcatc gccaacttcg
3541 ctgagcagat tggctgtgtg gagttgcacc agcgtgcccg ggagtacatc tacatgcatt
3601 ttggggaggt ggccaagcaa gaggagttct tcaacctgtc ccactgccaa ctggtgaccc
3661 tcatcagccg ggacgacctg aacgtgcgct gcgagtccga ggtcttccac gcctgcatca
3721 actgggtcaa gtacgactgc gaacagcgac ggttctacgt ccaggcgctg ctgcgggccg
3781 tgcgctgcca ctcgttgacg ccgaacttcc tgcagatgca gctgcagaag tgcgagatcc
3841 tgcagtccga ctcccgctgc aaggactacc tggtcaagat cttcgaggag ctcaccctgc
3901 acaagcccac gcaggtgatg ccctgccggg cgcccaaggt gggccgcctg atctacaccg
3961 cgggcggcta cttccgacag tcgctcagct acctggaggc ttacaacccc agtgacggca
4021 cctggctccg gttggcggac ctgcaggtgc cgcggagcgg cctggccggc tgcgtggtgg
4081 gcgggctgtt gtacgccgtg ggcggcagga acaactcgcc cgacggcaac accgactcca
4141 gcgccctgga ctgttacaac cccatgacca atcagtggtc gccctgcgcc cccatgagcg
4201 tgccccgtaa ccgcatcggg gtgggggtca tcgatggcca catctatgcc gtcggcggct
4261 cccacggctg catccaccac aacagtgtgg agaggtatga gccagagcgg gatgagtggc
4321 acttggtggc cccaatgctg acacgaagga tcggggtggg cgtggctgtc ctcaatcgtc
4381 tcctttatgc cgtggggggc tttgacggga caaaccgcct taattcagct gagtgttact
4441 acccagagag gaacgagtgg cgaatgatca cagcaatgaa caccatccga agcggggcag
4501 gcgtctgcgt cctgcacaac tgtatctatg ctgctggggg ctatgatggt caggaccagc
4561 tgaacagcgt ggagcgctac gatgtggaaa cagagacgtg gactttcgta gcccccatga
4621 agcaccggcg aagtgccctg gggatcactg tccaccaggg gagaatctac gtccttggag
4681 gctatgatgg tcacacgttc ctggacagtg tggagtgtta cgacccagat acagacacct
4741 ggagcgaggt gacccgaatg acatcgggcc ggagtggggt gggcgtggct gtcaccatgg
4801 agccctgccg gaagcagatt gaccagcaga actgtacctg tctagagggc cctattctat
4861 agtgtcacct aaatgctaga gctcgctgat cagcctcgac tgtgccttct agttgccagc
4921 catctgttgt ttgcccctcc cccgtgcctt ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg
4981 tcctttccta ataaaatgag gaaattgcat cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc
5041 tggggggtgg ggtggggcag gacagcaagg gggaggattg ggaagacaat agcaggcatg
5101 ctggggatgc ggtgggctct atggcttctg aggcggaaag aaccagctgg ggctctaggg
5161 ggtatcccca cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca
5221 gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct
5281 ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt
5341 tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac
5401 gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct
5461 ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa caacactcaa ccctatctcg gtctattctt
5521 ttgatttata agggattttg ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac
5581 aaaaatttaa cgcgaattaa ttctgtggaa tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc
5641 aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccaggtg
5701 tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc
5761 agcaaccata gtcccgcccc taactccgcc catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc
5821 ccattctccg ccccatggct gactaatttt ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc
5881 tgcctctgag ctattccaga agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa
5941 aaagctcccg ggagcttgta tatccatttt cggatctgat caagagacag gatgaggatc
6001 gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag
6061 gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg
6121 gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa
6181 tgaactgcag gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc
6241 agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc
6301 ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga
6361 tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa
6421 acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct
6481 ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgcgcat
6541 gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt
6601 ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta
6661 tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga
6721 ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg
6781 ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg
6841 cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc
6901 ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag
6961 ttcttcgccc accccaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc
7021 atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa
7081 ctcatcaatg tatcttatca tgtctgtata ccgtcgacct ctagctagag cttggcgtaa
7141 tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata
7201 cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta
7261 attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pcDNA3-HA2-Keap1人源基因质粒
别称: Plasmid#21556
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
表达宿主: 哺乳细胞
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pcDNA3-HA2-Keap1是一个人源基因哺乳细胞表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7314 bp ds-DNA circular SYN 22-MAY-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7314
/organism="synthetic DNA construct"
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replication"
CDS complement(993..1853)
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EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
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promoter complement(1854..1958)
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enhancer 2224..2603
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 2604..2807
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 2852..2870
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CDS 2886..2912
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CDS 2916..2942
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/note="HA"
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misc_feature 2968..4840
/note="KEAP1"
promoter complement(4856..4874)
/note="SP6 promoter"
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indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 5612..5941
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/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 6008..6802
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(Geneticin(R))"
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GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
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/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
ORIGIN
1 cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct
61 tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac
121 tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga
181 gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat
241 aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac
301 ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct
361 gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg
421 ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg
481 ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt
541 cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg
601 attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac
661 ggctacacta gaagaacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga
721 aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt
781 gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt
841 tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga
901 ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc
961 taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct
1021 atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata
1081 actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca
1141 cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga
1201 agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga
1261 gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg
1321 gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga
1381 gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt
1441 gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct
1501 cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca
1561 ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat
1621 accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga
1681 aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc
1741 aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg
1801 caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc
1861 ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt
1921 gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca
1981 cctgacgtcg acggatcggg agatctcccg atcccctatg gtgcactctc agtacaatct
2041 gctctgatgc cgcatagtta agccagtatc tgctccctgc ttgtgtgttg gaggtcgctg
2101 agtagtgcgc gagcaaaatt taagctacaa caaggcaagg cttgaccgac aattgcatga
2161 agaatctgct tagggttagg cgttttgcgc tgcttcgcga tgtacgggcc agatatacgc
2221 gttgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata
2281 gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc
2341 ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag
2401 ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac
2461 atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg
2521 cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg
2581 tattagtcat cgctattacc atggtgatgc ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat
2641 agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt
2701 tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa aatgtcgtaa caactccgcc ccattgacgc
2761 aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg tctatataag cagagctctc tggctaacta
2821 gagaacccac tgcttactgg cttatcgaaa ttaatacgac tcactatagg gagacccaag
2881 ctatgtaccc atacgatgtt cctgactatg cgggctatcc ctatgacgtc ccggactatg
2941 caagcttggt accgttaaca tggatcccca tgcagccaga tcccaggcct agcggggctg
3001 gggcctgctg ccgattcctg cccctgcagt cacagtgccc tgagggggca ggggacgcgg
3061 tgatgtacgc ctccactgag tgcaaggcgg aggtgacgcc ctcccagcat ggcaaccgca
3121 ccttcagcta caccctggag gatcatacca agcaggcctt tggcatcatg aacgagctgc
3181 ggctcagcca gcagctgtgt gacgtcacac tgcaggtcaa gtaccaggat gcaccggccg
3241 cccagttcat ggcccacaag gtggtgctgg cctcatccag ccctgtcttc aaggccatgt
3301 tcaccaacgg gctgcgggag cagggcatgg aggtggtgtc cattgagggt atccacccca
3361 aggtcatgga gcgcctcatt gaattcgcct acacggcctc catctccatg ggcgagaagt
3421 gtgtcctcca cgtcatgaac ggtgctgtca tgtaccagat cgacagcgtt gtccgtgcct
3481 gcagtgactt cctggtgcag cagctggacc ccagcaatgc catcggcatc gccaacttcg
3541 ctgagcagat tggctgtgtg gagttgcacc agcgtgcccg ggagtacatc tacatgcatt
3601 ttggggaggt ggccaagcaa gaggagttct tcaacctgtc ccactgccaa ctggtgaccc
3661 tcatcagccg ggacgacctg aacgtgcgct gcgagtccga ggtcttccac gcctgcatca
3721 actgggtcaa gtacgactgc gaacagcgac ggttctacgt ccaggcgctg ctgcgggccg
3781 tgcgctgcca ctcgttgacg ccgaacttcc tgcagatgca gctgcagaag tgcgagatcc
3841 tgcagtccga ctcccgctgc aaggactacc tggtcaagat cttcgaggag ctcaccctgc
3901 acaagcccac gcaggtgatg ccctgccggg cgcccaaggt gggccgcctg atctacaccg
3961 cgggcggcta cttccgacag tcgctcagct acctggaggc ttacaacccc agtgacggca
4021 cctggctccg gttggcggac ctgcaggtgc cgcggagcgg cctggccggc tgcgtggtgg
4081 gcgggctgtt gtacgccgtg ggcggcagga acaactcgcc cgacggcaac accgactcca
4141 gcgccctgga ctgttacaac cccatgacca atcagtggtc gccctgcgcc cccatgagcg
4201 tgccccgtaa ccgcatcggg gtgggggtca tcgatggcca catctatgcc gtcggcggct
4261 cccacggctg catccaccac aacagtgtgg agaggtatga gccagagcgg gatgagtggc
4321 acttggtggc cccaatgctg acacgaagga tcggggtggg cgtggctgtc ctcaatcgtc
4381 tcctttatgc cgtggggggc tttgacggga caaaccgcct taattcagct gagtgttact
4441 acccagagag gaacgagtgg cgaatgatca cagcaatgaa caccatccga agcggggcag
4501 gcgtctgcgt cctgcacaac tgtatctatg ctgctggggg ctatgatggt caggaccagc
4561 tgaacagcgt ggagcgctac gatgtggaaa cagagacgtg gactttcgta gcccccatga
4621 agcaccggcg aagtgccctg gggatcactg tccaccaggg gagaatctac gtccttggag
4681 gctatgatgg tcacacgttc ctggacagtg tggagtgtta cgacccagat acagacacct
4741 ggagcgaggt gacccgaatg acatcgggcc ggagtggggt gggcgtggct gtcaccatgg
4801 agccctgccg gaagcagatt gaccagcaga actgtacctg tctagagggc cctattctat
4861 agtgtcacct aaatgctaga gctcgctgat cagcctcgac tgtgccttct agttgccagc
4921 catctgttgt ttgcccctcc cccgtgcctt ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg
4981 tcctttccta ataaaatgag gaaattgcat cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc
5041 tggggggtgg ggtggggcag gacagcaagg gggaggattg ggaagacaat agcaggcatg
5101 ctggggatgc ggtgggctct atggcttctg aggcggaaag aaccagctgg ggctctaggg
5161 ggtatcccca cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca
5221 gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct
5281 ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt
5341 tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac
5401 gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct
5461 ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa caacactcaa ccctatctcg gtctattctt
5521 ttgatttata agggattttg ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac
5581 aaaaatttaa cgcgaattaa ttctgtggaa tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc
5641 aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccaggtg
5701 tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc
5761 agcaaccata gtcccgcccc taactccgcc catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc
5821 ccattctccg ccccatggct gactaatttt ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc
5881 tgcctctgag ctattccaga agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa
5941 aaagctcccg ggagcttgta tatccatttt cggatctgat caagagacag gatgaggatc
6001 gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag
6061 gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg
6121 gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa
6181 tgaactgcag gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc
6241 agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc
6301 ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga
6361 tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa
6421 acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct
6481 ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgcgcat
6541 gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt
6601 ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta
6661 tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga
6721 ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg
6781 ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg
6841 cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc
6901 ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag
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7081 ctcatcaatg tatcttatca tgtctgtata ccgtcgacct ctagctagag cttggcgtaa
7141 tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata
7201 cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta
7261 attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctg
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3849/pCMV-SPORT6-IP6K1人源基因质粒 |
| P3850/pCMV-SPORT6-ERO1A人源基因质粒 |
| P3851/pCMV-SPORT6-GABRA5（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3852/pCMV-SPORT6-PRRT2人源基因质粒 |
| P3853/pCMV-SPORT6-NPM1人源基因质粒 |
| P3854/pCMV-SPORT6-PAPSS1人源基因质粒 |
| P3855/pCMV-SPORT6-SCARB2人源基因质粒 |
| P3856/pCMV-SPORT6-C8orf79人源基因质粒 |
| P3857/pCMV-SPORT6-TUBGCP3人源基因质粒 |
| P3858/pCMV-SPORT6-IL24人源基因质粒 |
| P3859/pCMV-SPORT6-DEPTOR（2点突变）人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
表达载体的构建方法及步骤 一、载体的选择及如何阅读质粒图谱 目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素： （1）复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而 真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。 （2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+ （3）多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段 （4） P/E 启动子/增强
非病毒载体介导的基因治疗有许多优点，但就目前大多数表达体系而言普遍存在外源基因表达水平低而短暂等问题为了使外源基因稳定持续表达，必须对质粒DNA 进行改造。附着体质粒载体(episomal vector)可以使外源基因以附着体形式复制，分离到子代细胞，从而使基因高效持续表达，是种新型的非病毒表达载体 。 我们构建了以EB病毒(Epstein Barr virus，EBV)复制子(EBV replicon，EBVR)为基础的附着体质粒载体，并将报告基因增强型绿色
【求助】逆转录病毒、慢病毒载体与其他真核表达载体在稳定筛选时的区别？
roy_liu823 逆转录病毒和慢病毒载体经包装后可以得到携带外源基因的病毒，将病毒感染细胞后，外源基因可以整合到细胞基因组中，经过稳定的筛选后，就可以得到稳定表达外源基因的细胞。 而一些真核表达载体如pcDNA3.1经脂质体转染进细胞后，也可以整合到细胞基因组中，并经过G418的筛选后，也可以得到稳定表达外源基因的细胞。我就很困惑：这两者有什么区别？用逆转录病毒或慢病毒载体的优势在哪？如果我想得到能稳定表达某一基因的骨髓基质干细胞，是不是用pcDNA3
pcDNA3-HA2-Keap1人源基因质粒
￥100 - 1000
