Ub-G76V-GFP人源基因质粒

基本信息
名称：Ub-G76V-GFP人源基因质粒
别称: Plasmid#11941
复制子: pUC
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
 Ub-G76V-GFP人源基因质粒

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4959 bp ds-DNA     circular SYN 06-JUL-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    Ub-G76V-GFP
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4959)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4959
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        119..422
                     /note="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        423..626
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     CDS             696..920
                     /codon_start=1
                     /product="human ubiquitin"
                     /note="ubiquitin"
                     /translation="MQIFVKTLTGKTITLEVEPSDTIENVKAKIQDKEGIPPDQQRLIF
                     AGKQLEDGRTL-SDYNIQKESTLHLVLRLRG"
     CDS             963..1682
                     /codon_start=1
                     /product="enhanced GFP"
                     /note="EGFP"
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
                     VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
                     EFVTAAGITLGMDELYK"
     polyA_signal    1805..1926
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(1933..2388)
                     /direction=LEFT
                     /note="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        2415..2519
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     promoter        2521..2878
                     /note="SV40 promoter"
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      2729..2864
                     /note="SV40 ori"
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             2913..3707
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /note="NeoR/KanR"
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    3939..3986
                     /note="HSV TK poly(A) signal"
                     /note="herpes simplex virus thymidine kinase 
                     polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
     rep_origin      4315..4903
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 catgttcttt cctgcgttat cccctgattc tgtggataac cgtattaccg ccatgcatta
       61 gttattaata gtaatcaatt acggggtcat tagttcatag cccatatatg gagttccgcg
      121 ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg gctgaccgcc caacgacccc cgcccattga
      181 cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa cgccaatagg gactttccat tgacgtcaat
      241 gggtggagta tttacggtaa actgcccact tggcagtaca tcaagtgtat catatgccaa
      301 gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta aatggcccgc ctggcattat gcccagtaca
      361 tgaccttatg ggactttcct acttggcagt acatctacgt attagtcatc gctattacca
      421 tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg ggcgtggata gcggtttgac tcacggggat
      481 ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg ggagtttgtt ttggcaccaa aatcaacggg
      541 actttccaaa atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt aggcgtgtac
      601 ggtgggaggt ctatataagc agagctggtt tagtgaaccg tcagatccgc tagcgctacc
      661 ggactcagat ctcgagctca agcttcgaat tcaccatgca gatcttcgtg aagactctga
      721 ctggtaagac catcaccctc gaggttgagc ccagtgacac cattgagaat gtcaaggcaa
      781 agatccaaga taaggaaggc atccctcctg accagcagag gctgatcttt gctggaaaac
      841 agctggaaga tgggcgcacc ctgtctgact acaacatcca gaaagagtcc accctgcacc
      901 tggtactccg tctcagaggt gtggtgggga agcttggtcg acaggatcca ccggtcgcca
      961 ccatggtgag caagggcgag gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg gtcgagctgg
     1021 acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc gatgccacct
     1081 acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg ccctggccca
     1141 ccctcgtgac caccctgacc tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc gaccacatga
     1201 agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag cgcaccatct
     1261 tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag ggcgacaccc
     1321 tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac atcctggggc
     1381 acaagctgga gtacaactac aacagccaca acgtctatat catggccgac aagcagaaga
     1441 acggcatcaa ggtgaacttc aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc gtgcagctcg
     1501 ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg cccgacaacc
     1561 actacctgag cacccagtcc gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc gatcacatgg
     1621 tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga tcactctcgg catggacgag ctgtacaagt
     1681 aaagcggccg cgactctaga tcataatcag ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc
     1741 tttaaaaaac ctcccacacc tccccctgaa cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt
     1801 tgttaacttg tttattgcag cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt
     1861 cacaaataaa gcattttttt cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt
     1921 atcttaaggc gtaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt
     1981 aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag
     2041 aatagaccga gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga
     2101 acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg
     2161 aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc
     2221 ctaaagggag cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg
     2281 aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc
     2341 gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtca ggtggcactt
     2401 ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt
     2461 atccgctcat gagacaataa ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa aggaagagtc
     2521 ctgaggcgga aagaaccagc tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg
     2581 ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg
     2641 aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc
     2701 aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca
     2761 ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc
     2821 ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaga
     2881 tcgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag
     2941 gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg
     3001 gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca
     3061 agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac tgcaagacga ggcagcgcgg ctatcgtggc
     3121 tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg
     3181 actggctgct attgggcgaa gtgccggggc aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg
     3241 ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta
     3301 cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag
     3361 ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac
     3421 tgttcgccag gctcaaggcg agcatgcccg acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg
     3481 atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa atggccgctt ttctggattc atcgactgtg
     3541 gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg
     3601 aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg
     3661 attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg
     3721 gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa cctgccatca cgagatttcg attccaccgc
     3781 cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct
     3841 ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt cgcccaccct agggggaggc taactgaaac
     3901 acggaaggag acaataccgg aaggaacccg cgctatgacg gcaataaaaa gacagaataa
     3961 aacgcacggt gttgggtcgt ttgttcataa acgcggggtt cggtcccagg gctggcactc
     4021 tgtcgatacc ccaccgagac cccattgggg ccaatacgcc cgcgtttctt ccttttcccc
     4081 accccacccc ccaagttcgg gtgaaggccc agggctcgca gccaacgtcg gggcggcagg
     4141 ccctgccata gcctcaggtt actcatatat actttagatt gatttaaaac ttcattttta
     4201 atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg
     4261 tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga
     4321 tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt
     4381 ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag
     4441 agcgcagata ccaaatactg ttcttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa
     4501 ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag
     4561 tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca
     4621 gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac
     4681 cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa
     4741 ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc
     4801 agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg
     4861 tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc
     4921 ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctca
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3798/pCMV-SPORT6-SETD3人源基因质粒

P4883/pCMV-SPORT6-LMBR1人源基因质粒

P3799/pCMV-SPORT6-TEFM人源基因质粒

P3800/pCMV-SPORT6-PRPSAP1人源基因质粒

P3801/pCMV-SPORT6-JPH3人源基因质粒

P3803/pCMV-SPORT6-CAPZB人源基因质粒

P3804/pCMV-SPORT6-C1QB人源基因质粒

P3805/pCMV-SPORT6-SRD5A1（1同义突变）人源基因质粒

P3806/pCMV-SPORT6-ZNF85人源基因质粒

P3807/pCMV-SPORT6-SFRP2（1点突变1同义突变）人源基因质粒

P3808/pCMV-SPORT6-MARK4人源基因质粒