pCDNA3-HA-CTNNB1人源基因质粒

基本信息
名称：pCDNA3-HA-CTNNB1人源基因质粒
别称: CTNNB;MRD19;armadillo
启动子：CMV
复制子: pUC
终止子:   bGH
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
 pCDNA3-HA-CTNNB1(NM_001904.3)是一个人源基因哺乳细胞过表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                7825 bp ds-DNA     circular SYN 13-DEC-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7825
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        235..614
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        615..818
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        863..881
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     CDS             898..924
                     /codon_start=1
                     /product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
                     /label=HA
                     /translation="YPYDVPDYA"
     CDS             940..3285
                     /codon_start=1
                     /product="(NM_001904.3)"
                     /label=CTNNB1
                     /translation="MATQADLMELDM-AMEPDRKAAVSHWQQQSYLDSGIHSGATTTAPS
                     LSGKGNPEEEDVDTSQVLYEWEQGFSQSFTQEQVADIDGQYAMTRAQRVRAAMFPETLD
                     EGMQIPSTQFDAAHPTNVQRLAEPSQMLKHAVVNLINYQDDAELATRAIPELTKLLNDE
                     DQVVVNKAAVMVHQLSKKEASRHAIMRSPQMVSAIVRTMQNTNDVETARCTAGTLHNLS
                     HHREGLLAIFKSGGIPALVKMLGSPVDSVLFYAITTLHNLLLHQEGAKMAVRLAGGLQK
                     MVALLNKTNVKFLAITTDCLQILAYGNQESKLIILASGGPQALVNIMRTYTYEKLLWTT
                     SRVLKVLSVCSSNKPAIVEAGGMQALGLHLTDPSQRLVQNCLWTLRNL-SDAATKQEGME
                     GLLGTLVQLLGSDDINVVTCAAGILSNLTCNNYKNKMMVCQVGGIEALVRTVLRAGDRE
                     DITEPAICALRHLTSRHQEAEMAQNAVRLHYGLPVVVKLLHPPSHWPLIKATVGLIRNL
                     ALCPANHAPLREQGAIPRLVQLLVRAHQDTQRRTSMGGTQQQFVEGVRMEEIVEGCTGA
                     LHILARDVHNRIVIRGLNTIPLFVQLLYSPIENIQRVAAGVLCELAQDKEAAEAIEAEG
                     ATAPLTELLHSRNEGVATYAAAVLFRMSEDKPQDYKKRLSVELTSSLFRTEPM-AWNETA
                     DLGLDIGAQGEPLGYRQDDPSYRSFHSGGYGQDALGMDPMMEHEMGGHHPGADYPVDGL
                     PDLGHAQDLMDGLPPGDSNQLAWFDTDL"
     promoter        complement(3377..3395)
                     /label=SP6 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
     polyA_signal    3421..3645
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      3691..4119
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        4133..4463
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      4314..4449
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             4530..5324
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=Neo
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    5498..5619
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(6070..6658)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(6829..7689)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(7690..7794)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtcgactct cagtacaatc tgctctgatg
       61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
      121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
      181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
      241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
      301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
      361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
      421 attgacgtca atgggtggac tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
      481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
      541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
      601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
      661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
      721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
      781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
      841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccgc caccatgtac
      901 ccatacgacg tcccagacta cgctggaagc ttggtaccga tggctactca agctgatttg
      961 atggagttgg acatggccat ggaaccagac agaaaagcgg ctgttagtca ctggcagcaa
     1021 cagtcttacc tggactctgg aatccattct ggtgccacta ccacagctcc ttctctgagt
     1081 ggtaaaggca atcctgagga agaggatgtg gatacctccc aagtcctgta tgagtgggaa
     1141 cagggatttt ctcagtcctt cactcaagaa caagtagctg atattgatgg acagtatgca
     1201 atgactcgag ctcagagggt acgagctgct atgttccctg agacattaga tgagggcatg
     1261 cagatcccat ctacacagtt tgatgctgct catcccacta atgtccagcg tttggctgaa
     1321 ccatcacaga tgctgaaaca tgcagttgta aacttgatta actatcaaga tgatgcagaa
     1381 cttgccacac gtgcaatccc tgaactgaca aaactgctaa atgacgagga ccaggtggtg
     1441 gttaataagg ctgcagttat ggtccatcag ctttctaaaa aggaagcttc cagacacgct
     1501 atcatgcgtt ctcctcagat ggtgtctgct attgtacgta ccatgcagaa tacaaatgat
     1561 gtagaaacag ctcgttgtac cgctgggacc ttgcataacc tttcccatca tcgtgagggc
     1621 ttactggcca tctttaagtc tggaggcatt cctgccctgg tgaaaatgct tggttcacca
     1681 gtggattctg tgttgtttta tgccattaca actctccaca accttttatt acatcaagaa
     1741 ggagctaaaa tggcagtgcg tttagctggt gggctgcaga aaatggttgc cttgctcaac
     1801 aaaacaaatg ttaaattctt ggctattacg acagactgcc ttcaaatttt agcttatggc
     1861 aaccaagaaa gcaagctcat catactggct agtggtggac cccaagcttt agtaaatata
     1921 atgaggacct atacttacga aaaactactg tggaccacaa gcagagtgct gaaggtgcta
     1981 tctgtctgct ctagtaataa gccggctatt gtagaagctg gtggaatgca agctttagga
     2041 cttcacctga cagatccaag tcaacgtctt gttcagaact gtctttggac tctcaggaat
     2101 ctttcagatg ctgcaactaa acaggaaggg atggaaggtc tccttgggac tcttgttcag
     2161 cttctgggtt cagatgatat aaatgtggtc acctgtgcag ctggaattct ttctaacctc
     2221 acttgcaata attataagaa caagatgatg gtctgccaag tgggtggtat agaggctctt
     2281 gtgcgtactg tccttcgggc tggtgacagg gaagacatca ctgagcctgc catctgtgct
     2341 cttcgtcatc tgaccagccg acaccaagaa gcagagatgg cccagaatgc agttcgcctt
     2401 cactatggac taccagttgt ggttaagctc ttacacccac catcccactg gcctctgata
     2461 aaggctactg ttggattgat tcgaaatctt gccctttgtc ccgcaaatca tgcacctttg
     2521 cgtgagcagg gtgccattcc acgactagtt cagttgcttg ttcgtgcaca tcaggatacc
     2581 cagcgccgta cgtccatggg tgggacacag cagcaatttg tggagggggt ccgcatggaa
     2641 gaaatagttg aaggttgtac cggagccctt cacatcctag ctcgggatgt tcacaaccga
     2701 attgttatca gaggactaaa taccattcca ttgtttgtgc agctgcttta ttctcccatt
     2761 gaaaacatcc aaagagtagc tgcaggggtc ctctgtgaac ttgctcagga caaggaagct
     2821 gcagaagcta ttgaagctga gggagccaca gctcctctga cagagttact tcactctagg
     2881 aatgaaggtg tggcgacata tgcagctgct gttttgttcc gaatgtctga ggacaagcca
     2941 caagattaca agaaacggct ttcagttgag ctgaccagct ctctcttcag aacagagcca
     3001 atggcttgga atgagactgc tgatcttgga cttgatattg gtgcccaggg agaacccctt
     3061 ggatatcgcc aggatgatcc tagctatcgt tcttttcact ctggtggata tggccaggat
     3121 gccttgggta tggaccccat gatggaacat gagatgggtg gccaccaccc tggtgctgac
     3181 tatccagttg atgggctgcc agatctgggg catgcccagg acctcatgga tgggctgcct
     3241 ccaggtgaca gcaatcagct ggcctggttt gatactgacc tgtaaggatc cactagtaac
     3301 ggccgccagt gtgctggaat tctgcagata tccatcacac tggcggccgc tcgagcatgc
     3361 atctagaggg ccctattcta tagtgtcacc taaatgctag agctcgctga tcagcctcga
     3421 ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc
     3481 tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc
     3541 tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt
     3601 gggaagacaa tagcaggcat gctggggatg cggtgggctc tatggcttct gaggcggaaa
     3661 gaaccagctg gggctctagg gggtatcccc acgcgccctg tagcggcgca ttaagcgcgg
     3721 cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg ctacacttgc cagcgcccta gcgcccgctc
     3781 ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca cgttcgccgg ctttccccgt caagctctaa
     3841 atcggggcat ccctttaggg ttccgattta gtgctttacg gcacctcgac cccaaaaaac
     3901 ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc catcgccctg atagacggtt tttcgccctt
     3961 tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg gactcttgtt ccaaactgga acaacactca
     4021 accctatctc ggtctattct tttgatttat aagggatttt ggggatttcg gcctattggt
     4081 taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta acgcgaatta attctgtgga atgtgtgtca
     4141 gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc aggcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc
     4201 tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc
     4261 aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc
     4321 ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt
     4381 atgcagaggc cgaggccgcc tctgcctctg agctattcca gaagtagtga ggaggctttt
     4441 ttggaggcct aggcttttgc aaaaagctcc cgggagcttg tatatccatt ttcggatctg
     4501 atcaagagac aggatgagga tcgtttcgca tgattgaaca agatggattg cacgcaggtt
     4561 ctccggccgc ttgggtggag aggctattcg gctatgactg ggcacaacag acaatcggct
     4621 gctctgatgc cgccgtgttc cggctgtcag cgcaggggcg cccggttctt tttgtcaaga
     4681 ccgacctgtc cggtgccctg aatgaactgc aggacgaggc agcgcggcta tcgtggctgg
     4741 ccacgacggg cgttccttgc gcagctgtgc tcgacgttgt cactgaagcg ggaagggact
     4801 ggctgctatt gggcgaagtg ccggggcagg atctcctgtc atctcacctt gctcctgccg
     4861 agaaagtatc catcatggct gatgcaatgc ggcggctgca tacgcttgat ccggctacct
     4921 gcccattcga ccaccaagcg aaacatcgca tcgagcgagc acgtactcgg atggaagccg
     4981 gtcttgtcga tcaggatgat ctggacgaag agcatcaggg gctcgcgcca gccgaactgt
     5041 tcgccaggct caaggcgcgc atgcccgacg gcgaggatct cgtcgtgacc catggcgatg
     5101 cctgcttgcc gaatatcatg gtggaaaatg gccgcttttc tggattcatc gactgtggcc
     5161 ggctgggtgt ggcggaccgc tatcaggaca tagcgttggc tacccgtgat attgctgaag
     5221 agcttggcgg cgaatgggct gaccgcttcc tcgtgcttta cggtatcgcc gctcccgatt
     5281 cgcagcgcat cgccttctat cgccttcttg acgagttctt ctgagcggga ctctggggtt
     5341 cgaaatgacc gaccaagcga cgcccaacct gccatcacga gatttcgatt ccaccgccgc
     5401 cttctatgaa aggttgggct tcggaatcgt tttccgggac gccggctgga tgatcctcca
     5461 gcgcggggat ctcatgctgg agttcttcgc ccaccccaac ttgtttattg cagcttataa
     5521 tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca
     5581 ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttat catgtctgta taccgtcgac
     5641 ctctagctag agcttggcgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc
     5701 gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta
     5761 atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa
     5821 cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat
     5881 tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg
     5941 agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc
     6001 aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt
     6061 gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag
     6121 tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc
     6181 cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc
     6241 ttcgggaagc gtggcgcttt ctcaatgctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt
     6301 cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt
     6361 atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc
     6421 agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa
     6481 gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa
     6541 gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg
     6601 tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga
     6661 agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg
     6721 gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg
     6781 aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt
     6841 aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact
     6901 ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat
     6961 gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg
     7021 aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg
     7081 ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat
     7141 tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc
     7201 ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt
     7261 cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc
     7321 agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga
     7381 gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc
     7441 gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa
     7501 acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta
     7561 acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg
     7621 agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg
     7681 aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat
     7741 gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt
     7801 tccccgaaaa gtgccacctg acgtc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1369/pEGFP-SMG5人源基因质粒

P1370/pEGFP-TARBP2人源基因质粒

P1377/pEGFP-DIS3人源基因质粒

P1378/pEGFP-SAMD4A人源基因质粒

P1379/pEGFP-DNMT3A人源基因质粒

P1380/pEGFP-ARID5A人源基因质粒

P1381/pEGFP-RC3H1人源基因质粒

P1382/pEGFP-SMG6人源基因质粒

P1389/pEGFP-RC3H2人源基因质粒

P1392/pEGFP-SMG7人源基因质粒

P1571/pEGFP-ADRB2人源基因质粒