pECMV-3×FLAG-CCL2人源基因质粒

基本信息
名称：pECMV-3×FLAG-CCL2人源基因质粒
别称: HC11;MCAF;MCP1;MCP-1;SCYA2;GDCF-2;SM
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
   pECMV-3×FLAG-CCL2是一个人源基因哺乳表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5752 bp ds-DNA     circular SYN 21-JAN-2018
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5752
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        235..614
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        615..818
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        863..881
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     regulatory      913..922
                     /regulatory_class="other"
                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                     of translation (Kozak, 1987)"
     CDS             922..987
                     /codon_start=1
                     /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
                     enterokinase cleavage site"
                     /label=3xFLAG
                     /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
     CDS             1009..1308
                     /codon_start=1
                     /label=CCL2
                     /translation="MKVSAALLCLLLIAATFIPQGLAQPDAINAPVTCCYNFTNRKISV
                     QRLASYRRITSSKCPKEAVIFKTIVAKEICADPKQKWVQDSMDHLDKQTQTPKT"
     polyA_signal    1352..1576
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      1622..2050
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        2064..2393
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     CDS             2460..3254
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=Neo
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    3428..3549
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(4000..4585)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(4756..5616)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(5617..5721)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
       61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
      121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
      181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
      241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
      301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
      361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
      421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
      481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
      541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
      601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
      661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
      721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
      781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
      841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
      901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
      961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccgagc tcggatccat gaaagtctct
     1021 gccgcccttc tgtgcctgct gctcatagca gccaccttca ttccccaagg gctcgctcag
     1081 ccagatgcaa tcaatgcccc agtcacctgc tgttataact tcaccaatag gaagatctca
     1141 gtgcagaggc tcgcgagcta tagaagaatc accagcagca agtgtcccaa agaagctgtg
     1201 atcttcaaga ccattgtggc caaggagatc tgtgctgacc ccaagcagaa gtgggttcag
     1261 gattccatgg accacctgga caagcaaacc caaactccga agacttaact cgagtctaga
     1321 gggcccgttt aaacccgctg atcagcctcg actgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt
     1381 gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc
     1441 taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt
     1501 ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca tgctggggat
     1561 gcggtgggct ctatggcttc tgaggcggaa agaaccagct ggggctctag ggggtatccc
     1621 cacgcgccct gtagcggcgc attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg cagcgtgacc
     1681 gctacacttg ccagcgccct agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc ctttctcgcc
     1741 acgttcgccg gctttccccg tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg gttccgattt
     1801 agtgctttac ggcacctcga ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc acgtagtggg
     1861 ccatcgccct gatagacggt ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt ctttaatagt
     1921 ggactcttgt tccaaactgg aacaacactc aaccctatct cggtctattc ttttgattta
     1981 taagggattt tgccgatttc ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta acaaaaattt
     2041 aacgcgaatt aattctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc
     2101 cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt
     2161 ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca
     2221 tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc
     2281 cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tctgcctctg
     2341 agctattcca gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaaaagctcc
     2401 cgggagcttg tatatccatt ttcggatctg atcaagagac aggatgagga tcgtttcgca
     2461 tgattgaaca agatggattg cacgcaggtt ctccggccgc ttgggtggag aggctattcg
     2521 gctatgactg ggcacaacag acaatcggct gctctgatgc cgccgtgttc cggctgtcag
     2581 cgcaggggcg cccggttctt tttgtcaaga ccgacctgtc cggtgccctg aatgaactgc
     2641 aggacgaggc agcgcggcta tcgtggctgg ccacgacggg cgttccttgc gcagctgtgc
     2701 tcgacgttgt cactgaagcg ggaagggact ggctgctatt gggcgaagtg ccggggcagg
     2761 atctcctgtc atctcacctt gctcctgccg agaaagtatc catcatggct gatgcaatgc
     2821 ggcggctgca tacgcttgat ccggctacct gcccattcga ccaccaagcg aaacatcgca
     2881 tcgagcgagc acgtactcgg atggaagccg gtcttgtcga tcaggatgat ctggacgaag
     2941 agcatcaggg gctcgcgcca gccgaactgt tcgccaggct caaggcgcgc atgcccgacg
     3001 gcgaggatct cgtcgtgacc catggcgatg cctgcttgcc gaatatcatg gtggaaaatg
     3061 gccgcttttc tggattcatc gactgtggcc ggctgggtgt ggcggaccgc tatcaggaca
     3121 tagcgttggc tacccgtgat attgctgaag agcttggcgg cgaatgggct gaccgcttcc
     3181 tcgtgcttta cggtatcgcc gctcccgatt cgcagcgcat cgccttctat cgccttcttg
     3241 acgagttctt ctgagcggga ctctggggtt cgaaatgacc gaccaagcga cgcccaacct
     3301 gccatcacga gatttcgatt ccaccgccgc cttctatgaa aggttgggct tcggaatcgt
     3361 tttccgggac gccggctgga tgatcctcca gcgcggggat ctcatgctgg agttcttcgc
     3421 ccaccccaac ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa
     3481 tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa
     3541 tgtatcttat catgtctgta taccgtcgac ctctagctag agcttggcgt aatcatggtc
     3601 atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg
     3661 aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc taactcacat taattgcgtt
     3721 gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg
     3781 ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga
     3841 ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat
     3901 acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca
     3961 aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc
     4021 tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata
     4081 aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc
     4141 gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc
     4201 acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga
     4261 accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc
     4321 ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag
     4381 gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag
     4441 aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag
     4501 ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtttt tttgtttgca agcagcagat
     4561 tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc
     4621 tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt
     4681 cacctagatc cttttaaatt aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta tatatgagta
     4741 aacttggtct gacagttacc aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct
     4801 atttcgttca tccatagttg cctgactccc cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg
     4861 cttaccatct ggccccagtg ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac cggctccaga
     4921 tttatcagca ataaaccagc cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt
     4981 atccgcctcc atccagtcta ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta gttcgccagt
     5041 taatagtttg cgcaacgttg ttgccattgc tacaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt
     5101 tggtatggct tcattcagct ccggttccca acgatcaagg cgagttacat gatcccccat
     5161 gttgtgcaaa aaagcggtta gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc
     5221 cgcagtgtta tcactcatgg ttatggcagc actgcataat tctcttactg tcatgccatc
     5281 cgtaagatgc ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat
     5341 gcggcgaccg agttgctctt gcccggcgtc aatacgggat aataccgcgc cacatagcag
     5401 aactttaaaa gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct caaggatctt
     5461 accgctgttg agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc
     5521 ttttactttc accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa
     5581 gggaataagg gcgacacgga aatgttgaat actcatactc ttcctttttc aatattattg
     5641 aagcatttat cagggttatt gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa
     5701 taaacaaata ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4145/pECMV-3×FLAG-GJB2人源基因质粒

P4146/pECMV-3×FLAG-MYOZ1人源基因质粒

P4147/pECMV-3×FLAG-THAP10人源基因质粒

P4148/pECMV-3×FLAG-TM2D1人源基因质粒

P4149/pECMV-3×FLAG-TMEM125人源基因质粒

P4150/pECMV-3×FLAG-TWSG1人源基因质粒

P4151/pECMV-3×FLAG-UBE2U人源基因质粒

P4152/pECMV-3×FLAG-UBTD1人源基因质粒

P4153/pECMV-3×FLAG-VNN2(2同义突变）人源基因质粒

P4154/pECMV-3×FLAG-LYN(1同义突变）人源基因质粒