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- 上海
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- 2026年01月21日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#86076;MEL;RAB8
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：EGFP-Rab8a-QL人源基因质粒
别称: Plasmid#86076;MEL;RAB8
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5331 bp ds-DNA circular SYN 27-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5331)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 27, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5331
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 613..1329
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
misc_feature 1369..1989
/label=Rab8a-QL
polyA_signal 2119..2240
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2247..2702)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2729..2833
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 2835..3192
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3043..3178
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3227..4021
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 4253..4300
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 4629..5217
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg
661 gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc
721 gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg
781 ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc
841 gaccacatga agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag
901 cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag
961 ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac
1021 atcctggggc acaagctgga gtacaactac aacagccaca acgtctatat catggccgac
1081 aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc
1141 gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg
1201 cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc
1261 gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga tcactctcgg catggacgag
1321 ctgtacaagt ccggccggac tcagatctcg agctcaagct tcgaattcgc gaagacctac
1381 gattacctgt tcaagctgct gctgatcggg gactcggggg tggggaagac ctgtgtcctg
1441 ttccgcttct ccgaggacgc cttcaactcc acttttatct ccaccatagg aattgacttt
1501 aaaattagga ccatagagct cgatggcaag agaattaaac tgcagatatg ggacacagcc
1561 ggtctggaac ggtttcggac gatcacaacg gcctactaca ggggtgcaat gggcatcatg
1621 ctggtctacg acatcaccaa cgagaagtcc ttcgacaaca tccggaactg gattcgcaac
1681 attgaggagc acgcctctgc agacgtcgaa aagatgatac tcgggaacaa gtgtgatgtg
1741 aatgacaaga gacaagtttc caaggaacgg ggagaaaagc tggccctcga ctatggaatc
1801 aagttcatgg agaccagcgc gaaggccaac atcaatgtgg aaaatgcatt tttcactctc
1861 gccagagata tcaaagcaaa aatggacaaa aaattggaag gcaacagccc ccaggggagc
1921 aaccagggag tcaaaatcac accggaccag cagaagagga gcagcttttt ccgatgtgtt
1981 cttctgtagg gatccaccgg atctagataa ctgatcataa tcagccatac cacatttgta
2041 gaggttttac ttgctttaaa aaacctccca cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg
2101 aatgcaattg ttgttgttaa cttgtttatt gcagcttata atggttacaa ataaagcaat
2161 agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc
2221 aaactcatca atgtatctta acgcgtaaat tgtaagcgtt aatattttgt taaaattcgc
2281 gttaaatttt tgttaaatca gctcattttt taaccaatag gccgaaatcg gcaaaatccc
2341 ttataaatca aaagaataga ccgagatagg gttgagtgtt gttccagttt ggaacaagag
2401 tccactatta aagaacgtgg actccaacgt caaagggcga aaaaccgtct atcagggcga
2461 tggcccacta cgtgaaccat caccctaatc aagttttttg gggtcgaggt gccgtaaagc
2521 actaaatcgg aaccctaaag ggagcccccg atttagagct tgacggggaa agccggcgaa
2581 cgtggcgaga aaggaaggga agaaagcgaa aggagcgggc gctagggcgc tggcaagtgt
2641 agcggtcacg ctgcgcgtaa ccaccacacc cgccgcgctt aatgcgccgc tacagggcgc
2701 gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat
2761 acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg
2821 aaaaaggaag agtcctgagg cggaaagaac cagctgtgga atgtgtgtca gttagggtgt
2881 ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca
2941 gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat
3001 ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg
3061 cccagttccg cccattctcc gccccatggc tgactaattt tttttattta tgcagaggcc
3121 gaggccgcct cggcctctga gctattccag aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta
3181 ggcttttgca aagatcgatc aagagacagg atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga
3241 tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc
3301 acaacagaca atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc
3361 ggttcttttt gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat gaactgcaag acgaggcagc
3421 gcggctatcg tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac
3481 tgaagcggga agggactggc tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc
3541 tcaccttgct cctgccgaga aagtatccat catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac
3601 gcttgatccg gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg
3661 tactcggatg gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct
3721 cgcgccagcc gaactgttcg ccaggctcaa ggcgagcatg cccgacggcg aggatctcgt
3781 cgtgacccat ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg
3841 attcatcgac tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag cgttggctac
3901 ccgtgatatt gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg
3961 tatcgccgct cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg agttcttctg
4021 agcgggactc tggggttcga aatgaccgac caagcgacgc ccaacctgcc atcacgagat
4081 ttcgattcca ccgccgcctt ctatgaaagg ttgggcttcg gaatcgtttt ccgggacgcc
4141 ggctggatga tcctccagcg cggggatctc atgctggagt tcttcgccca ccctaggggg
4201 aggctaactg aaacacggaa ggagacaata ccggaaggaa cccgcgctat gacggcaata
4261 aaaagacaga ataaaacgca cggtgttggg tcgtttgttc ataaacgcgg ggttcggtcc
4321 cagggctggc actctgtcga taccccaccg agaccccatt ggggccaata cgcccgcgtt
4381 tcttcctttt ccccacccca ccccccaagt tcgggtgaag gcccagggct cgcagccaac
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4501 aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc
4561 aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa
4621 ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca
4681 ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta
4741 actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc
4801 caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca
4861 gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta
4921 ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag
4981 cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt
5041 cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc
5101 acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac
5161 ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac
5221 gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc
5281 tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta ccgccatgca t
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：EGFP-Rab8a-QL人源基因质粒
别称: Plasmid#86076;MEL;RAB8
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5331 bp ds-DNA circular SYN 27-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5331)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 27, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5331
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 613..1329
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/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="mammalian codon-optimized"
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KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
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misc_feature 1369..1989
/label=Rab8a-QL
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/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2247..2702)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2729..2833
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 2835..3192
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3043..3178
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3227..4021
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
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(Geneticin(R))"
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GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
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polyA_signal 4253..4300
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/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 4629..5217
/direction=RIGHT
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/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg
661 gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc
721 gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg
781 ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc
841 gaccacatga agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag
901 cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag
961 ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac
1021 atcctggggc acaagctgga gtacaactac aacagccaca acgtctatat catggccgac
1081 aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc
1141 gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg
1201 cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc
1261 gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga tcactctcgg catggacgag
1321 ctgtacaagt ccggccggac tcagatctcg agctcaagct tcgaattcgc gaagacctac
1381 gattacctgt tcaagctgct gctgatcggg gactcggggg tggggaagac ctgtgtcctg
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1561 ggtctggaac ggtttcggac gatcacaacg gcctactaca ggggtgcaat gggcatcatg
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1741 aatgacaaga gacaagtttc caaggaacgg ggagaaaagc tggccctcga ctatggaatc
1801 aagttcatgg agaccagcgc gaaggccaac atcaatgtgg aaaatgcatt tttcactctc
1861 gccagagata tcaaagcaaa aatggacaaa aaattggaag gcaacagccc ccaggggagc
1921 aaccagggag tcaaaatcac accggaccag cagaagagga gcagcttttt ccgatgtgtt
1981 cttctgtagg gatccaccgg atctagataa ctgatcataa tcagccatac cacatttgta
2041 gaggttttac ttgctttaaa aaacctccca cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg
2101 aatgcaattg ttgttgttaa cttgtttatt gcagcttata atggttacaa ataaagcaat
2161 agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc
2221 aaactcatca atgtatctta acgcgtaaat tgtaagcgtt aatattttgt taaaattcgc
2281 gttaaatttt tgttaaatca gctcattttt taaccaatag gccgaaatcg gcaaaatccc
2341 ttataaatca aaagaataga ccgagatagg gttgagtgtt gttccagttt ggaacaagag
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2761 acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg
2821 aaaaaggaag agtcctgagg cggaaagaac cagctgtgga atgtgtgtca gttagggtgt
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2941 gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat
3001 ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg
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3121 gaggccgcct cggcctctga gctattccag aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta
3181 ggcttttgca aagatcgatc aagagacagg atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga
3241 tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0576/pEGFP-CagA人源基因质粒 |
| P0581/pEGFP-IL10人源基因质粒 |
| P0590/pCDNA3.1-V5-FLAG-USP22人源基因质粒 |
| P0512/FUW-tetO-hKLF4人源基因质粒 |
| P0513/pMXs-hc-MYC人源基因质粒 |
| P0514/FUW-tetO-hSOX2人源基因质粒 |
| P0515/pMXs-hKLF4人源基因质粒 |
| P0516/pMXs-hOCT3/4人源基因质粒 |
| P0517/OKSIM人源基因质粒 |
| P0518/FUW-tetO-hOCT4人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入
plenti-CMV-EGFP-LC3 质粒 plenti-CMV-mRFP-EGFP-LC3 质粒 2. LC3 细胞自噬病毒 plenti-CMV-EGFP-LC3慢病毒 plenti-CMV-mRFP-EGFP-LC3 慢病毒 plenti-CMV-EGFP-LC3 腺病毒 plenti-CMV-mRFP-EGFP-LC3 腺病毒 文献支持（部分） 1. Autophagy 10:10, 1-13; October 2014 Endoplasmic
非病毒载体介导的基因治疗有许多优点，但就目前大多数表达体系而言普遍存在外源基因表达水平低而短暂等问题为了使外源基因稳定持续表达，必须对质粒DNA 进行改造。附着体质粒载体(episomal vector)可以使外源基因以附着体形式复制，分离到子代细胞，从而使基因高效持续表达，是种新型的非病毒表达载体 。 我们构建了以EB病毒(Epstein Barr virus，EBV)复制子(EBV replicon，EBVR)为基础的附着体质粒载体，并将报告基因增强型绿色
EGFP-Rab8a-QL人源基因质粒
￥100 - 1000
