pIkB-EGFP人源基因质粒

基本信息
名称：pIkB-EGFP人源基因质粒
别称: NM_020529.2;IKBA;MAD-3;NFKBI
启动子：CMV
复制子: pUC
质粒大小：6630bp
质粒标签：N-HA
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
  pIkB-EGFP(NM_020529.2)是一个人源基因哺乳细胞过表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5675 bp ds-DNA     circular SYN 22-DEC-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5675
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        61..364
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        365..568
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     misc_feature    655..1605
                     /label=IkB（NFKBIA）
     CDS             1621..2340
                     /codon_start=1
                     /product="enhanced GFP"
                     /label=EGFP
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
                     VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
                     EFVTAAGITLGMDELYK"
     polyA_signal    2463..2584
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(2591..3046)
                     /direction=LEFT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        3073..3177
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     promoter        3179..3536
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      3387..3522
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             3571..4365
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=NeoR/KanR
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    4597..4644
                     /label=HSV TK poly(A) signal
                     /note="herpes simplex virus thymidine kinase 
                     polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
     rep_origin      4973..5561
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
       61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
      121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
      181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
      241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
      301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
      361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
      421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
      481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
      541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
      601 ccggactcag atctcgagct caagcttcga attctgcagt cgacggtacc gcggatgttc
      661 caggcggccg agcgccccca ggagtgggcc atggagggcc cccgcgacgg gctgaagaag
      721 gagcggctac tggacgaccg ccacgacagc ggcctggact ccatgaaaga cgaggagtac
      781 gagcagatgg tcaaggagct gcaggagatc cgcctcgagc cgcaggaggt gccgcgcggc
      841 tcggagccct ggaagcagca gctcaccgag gacggggact cgttcctgca cttggccatc
      901 atccatgaag aaaaggcact gaccatggaa gtgatccgcc aggtgaaggg agacctggcc
      961 ttcctcaact tccagaacaa cctgcagcag actccactcc acttggctgt gatcaccaac
     1021 cagccagaaa ttgctgaggc acttctggga gctggctgtg atcctgagct ccgagacttt
     1081 cgaggaaata cccccctaca ccttgcctgt gagcagggct gcctggccag cgtgggagtc
     1141 ctgactcagt cctgcaccac cccgcacctc cactccatcc tgaaggctac caactacaat
     1201 ggccacacgt gtctacactt agcctctatc catggctacc tgggcatcgt ggagcttttg
     1261 gtgtccttgg gtgctgatgt caatgctcag gagccctgta atggccggac tgcccttcac
     1321 ctcgcagtgg acctgcaaaa tcctgacctg gtgtcactcc tgttgaagtg tggggctgat
     1381 gtcaacagag ttacctacca gggctattct ccctaccagc tcacctgggg ccgcccaagc
     1441 acccggatac agcagcagct gggccagctg acactagaaa accttcagat gctgccagag
     1501 agtgaggatg aggagagcta tgacacagag tcagagttca cggagttcac agaggacgag
     1561 ctgccctatg atgactgtgt gtttggaggc cagcgtctga cgttaggatc catcgccacc
     1621 atggtgagca agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac
     1681 ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac
     1741 ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc
     1801 ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag
     1861 cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc
     1921 ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg
     1981 gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac
     2041 aagctggagt acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac
     2101 ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc
     2161 gaccactacc agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac
     2221 tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc
     2281 ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaagtaa
     2341 agcggccgcg actctagatc ataatcagcc ataccacatt tgtagaggtt ttacttgctt
     2401 taaaaaacct cccacacctc cccctgaacc tgaaacataa aatgaatgca attgttgttg
     2461 ttaacttgtt tattgcagct tataatggtt acaaataaag caatagcatc acaaatttca
     2521 caaataaagc atttttttca ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat
     2581 cttaaggcgt aaattgtaag cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa
     2641 atcagctcat tttttaacca ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa
     2701 tagaccgaga tagggttgag tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac
     2761 gtggactcca acgtcaaagg gcgaaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa
     2821 ccatcaccct aatcaagttt tttggggtcg aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct
     2881 aaagggagcc cccgatttag agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa
     2941 gggaagaaag cgaaaggagc gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc
     3001 gtaaccacca cacccgccgc gcttaatgcg ccgctacagg gcgcgtcagg tggcactttt
     3061 cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat
     3121 ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtcct
     3181 gaggcggaaa gaaccagctg tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct
     3241 ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa
     3301 agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa
     3361 ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt
     3421 ctccgcccca tggctgacta atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct
     3481 ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaagatc
     3541 gatcaagaga caggatgagg atcgtttcgc atgattgaac aagatggatt gcacgcaggt
     3601 tctccggccg cttgggtgga gaggctattc ggctatgact gggcacaaca gacaatcggc
     3661 tgctctgatg ccgccgtgtt ccggctgtca gcgcaggggc gcccggttct ttttgtcaag
     3721 accgacctgt ccggtgccct gaatgaactg caagacgagg cagcgcggct atcgtggctg
     3781 gccacgacgg gcgttccttg cgcagctgtg ctcgacgttg tcactgaagc gggaagggac
     3841 tggctgctat tgggcgaagt gccggggcag gatctcctgt catctcacct tgctcctgcc
     3901 gagaaagtat ccatcatggc tgatgcaatg cggcggctgc atacgcttga tccggctacc
     3961 tgcccattcg accaccaagc gaaacatcgc atcgagcgag cacgtactcg gatggaagcc
     4021 ggtcttgtcg atcaggatga tctggacgaa gagcatcagg ggctcgcgcc agccgaactg
     4081 ttcgccaggc tcaaggcgag catgcccgac ggcgaggatc tcgtcgtgac ccatggcgat
     4141 gcctgcttgc cgaatatcat ggtggaaaat ggccgctttt ctggattcat cgactgtggc
     4201 cggctgggtg tggcggaccg ctatcaggac atagcgttgg ctacccgtga tattgctgaa
     4261 gagcttggcg gcgaatgggc tgaccgcttc ctcgtgcttt acggtatcgc cgctcccgat
     4321 tcgcagcgca tcgccttcta tcgccttctt gacgagttct tctgagcggg actctggggt
     4381 tcgaaatgac cgaccaagcg acgcccaacc tgccatcacg agatttcgat tccaccgccg
     4441 ccttctatga aaggttgggc ttcggaatcg ttttccggga cgccggctgg atgatcctcc
     4501 agcgcgggga tctcatgctg gagttcttcg cccaccctag ggggaggcta actgaaacac
     4561 ggaaggagac aataccggaa ggaacccgcg ctatgacggc aataaaaaga cagaataaaa
     4621 cgcacggtgt tgggtcgttt gttcataaac gcggggttcg gtcccagggc tggcactctg
     4681 tcgatacccc accgagaccc cattggggcc aatacgcccg cgtttcttcc ttttccccac
     4741 cccacccccc aagttcgggt gaaggcccag ggctcgcagc caacgtcggg gcggcaggcc
     4801 ctgccatagc ctcaggttac tcatatatac tttagattga tttaaaactt catttttaat
     4861 ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg
     4921 agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc
     4981 ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg
     5041 tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag
     5101 cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact
     5161 ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct gctgccagtg
     5221 gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact caagacgata gttaccggat aaggcgcagc
     5281 ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg
     5341 aactgagata cctacagcgt gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg
     5401 cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag
     5461 ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc
     5521 gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct
     5581 ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc
     5641 ctgattctgt ggataaccgt attaccgcca tgcat
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4241/pCMV-SPORT6-NECAB2人源基因质粒

P4242/pCMV-SPORT6-INPP1人源基因质粒

P4243/pCMV-SPORT6-UFSP2人源基因质粒

P4244/pCMV-SPORT6-BPGM人源基因质粒

P4245/pCMV-SPORT6-TRIM31（2同义突变1点突变）人源基因质粒

P4246/pCMV-SPORT6-HTATIP2人源基因质粒

P4247/pCMV-SPORT6-CALB2人源基因质粒

P4248/pCMV-SPORT6-CARD14人源基因质粒

P4249/pCMV-SPORT6-SLC17A5(1同义突变）人源基因质粒

P4250/pCMV-SPORT6-TRMT1人源基因质粒