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- Xybio
- 上海
- P1339
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid #27002;NEDD4-2 NEDD4.2 PVNH7
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCI HA NEDD4人源基因质粒
别称: Plasmid #27002;NEDD4-2 NEDD4.2 PVNH7
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：基因CDS
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3817/pCMV-SPORT6-GDAP1L1人源基因质粒 |
| P3818/pCMV-SPORT6-ARNTL2人源基因质粒 |
| P3821/pCMV-SPORT6-FAM184A人源基因质粒 |
| P3822/pCMV-SPORT6-GALNT15（1同义突变） |
| P3823/pCMV-SPORT6-ZC2HC1A人源基因质粒 |
| P0637/pCR4-MME人源基因质粒 |
| P0645/pCR4-IL12A人源基因质粒 |
| P0646/pCR4-PKD2人源基因质粒 |
| P4957/pCR-XL-TOPO-EFCAB4B人源基因质粒 |
| P0647/pDNR-Dual-IL12B人源基因质粒 |
| P4822/pDNR-LIB-PABPN1（2点突变）人源基因质粒 |
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核酸疫苗（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｖａｃｃｉｎｅ），也叫基因疫苗（ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｃｃｉｎｅ）、核酸免疫（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）、ＤＮＡ免疫（ＤＮＡ ｂａｓｅｄ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ），它是利用基因重组技术直接将编码某种抗原蛋白的外源基因（ＤＮＡ）与质粒重组后，直接导入动物细胞内，并通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。核酸疫苗包括ＤＮＡ疫苗（ＤＮＡ ｖａｃｃｉｎｅ）和ＲＮＡ疫苗（ＲＮＡ
因子,使TH2型反应向TH1型反应转变。因此称之为“免疫刺激DNA序列”(ISS)。ISS的精确序列及在质粒中所处位置对DNA免疫都有影响。含CpG的免疫刺激序列不仅能增强DNA的免疫,还能直接增强蛋白质的免疫。1998年,Lee等对CpGDNA的佐剂效应作深入的研究可证实这点：当用95ug的质粒载体pCIN(含ISS)和5ug表达流感病毒凝集素(HA)的质粒pCIN HA共注射小鼠后,得到的CTL效应和T细胞增殖率比单注射5ug或100ug的pCINHA高,特异性IgG与注 射100ug
