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- Xybio
- 上海
- P1314
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#19778;POU5F1;OCT3OCT4OTF-3OT
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：FU-tet-o-hOct4人源基因质粒
别称: Plasmid#19778;POU5F1;OCT3OCT4OTF-3OT
启动子：minimal CMV promoter
复制子: pUC
终止子: WPRE
质粒分类: 基因文库质粒；人源基因质粒；人源真核质粒
质粒大小：9471bp
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37度
| 表达宿主: | 293T等哺乳细胞 |
|---|---|
| 培养条件: | 37℃，5%CO2 |
| 诱导方式: | 四环素调控 |
| 5'测序引物: | miniCMV-F（GCGTGTACGGTGGGAGGCC） |
| 3'测序引物: | WPRE-R（CATAGCGTAAAAGGAGCAACA） |
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pFU-tet-o-hOct4质粒是一个人源Oct4基因的哺乳细胞慢病毒过表达质粒，minimal CMV promoter启动Oct4目的基因的表达。该质粒可作为过表达质粒直接转染哺乳细胞，也可包装成慢病毒侵染细胞。质粒本身带有Zeo筛选标记，可用博来霉素筛选转染后的细胞得到稳转细胞系。基因NCBI信息：Homo sapiens POU class 5 homeobox 1 (POU5F1), transcript variant 1, mRNA；NCBI Reference Sequence: NM_002701.5.
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3723/pCMV-SPORT6-ATAD2（1-2720bp）人源基因质粒 |
| P3724/pCMV-SPORT6-FAM129B人源基因质粒 |
| P3725/pCMV-SPORT6-VASH1人源基因质粒 |
| P3726/pCMV-SPORT6-ATF4人源基因质粒 |
| P3727/pCMV-SPORT6-IPO13（1同义突变1点突变）人源基因质粒 |
| P3728/pCMV-SPORT6-TMEFF2人源基因质粒 |
| P3729/pCMV-SPORT6-DOK5人源基因质粒 |
| P3730/pCMV-SPORT6-VIRMA（1842-5439bp1同义突变）人源基因质粒 |
| P3731/pCMV-SPORT6-ECT2人源基因质粒 |
| P3732/pCMV-SPORT6-TINAGL1（29-1089bp）人源基因质粒 |
| P3820/pCMV-SPORT6-SEC23B人源基因质粒 |
| P3796/pCMV-SPORT6-HSD17B8人源基因质粒 |
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文献和实验说起提取质粒，想必是做分子生物学的搬砖工们每天的常规工作。随着各大公司开发出各种质粒提取 kit，为苦逼的生物狗带来了福音—试剂再也不用自己配了，提取步骤再也不用那么繁琐了。但，你先别着急高兴，久而久之，很多刚进实验室的小白师弟师妹再也不懂得背后的原理：质粒提取出来掺杂有蛋白或者基因组 DNA 怎么办？待转染或酶切的质粒被有机溶剂污染了怎么办？且听我一一道来。质粒是独立于基因组外的小型环状 DNA 分子，能够自我复制，在分子克隆中是最常用的外源基因载体。在自然状态下，质粒常存在于细菌中，携带
摘要： 可以在蛋白质水平和目的基因功能水平等各个层次鉴定重组子。可以在 蛋白质 水平和目的基因功能水平等各个层次鉴定重组子.基因水平的鉴定有酶切鉴定、 PCR 鉴定、核酸杂交和基因序列分析等.蛋白质水平鉴定有插入失活双 抗生素 对照筛选(例如 Tet r 和 Amp r )和插入失活 LacZ' 基因的蓝白斑筛选等.表达载体可进行插入方向鉴定和表达产物的免疫学和生物学活性鉴定.一般重组质粒
步骤 实验原理 1 双酶切（单位：μL） 管 核酸 buffer ddH2 O Hind III BamH I 1 15(AKP) 2 0 2 1 2 10(质粒)2 5 2 1 37℃酶解3小时
