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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
SEMAF;SEMAI;SEMACL1;M-SEMA-F
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pEF-hSEMA4C-Fc人源基因质粒
别称: SEMAF;SEMAI;SEMACL1;M-SEMA-F
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8696 bp ds-DNA circular SYN 26-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pEF-hSEMA4C-Fc
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8696)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 26, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8696
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 96..200
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 201..1061
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 1232..1820
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
promoter 2251..2469
/label=SV40 promoter
/note="SV40 early promoter"
rep_origin 2320..2455
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
promoter 2558..3736
/label=EF-1-alpha promoter
/note="strong constitutive promoter for human elongation
factor EF-1-alpha"
misc_feature 3808..5790
/label=hSEMA4C
misc_feature 5795..5817
/label=intron
misc_feature 5818..7068
/label=FC
misc_feature 5818..6155
/label=intron
misc_feature 6201..6318
/label=intron
misc_feature 6649..6745
/label=intron
rep_origin complement(8110..8490)
/direction=LEFT
/label=M13 ori
/note="M13 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata ataatggttt
61 cttagacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt
121 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat
181 aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt
241 ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg
301 ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga
361 tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc
421 tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac
481 actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg
541 gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca
601 acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg
661 gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg
721 acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg
781 gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag
841 ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg
901 gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct
961 cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac
1021 agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac caagtttact
1081 catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga
1141 tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt
1201 cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct
1261 gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc
1321 taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgtcc
1381 ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc
1441 tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg
1501 ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt
1561 cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg
1621 agcattgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg
1681 gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt
1741 atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag
1801 gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt
1861 gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta
1921 ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt
1981 cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc
2041 cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca
2101 acgcaattaa tgtgagttag ctcactcatt aggcacccca ggctttacac tttatgcttc
2161 cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg
2221 accatgatta cgccaagctt aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc
2281 aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca tcccgcccct aactccgccc
2341 agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag
2401 gccgcctcgg cctctgagct attccagaag tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggc
2461 ttttgcaaaa agctttgcaa agatggataa agttttaaac agagaggaat ctttgcagct
2521 aatggacctt ctaggtcttg aaaggagtgc ctcgtgaggc tccggtgccc gtcagtgggc
2581 agagcgcaca tcgcccacag tccccgagaa gttgggggga ggggtcggca attgaaccgg
2641 tgcctagaga aggtggcgcg gggtaaactg ggaaagtgat gtcgtgtact ggctccgcct
2701 ttttcccgag ggtgggggag aaccgtatat aagtgcagta gtcgccgtga acgttctttt
2761 tcgcaacggg tttgccgcca gaacacaggt aagtgccgtg tgtggttccc gcgggcctgg
2821 cctctttacg ggttatggcc cttgcgtgcc ttgaattact tccacctggc tgcagtacgt
2881 gattcttgat cccgagcttc gggttggaag tgggtgggag agttcgaggc cttgcgctta
2941 aggagcccct tcgcctcgtg cttgagttga ggcctggcct gggcgctggg gccgccgcgt
3001 gcgaatctgg tggcaccttc gcgcctgtct cgctgctttc gataagtctc tagccattta
3061 aaatttttga tgacctgctg cgacgctttt tttctggcaa gatagtcttg taaatgcggg
3121 ccaagatctg cacactggta tttcggtttt tggggccgcg ggcggcgacg gggcccgtgc
3181 gtcccagcgc acatgttcgg cgaggcgggg cctgcgagcg cggccaccga gaatcggacg
3241 ggggtagtct caagctggcc ggcctgctct ggtgcctggc ctcgcgccgc cgtgtatcgc
3301 cccgccctgg gcggcaaggc tggcccggtc ggcaccagtt gcgtgagcgg aaagatggcc
3361 gcttcccggc cctgctgcag ggagctcaaa atggaggacg cggcgctcgg gagagcgggc
3421 gggtgagtca cccacacaaa ggaaaagggc ctttccgtcc tcagccgtcg cttcatgtga
3481 ctccacggag taccgggcgc cgtccaggca cctcgattag ttctcgagct tttggagtac
3541 gtcgtcttta ggttgggggg aggggtttta tgcgatggag tttccccaca ctgagtgggt
3601 ggagactgaa gttaggccag cttggcactt gatgtaattc tccttggaat ttgccctttt
3661 tgagtttgga tcttggttca ttctcaagcc tcagacagtg gttcaaagtt tttttcttcc
3721 atttcaggtg tcgtgaggaa ttctctagag atccctcgac ctcgagatcc atcgggcccc
3781 ccctcgaggt cgactcgcct ctacctgatg gccccacact gggctgtctg gctgctggca
3841 gcaaggctgt ggggcctggg cattggggct gaggtgtggt ggaaccttgt gccgcgtaag
3901 acagtgtctt ctggggagct ggccacggta gtacggcggt tctcccagac cggcatccag
3961 gacttcctga cactgacgct gacggagccc actgggcttc tgtacgtggg cgcccgagag
4021 gccctgtttg ccttcagcat ggaggccctg gagctgcaag gagcgatctc ctgggaggcc
4081 cccgtggaga agaagactga gtgtatccag aaagggaaga acaaccagac cgagtgcttc
4141 aacttcatcc gcttcctgca gccctacaat gcctcccacc tgtacgtctg tggcacctac
4201 gccttccagc ccaagtgcac ctacgtcaac atgctcacct tcactttgga gcatggagag
4261 tttgaagatg ggaagggcaa gtgtccctat gacccagcta agggccatgc tggccttctt
4321 gtggatggtg agctgtactc ggccacactc aacaacttcc tgggcacgga acccattatc
4381 ctgcgtaaca tggggcccca ccactccatg aagacagagt acctggcctt ttggctcaac
4441 gaacctcact ttgtaggctc tgcctatgta cctgagagtg tgggcagctt cacgggggac
4501 gacgacaagg tctacttctt cttcagggag cgggcagtgg agtccgactg ctatgccgag
4561 caggtggtgg ctcgtgtggc ccgtgtctgc aagggcgata tggggggcgc acggaccctg
4621 cagaggaagt ggaccacgtt cctgaaggcg cggctggcat gctctgcccc gaactggcag
4681 ctctacttca accagctgca ggcgatgcac accctgcagg acacctcctg gcacaacacc
4741 accttctttg gggtttttca agcacagtgg ggtgacatgt acctgtcggc catctgtgag
4801 taccagttgg aagagatcca gcgggtgttt gagggcccct ataaggagta ccatgaggaa
4861 gcccagaagt gggaccgcta cactgaccct gtacccagcc ctcggcctgg ctcgtgcatt
4921 aacaactggc atcggcgcca cggctacacc agctccctgg agctacccga caacatcctc
4981 aacttcgtca agaagcaccc gctgatggag gagcaggtgg ggcctcggtg gagccgcccc
5041 ctgctcgtga agaagggcac caacttcacc cacctggtgg ccgaccgggt tacaggactt
5101 gatggagcca cctatacagt gctgttcatt ggcacaggag acggctggct gctcaaggct
5161 gtgagcctgg ggccctgggt tcacctgatt gaggagctgc agctgtttga ccaggagccc
5221 atgagaagcc tggtgctatc tcagagcaag aagctgctct ttgccggctc ccgctctcag
5281 ctggtgcagc tgcccgtggc cgactgcatg aagtatcgct cctgtgcaga ctgtgtcctc
5341 gcccgggacc cctattgcgc ctggagcgtc aacaccagcc gctgtgtggc cgtgggtggc
5401 cactctggat ctctactgat ccagcatgtg atgacctcgg acacttcagg catctgcaac
5461 ctccgtggca gtaagaaagt caggcccact cccaaaaaca tcacggtggt ggcgggcaca
5521 gacctggtgc tgccctgcca cctctcctcc aacttggccc atgcccgctg gacctttggg
5581 ggccgggacc tgcctgcgga acagcccggg tccttcctct acgatgcccg gctccaggcc
5641 ctggttgtga tggctgccca gccccgccat gccggggcct accactgctt ttcagaggag
5701 cagggggcgc ggctggctgc tgaaggctac cttgtggctg tcgtggcagg cccgtcggtg
5761 accttggagg cccgggcccc cctggaaaac caaagtaagt aggatccact agttctatcc
5821 tgcctggacg catcccggct atgcagtccc agtccagggc agcaaggcag gccccgtctg
5881 cctcttcacc cggaggcctc tgcccgcccc actcatgctc agggagaggg tcttctggct
5941 ttttccccag gctctgggca ggcacaggct aggtgcccct aacccaggcc ctgcacacaa
6001 aggggcaggt gctgggctca gacctgccaa gagccatatc cgggaggacc ctgcccctga
6061 cctaagccca ccccaaaggc caaactctcc actccctcag ctcggacacc ttctctcctc
6121 ccagattcca gtaactccca atcttctctc tgcagagccc aaatcttgtg acaaaactca
6181 cacatgccca ccgtgcccag gtaagccagc ccaggcctcg ccctccagct caaggcggga
6241 caggtgccct agagtagcct gcatccaggg acaggcccca gccgggtgct gacacgtcca
6301 cctccatctc ttcctcagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc
6361 caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg
6421 acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc
6481 ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg
6541 tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca
6601 acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggt gggacccgtg
6661 gggtgcgagg gccacatgga cagaggccgg ctcggcccac cctctgccct gagagtgacc
6721 gctgtaccaa cctctgtccc tacagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc
6781 ccatcccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc
6841 tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag
6901 accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctatagcaa gctcaccgtg
6961 gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg
7021 cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtccccgg gtaaatgagt gcgacggccg
7081 gcaagccccc gctccccggg ctctcgcggt cgcacgagga tgcttggcac gtaccccgtc
7141 tacatacttc ccaggcaccc agcatggaaa taaagcaccc accactgccc tagagcggcc
7201 gcgactctag agtgagggtc cccacctggg acccttgaga gtatcaggtc tcccacgtgg
7261 gagacaagaa atccctgttt aatatttaaa cagcagtgtt ccccatctgg gtccttgcac
7321 ccctcactct ggcctcagcc gactgcacag cggcccctgc atccccttgg ctgtgaggcc
7381 cctggacaag cagaggtggc cagagctggg aggcatggcc ctggggtccc acgaatttgc
7441 tggggaatct cgtttttctt cttaagactt ttgggacatg gtttgactcc cgaacatcac
7501 cgacgcgtct cctgtttttc tgggtggcct cgggacacct gccctgcccc cacgagggtc
7561 aggactgtga ctctttttag ggccaggcag gtgcctggac atttgccttg ctggacgggg
7621 actggggatg tgggagggag cagacaggag gaatcatgtc aggcctgtgt gtgaaaggaa
7681 gctccactgt caccctccac ctcttcaccc cccactcacc agtgtcccct ccactgtcac
7741 attgtaactg aacttcagga taataaagtg cttgcctcca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa
7801 aaaaaaaaaa aaaaaaaaag aattcactgg ccgtcgtttt acaacgtcgt gactgggaaa
7861 accctggcgt tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc ccctttcgcc agctggcgta
7921 atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt gcgcagcctg aatggcgaat
7981 ggcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc atctgtgcgg tatttcacac cgcaaaacgt
8041 taatattttg ttaaaattcg gtccacgctg gtttgcccca gcaggcgaaa atcctgtttg
8101 atggtggttc cgaaatcggc aaaatccctt ataaatcaaa agaatagccc gagatagggt
8161 tgagtgttgt tccagtttgg aacaagagtc cactattaaa gaacgtggac tccaacgtca
8221 aagggcgaaa aaccgtctat cagggcgatg gcccactacg tgaaccatca cccaaatcaa
8281 gttttttggg gtcgaggtgc cgtaaagcac taaatcggaa ccctaaaggg agcccccgat
8341 ttagagcttg acggggaaag ccggcgaacg tggcgagaaa ggaagggaag aaagcgaaag
8401 gagcgggcgc tagggcgctg gcaagtgtag cggtcacgct gcgcgtaacc accacacccg
8461 ccgcgcttaa tgcgccgcta cagggcgcgt actatggttg ctttgacgag catggtgcac
8521 tctcagtaca atctgctctg atgccgcata gttaagccag ccccgacacc cgccaacacc
8581 cgctgacgcg ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac
8641 cgtctccggg agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcga
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pEF-hSEMA4C-Fc人源基因质粒
别称: SEMAF;SEMAI;SEMACL1;M-SEMA-F
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8696 bp ds-DNA circular SYN 26-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pEF-hSEMA4C-Fc
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8696)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 26, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8696
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 96..200
/gene="bla"
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CDS 201..1061
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/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
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related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
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/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
promoter 2251..2469
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promoter 2558..3736
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factor EF-1-alpha"
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misc_feature 6201..6318
/label=intron
misc_feature 6649..6745
/label=intron
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indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata ataatggttt
61 cttagacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt
121 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat
181 aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt
241 ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg
301 ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga
361 tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc
421 tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac
481 actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg
541 gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca
601 acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg
661 gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg
721 acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg
781 gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag
841 ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg
901 gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct
961 cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac
1021 agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac caagtttact
1081 catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga
1141 tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt
1201 cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct
1261 gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc
1321 taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgtcc
1381 ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc
1441 tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg
1501 ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt
1561 cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg
1621 agcattgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg
1681 gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt
1741 atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag
1801 gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt
1861 gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta
1921 ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt
1981 cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc
2041 cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca
2101 acgcaattaa tgtgagttag ctcactcatt aggcacccca ggctttacac tttatgcttc
2161 cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg
2221 accatgatta cgccaagctt aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc
2281 aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca tcccgcccct aactccgccc
2341 agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag
2401 gccgcctcgg cctctgagct attccagaag tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggc
2461 ttttgcaaaa agctttgcaa agatggataa agttttaaac agagaggaat ctttgcagct
2521 aatggacctt ctaggtcttg aaaggagtgc ctcgtgaggc tccggtgccc gtcagtgggc
2581 agagcgcaca tcgcccacag tccccgagaa gttgggggga ggggtcggca attgaaccgg
2641 tgcctagaga aggtggcgcg gggtaaactg ggaaagtgat gtcgtgtact ggctccgcct
2701 ttttcccgag ggtgggggag aaccgtatat aagtgcagta gtcgccgtga acgttctttt
2761 tcgcaacggg tttgccgcca gaacacaggt aagtgccgtg tgtggttccc gcgggcctgg
2821 cctctttacg ggttatggcc cttgcgtgcc ttgaattact tccacctggc tgcagtacgt
2881 gattcttgat cccgagcttc gggttggaag tgggtgggag agttcgaggc cttgcgctta
2941 aggagcccct tcgcctcgtg cttgagttga ggcctggcct gggcgctggg gccgccgcgt
3001 gcgaatctgg tggcaccttc gcgcctgtct cgctgctttc gataagtctc tagccattta
3061 aaatttttga tgacctgctg cgacgctttt tttctggcaa gatagtcttg taaatgcggg
3121 ccaagatctg cacactggta tttcggtttt tggggccgcg ggcggcgacg gggcccgtgc
3181 gtcccagcgc acatgttcgg cgaggcgggg cctgcgagcg cggccaccga gaatcggacg
3241 ggggtagtct caagctggcc ggcctgctct ggtgcctggc ctcgcgccgc cgtgtatcgc
3301 cccgccctgg gcggcaaggc tggcccggtc ggcaccagtt gcgtgagcgg aaagatggcc
3361 gcttcccggc cctgctgcag ggagctcaaa atggaggacg cggcgctcgg gagagcgggc
3421 gggtgagtca cccacacaaa ggaaaagggc ctttccgtcc tcagccgtcg cttcatgtga
3481 ctccacggag taccgggcgc cgtccaggca cctcgattag ttctcgagct tttggagtac
3541 gtcgtcttta ggttgggggg aggggtttta tgcgatggag tttccccaca ctgagtgggt
3601 ggagactgaa gttaggccag cttggcactt gatgtaattc tccttggaat ttgccctttt
3661 tgagtttgga tcttggttca ttctcaagcc tcagacagtg gttcaaagtt tttttcttcc
3721 atttcaggtg tcgtgaggaa ttctctagag atccctcgac ctcgagatcc atcgggcccc
3781 ccctcgaggt cgactcgcct ctacctgatg gccccacact gggctgtctg gctgctggca
3841 gcaaggctgt ggggcctggg cattggggct gaggtgtggt ggaaccttgt gccgcgtaag
3901 acagtgtctt ctggggagct ggccacggta gtacggcggt tctcccagac cggcatccag
3961 gacttcctga cactgacgct gacggagccc actgggcttc tgtacgtggg cgcccgagag
4021 gccctgtttg ccttcagcat ggaggccctg gagctgcaag gagcgatctc ctgggaggcc
4081 cccgtggaga agaagactga gtgtatccag aaagggaaga acaaccagac cgagtgcttc
4141 aacttcatcc gcttcctgca gccctacaat gcctcccacc tgtacgtctg tggcacctac
4201 gccttccagc ccaagtgcac ctacgtcaac atgctcacct tcactttgga gcatggagag
4261 tttgaagatg ggaagggcaa gtgtccctat gacccagcta agggccatgc tggccttctt
4321 gtggatggtg agctgtactc ggccacactc aacaacttcc tgggcacgga acccattatc
4381 ctgcgtaaca tggggcccca ccactccatg aagacagagt acctggcctt ttggctcaac
4441 gaacctcact ttgtaggctc tgcctatgta cctgagagtg tgggcagctt cacgggggac
4501 gacgacaagg tctacttctt cttcagggag cgggcagtgg agtccgactg ctatgccgag
4561 caggtggtgg ctcgtgtggc ccgtgtctgc aagggcgata tggggggcgc acggaccctg
4621 cagaggaagt ggaccacgtt cctgaaggcg cggctggcat gctctgcccc gaactggcag
4681 ctctacttca accagctgca ggcgatgcac accctgcagg acacctcctg gcacaacacc
4741 accttctttg gggtttttca agcacagtgg ggtgacatgt acctgtcggc catctgtgag
4801 taccagttgg aagagatcca gcgggtgttt gagggcccct ataaggagta ccatgaggaa
4861 gcccagaagt gggaccgcta cactgaccct gtacccagcc ctcggcctgg ctcgtgcatt
4921 aacaactggc atcggcgcca cggctacacc agctccctgg agctacccga caacatcctc
4981 aacttcgtca agaagcaccc gctgatggag gagcaggtgg ggcctcggtg gagccgcccc
5041 ctgctcgtga agaagggcac caacttcacc cacctggtgg ccgaccgggt tacaggactt
5101 gatggagcca cctatacagt gctgttcatt ggcacaggag acggctggct gctcaaggct
5161 gtgagcctgg ggccctgggt tcacctgatt gaggagctgc agctgtttga ccaggagccc
5221 atgagaagcc tggtgctatc tcagagcaag aagctgctct ttgccggctc ccgctctcag
5281 ctggtgcagc tgcccgtggc cgactgcatg aagtatcgct cctgtgcaga ctgtgtcctc
5341 gcccgggacc cctattgcgc ctggagcgtc aacaccagcc gctgtgtggc cgtgggtggc
5401 cactctggat ctctactgat ccagcatgtg atgacctcgg acacttcagg catctgcaac
5461 ctccgtggca gtaagaaagt caggcccact cccaaaaaca tcacggtggt ggcgggcaca
5521 gacctggtgc tgccctgcca cctctcctcc aacttggccc atgcccgctg gacctttggg
5581 ggccgggacc tgcctgcgga acagcccggg tccttcctct acgatgcccg gctccaggcc
5641 ctggttgtga tggctgccca gccccgccat gccggggcct accactgctt ttcagaggag
5701 cagggggcgc ggctggctgc tgaaggctac cttgtggctg tcgtggcagg cccgtcggtg
5761 accttggagg cccgggcccc cctggaaaac caaagtaagt aggatccact agttctatcc
5821 tgcctggacg catcccggct atgcagtccc agtccagggc agcaaggcag gccccgtctg
5881 cctcttcacc cggaggcctc tgcccgcccc actcatgctc agggagaggg tcttctggct
5941 ttttccccag gctctgggca ggcacaggct aggtgcccct aacccaggcc ctgcacacaa
6001 aggggcaggt gctgggctca gacctgccaa gagccatatc cgggaggacc ctgcccctga
6061 cctaagccca ccccaaaggc caaactctcc actccctcag ctcggacacc ttctctcctc
6121 ccagattcca gtaactccca atcttctctc tgcagagccc aaatcttgtg acaaaactca
6181 cacatgccca ccgtgcccag gtaagccagc ccaggcctcg ccctccagct caaggcggga
6241 caggtgccct agagtagcct gcatccaggg acaggcccca gccgggtgct gacacgtcca
6301 cctccatctc ttcctcagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc
6361 caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg
6421 acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc
6481 ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg
6541 tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca
6601 acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggt gggacccgtg
6661 gggtgcgagg gccacatgga cagaggccgg ctcggcccac cctctgccct gagagtgacc
6721 gctgtaccaa cctctgtccc tacagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc
6781 ccatcccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc
6841 tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag
6901 accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctatagcaa gctcaccgtg
6961 gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg
7021 cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtccccgg gtaaatgagt gcgacggccg
7081 gcaagccccc gctccccggg ctctcgcggt cgcacgagga tgcttggcac gtaccccgtc
7141 tacatacttc ccaggcaccc agcatggaaa taaagcaccc accactgccc tagagcggcc
7201 gcgactctag agtgagggtc cccacctggg acccttgaga gtatcaggtc tcccacgtgg
7261 gagacaagaa atccctgttt aatatttaaa cagcagtgtt ccccatctgg gtccttgcac
7321 ccctcactct ggcctcagcc gactgcacag cggcccctgc atccccttgg ctgtgaggcc
7381 cctggacaag cagaggtggc cagagctggg aggcatggcc ctggggtccc acgaatttgc
7441 tggggaatct cgtttttctt cttaagactt ttgggacatg gtttgactcc cgaacatcac
7501 cgacgcgtct cctgtttttc tgggtggcct cgggacacct gccctgcccc cacgagggtc
7561 aggactgtga ctctttttag ggccaggcag gtgcctggac atttgccttg ctggacgggg
7621 actggggatg tgggagggag cagacaggag gaatcatgtc aggcctgtgt gtgaaaggaa
7681 gctccactgt caccctccac ctcttcaccc cccactcacc agtgtcccct ccactgtcac
7741 attgtaactg aacttcagga taataaagtg cttgcctcca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa
7801 aaaaaaaaaa aaaaaaaaag aattcactgg ccgtcgtttt acaacgtcgt gactgggaaa
7861 accctggcgt tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc ccctttcgcc agctggcgta
7921 atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt gcgcagcctg aatggcgaat
7981 ggcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc atctgtgcgg tatttcacac cgcaaaacgt
8041 taatattttg ttaaaattcg gtccacgctg gtttgcccca gcaggcgaaa atcctgtttg
8101 atggtggttc cgaaatcggc aaaatccctt ataaatcaaa agaatagccc gagatagggt
8161 tgagtgttgt tccagtttgg aacaagagtc cactattaaa gaacgtggac tccaacgtca
8221 aagggcgaaa aaccgtctat cagggcgatg gcccactacg tgaaccatca cccaaatcaa
8281 gttttttggg gtcgaggtgc cgtaaagcac taaatcggaa ccctaaaggg agcccccgat
8341 ttagagcttg acggggaaag ccggcgaacg tggcgagaaa ggaagggaag aaagcgaaag
8401 gagcgggcgc tagggcgctg gcaagtgtag cggtcacgct gcgcgtaacc accacacccg
8461 ccgcgcttaa tgcgccgcta cagggcgcgt actatggttg ctttgacgag catggtgcac
8521 tctcagtaca atctgctctg atgccgcata gttaagccag ccccgacacc cgccaacacc
8581 cgctgacgcg ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac
8641 cgtctccggg agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcga
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1128/pCDNA4-To-Myc-HisB哺乳表达质粒 |
| P0345/pCDNA6-Myc-HisB哺乳表达质粒 |
| P0816/pCMV-Myc-N哺乳表达质粒 |
| P0817/pCMV-Myc-C哺乳表达质粒 |
| P1040/pCMV-HA-N哺乳表达质粒 |
| P0818/pCMV-HA-C哺乳表达质粒 |
| P0860/pCMV-FLAG-N哺乳表达质粒 |
| P1003/pCMV-FLAG-C哺乳表达质粒 |
| P0787/pCMV6-Entry哺乳表达质粒 |
| P1215/pCMV6-AC-GFP哺乳表达质粒 |
| P0167/pFLAG-CMV-2哺乳表达质粒 |
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