pEGFP-PDL1人源基因质粒

基本信息
名称：pEGFP-PDL1人源基因质粒
别称: NM_001267706.1;CD274;B7-H;B7H1;PDL1;
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色

质粒简介：详询
 

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5254 bp ds-DNA     circular SYN 15-MAR-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5254)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Sep 28, 2017 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5254
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        59..364
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        365..568
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     CDS             613..1329
                     /codon_start=1
                     /product="enhanced GFP"
                     /label=EGFP
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
                     VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
                     EFVTAAGITLGMDELYK"
     misc_feature    1330..1918
                     /label=MCS
                     /note="multiple cloning site of fluorescent protein 
                     plasmids"
     CDS             1351..1881
                     /codon_start=1
                     /product="Homo sapiens CD274 molecule (CD274), transcript 
                     variant 2, mRNA
                     NCBI Reference Sequence: NM_001267706.1"
                     /label=PDL1
                     /translation="MRIFAVFIFMTYWHLLNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEG
                     YPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEE
                     NHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQDT
                     NSKKQSDTHLEET"
     polyA_signal    2042..2163
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(2170..2625)
                     /direction=LEFT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        2652..2756
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     promoter        2758..3115
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      2966..3101
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             3150..3944
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=NeoR/KanR
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin)"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     misc_feature    4176..4223
                     /label=HSV TK poly(A) signal
                     /note="herpesvirus thymidine kinase polyadenylation signal"
     rep_origin      4552..5140
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
       61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
      121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
      181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
      241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
      301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
      361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
      421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
      481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
      541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
      601 ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg
      661 gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc
      721 gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg
      781 ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc
      841 gaccacatga agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag
      901 cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag
      961 ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac
     1021 atcctggggc acaagctgga gtacaactac aacagccaca acgtctatat catggccgac
     1081 aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc
     1141 gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg
     1201 cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc
     1261 gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga tcactctcgg catggacgag
     1321 ctgtacaagt ccggactcag atctcgagct atgaggatat ttgctgtctt tatattcatg
     1381 acctactggc atttgctgaa cgccccatac aacaaaatca accaaagaat tttggttgtg
     1441 gatccagtca cctctgaaca tgaactgaca tgtcaggctg agggctaccc caaggccgaa
     1501 gtcatctgga caagcagtga ccatcaagtc ctgagtggta agaccaccac caccaattcc
     1561 aagagagagg agaagctttt caatgtgacc agcacactga gaatcaacac aacaactaat
     1621 gagattttct actgcacttt taggagatta gatcctgagg aaaaccatac agctgaattg
     1681 gtcatcccag aactacctct ggcacatcct ccaaatgaaa ggactcactt ggtaattctg
     1741 ggagccatct tattatgcct tggtgtagca ctgacattca tcttccgttt aagaaaaggg
     1801 agaatgatgg atgtgaaaaa atgtggcatc caagatacaa actcaaagaa gcaaagtgat
     1861 acacatttgg aggagacgtg agaattctgc agtcgacggt accgcgggcc cgggatccac
     1921 cggatctaga taactgatca taatcagcca taccacattt gtagaggttt tacttgcttt
     1981 aaaaaacctc ccacacctcc ccctgaacct gaaacataaa atgaatgcaa ttgttgttgt
     2041 taacttgttt attgcagctt ataatggtta caaataaagc aatagcatca caaatttcac
     2101 aaataaagca tttttttcac tgcattctag ttgtggtttg tccaaactca tcaatgtatc
     2161 ttaacgcgta aattgtaagc gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa
     2221 tcagctcatt ttttaaccaa taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat
     2281 agaccgagat agggttgagt gttgttccag tttggaacaa gagtccacta ttaaagaacg
     2341 tggactccaa cgtcaaaggg cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca ctacgtgaac
     2401 catcacccta atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat cggaacccta
     2461 aagggagccc ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg agaaaggaag
     2521 ggaagaaagc gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc acgctgcgcg
     2581 taaccaccac acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtcaggt ggcacttttc
     2641 ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc
     2701 cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtcctg
     2761 aggcggaaag aaccagctgt ggaatgtgtg tcagttaggg tgtggaaagt ccccaggctc
     2821 cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca ggtgtggaaa
     2881 gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac
     2941 catagtcccg cccctaactc cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt ccgcccattc
     3001 tccgccccat ggctgactaa ttttttttat ttatgcagag gccgaggccg cctcggcctc
     3061 tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt ttttggaggc ctaggctttt gcaaagatcg
     3121 atcaagagac aggatgagga tcgtttcgca tgattgaaca agatggattg cacgcaggtt
     3181 ctccggccgc ttgggtggag aggctattcg gctatgactg ggcacaacag acaatcggct
     3241 gctctgatgc cgccgtgttc cggctgtcag cgcaggggcg cccggttctt tttgtcaaga
     3301 ccgacctgtc cggtgccctg aatgaactgc aagacgaggc agcgcggcta tcgtggctgg
     3361 ccacgacggg cgttccttgc gcagctgtgc tcgacgttgt cactgaagcg ggaagggact
     3421 ggctgctatt gggcgaagtg ccggggcagg atctcctgtc atctcacctt gctcctgccg
     3481 agaaagtatc catcatggct gatgcaatgc ggcggctgca tacgcttgat ccggctacct
     3541 gcccattcga ccaccaagcg aaacatcgca tcgagcgagc acgtactcgg atggaagccg
     3601 gtcttgtcga tcaggatgat ctggacgaag agcatcaggg gctcgcgcca gccgaactgt
     3661 tcgccaggct caaggcgagc atgcccgacg gcgaggatct cgtcgtgacc catggcgatg
     3721 cctgcttgcc gaatatcatg gtggaaaatg gccgcttttc tggattcatc gactgtggcc
     3781 ggctgggtgt ggcggaccgc tatcaggaca tagcgttggc tacccgtgat attgctgaag
     3841 agcttggcgg cgaatgggct gaccgcttcc tcgtgcttta cggtatcgcc gctcccgatt
     3901 cgcagcgcat cgccttctat cgccttcttg acgagttctt ctgagcggga ctctggggtt
     3961 cgaaatgacc gaccaagcga cgcccaacct gccatcacga gatttcgatt ccaccgccgc
     4021 cttctatgaa aggttgggct tcggaatcgt tttccgggac gccggctgga tgatcctcca
     4081 gcgcggggat ctcatgctgg agttcttcgc ccaccctagg gggaggctaa ctgaaacacg
     4141 gaaggagaca ataccggaag gaacccgcgc tatgacggca ataaaaagac agaataaaac
     4201 gcacggtgtt gggtcgtttg ttcataaacg cggggttcgg tcccagggct ggcactctgt
     4261 cgatacccca ccgagacccc attggggcca atacgcccgc gtttcttcct tttccccacc
     4321 ccacccccca agttcgggtg aaggcccagg gctcgcagcc aacgtcgggg cggcaggccc
     4381 tgccatagcc tcaggttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt
     4441 taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga
     4501 gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc
     4561 tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt
     4621 ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc
     4681 gcagatacca aatactgtcc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc
     4741 tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg
     4801 cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg
     4861 gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga
     4921 actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc
     4981 ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg
     5041 gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg
     5101 atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt
     5161 tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc
     5221 tgattctgtg gataaccgta ttaccgccat gcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P0066/pTWIN1大肠表达质粒

P1840/pSmart1大肠表达质粒

P0678/pSUMO大肠表达质粒

P0904/pSUMO-mut大肠表达质粒

P0932/pEZZ18大肠表达质粒

P1174/pttq18大肠表达质粒

P1238/pT7-Luc大肠报告质粒

P1384/pSNAP-Tag(T7)2大肠表达质粒

P1364/pSNAP-tag(T7)2-His大肠表达质粒

P2163/His-LacZ大肠报告质粒

P3065/pSMART LCKan质粒

P3220/pMIND质粒