相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
SAK;STK18
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:pECMV-3×FLAG-pLK4人源基因质粒
别称: SAK;STK18
启动子:CMV
复制子: pUC
终止子: bGH poly(A) signal
质粒分类: 基因文库质粒;人源基因质粒;人源真核质粒
质粒大小:8371bp
质粒标签:N-3×FLAG
原核抗性: Amp
筛选标记:G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
表达宿主: 293T等哺乳细胞
质粒属性
载体宿主:哺乳细胞
载体用途:蛋白表达
基因种属:人
基因类型:ORF
原核抗性:Amp
真核抗性:Neo/G418
荧光蛋白:
质粒简介
pECMV-3×FLAG-pLK4质粒是一个哺乳细胞过表达质粒,CMV强启动子驱动3×FLAG标签和pLK4人源基因的融合表达。pECMV-3×FLAG-pLK4质粒由武汉淼灵生物科技有限公司构建并分享至淼灵质粒平台。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8371 bp ds-DNA circular SYN 17-八月-2017
KEYWORDS pECMV-3×FLAG-pLK4
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8371)
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8371
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 235..614
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 863..881
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 922..987
/codon_start=1
/product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
enterokinase cleavage site"
/note="3xFLAG"
/translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
CDS 1015..3927
/codon_start=1
/note="pLK4"
/translation="MATCIGEKIEDFKVGNLLGKGSFAGVYRAESIHTGLEVAIKMIDK
KAMYKAGMVQRVQNEVKIHCQLKHPSILELYNYFEDSNYVYLVLEMCHNGEMNRYLKNR
VKPFSENEARHFMHQIITGMLYLHSHGILHRDLTLSNLLLTRNMNIKIADFGLATQLKM
PHEKHYTLCGTPNYISPEIATRSAHGLESDVWSLGCMFYTLLIGRPPFDTDTVKNTLNK
VVLADYEMPSFLSIEAKDLIHQLLRRNPADRLSLSSVLDHPFMSRNSSTKSKDLGTVED
SIDSGHATISTAITASSSTSISGSLFDKRRLLIGQPLPNKMTVFPKNKSSTDFSSSGDG
NSFYTQWGNQETSNSGRGRVIQDAEERPHSRYLRRAYSSDRSGTSNSQSQAKTYTMERC
HSAEMLSVSKRSGGGENEERYSPTDNNANIFNFFKEKTSSSSGSFERPDNNQALSNHLC
PGKTPFPFADPTPQTETVQQWFGNLQINAHLRKTTEYDSISPNRDFQGHPDLQKDTSKN
AWTDTKVKKNSDASDNAHSVKQQNTMKYMTALHSKPEIIQQECVFGSDPLSEQSKTRGM
EPPWGYQNRTLRSITSPLVAHRLKPIRQKTKKAVVSILDSEEVCVELVKEYASQEYVKE
VLQISSDGNTITIYYPNGGRGFPLADRPPSPTDNISRYSFDNLPEKYWRKYQYASRFVQ
LVRSKSPKITYFTRYAKCILMENSPGADFEVWFYDGVKIHKTEDFIQVIEKTGKSYTLK
SESEVNSLKEEIKMYMDHANEGHRICLALESIISEEERKTRSAPFFPIIIGRKPGSTSS
PKALSPPPSVDSNYPTRERASFNRMVMHSAASPTQAPILNPSMVTNEGLGLTTTASGTD
ISSNSLKDCLPKSAQLLKSVFVKNVGWATQLTSGAVWVQFNDGSQLVVQAGVSSISYTS
PNGQTTRYGENEKLPDYIKQKLQCLSSILLMFSNPTPNFH"
polyA_signal 3971..4195
/note="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 4241..4669
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 4683..5012
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4863..4998
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 5079..5873
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 6047..6168
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(6619..7204)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(7375..8235)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(8236..8340)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccgagc tcggatccgc caccatggcg
1021 acctgcatcg gggagaagat cgaggatttt aaagttggaa atctgcttgg taaaggatca
1081 tttgctggtg tctacagagc tgagtccatt cacactggtt tggaagttgc aatcaaaatg
1141 atagataaga aagccatgta caaagcagga atggtacaga gagtccaaaa tgaggtgaaa
1201 atacattgcc aattgaaaca tccttctatc ttggagcttt ataactattt tgaagatagc
1261 aattatgtgt atctggtatt agaaatgtgc cataatggag aaatgaacag gtatctaaag
1321 aatagagtga aacccttctc agaaaatgaa gctcgacact tcatgcacca gatcatcaca
1381 gggatgttgt atcttcattc tcatggtata ctacaccggg acctcacact ttctaacctc
1441 ctactgactc gtaatatgaa catcaagatt gctgattttg ggctggcaac tcaactgaaa
1501 atgccacatg aaaagcacta tacattatgt ggaactccta actacatttc accagaaatt
1561 gccactcgaa gtgcacatgg ccttgaatct gatgtttggt ccctgggctg tatgttttat
1621 acattactta tcgggagacc acccttcgac actgacacag tcaagaacac attaaataaa
1681 gtagtattgg cagattatga aatgccatct tttttgtcaa tagaggccaa ggaccttatt
1741 caccagttac ttcgtagaaa tccagcagat cgtttaagtc tgtcttcagt attggaccat
1801 ccttttatgt cccgaaattc ttcaacaaaa agtaaagatt taggaactgt ggaagactca
1861 attgatagtg ggcatgccac aatttctact gcaattacag cttcttccag taccagtata
1921 agtggtagtt tatttgacaa aagaagactt ttgattggtc agccactccc aaataaaatg
1981 actgtatttc caaagaataa aagttcaact gatttttctt cttcaggaga tggaaacagt
2041 ttttatactc agtggggaaa tcaagaaacc agtaatagtg gaaggggaag agtaattcaa
2101 gatgcagaag aaaggccaca ttctcgatac cttcgtagag cttattcctc tgatagatct
2161 ggcacttcta atagtcagtc tcaagcaaaa acatatacaa tggaacgatg tcactcagca
2221 gaaatgcttt cagtgtccaa aagatcagga ggaggtgaaa atgaagagag gtactcaccc
2281 acagacaaca atgccaacat ttttaacttc tttaaagaaa agacatccag tagttctgga
2341 tcttttgaaa gacctgataa caatcaagca ctctccaatc atctttgtcc aggaaaaact
2401 ccttttccat ttgcagaccc gacacctcag accgaaaccg tacaacagtg gtttgggaat
2461 ctgcaaataa atgctcattt aagaaaaact actgaatatg acagcatcag cccaaaccgg
2521 gacttccagg gccatccaga tttgcagaag gacacatcaa aaaatgcctg gactgataca
2581 aaagtcaaaa agaactctga tgcttctgat aatgcacatt ctgtaaaaca gcaaaatacc
2641 atgaaatata tgactgcact tcacagtaaa cctgagataa tccaacaaga atgtgttttt
2701 ggctcagatc ctctttctga acagagcaag actaggggta tggagccacc atggggttat
2761 cagaatcgta cattaagaag cattacatct ccgttggttg ctcacaggtt aaaaccaatc
2821 agacagaaaa ccaaaaaggc tgtggtgagc atacttgatt cagaggaggt gtgtgtggag
2881 cttgtaaagg agtatgcatc tcaagaatat gtgaaagaag ttcttcagat atctagtgat
2941 ggaaatacga tcactattta ttatccaaat ggtggtagag gttttcctct tgctgataga
3001 ccaccctcac ctactgacaa catcagtagg tacagctttg acaatttacc agaaaaatac
3061 tggcgaaaat atcaatatgc ttccaggttt gtacagcttg taagatctaa atctcccaaa
3121 atcacttatt ttacaagata tgctaaatgc attttgatgg agaattctcc tggtgctgat
3181 tttgaggttt ggttttatga tggggtaaaa atacacaaaa cagaagattt cattcaggtg
3241 attgaaaaga cagggaagtc ttacacttta aaaagtgaaa gtgaagttaa tagcttgaaa
3301 gaggagataa aaatgtatat ggaccatgct aatgagggtc atcgtatttg tttagcactg
3361 gaatccataa tttcagaaga ggaaaggaaa actaggagtg ctcccttttt cccaataatc
3421 ataggaagaa aacctggtag tactagttca cctaaggcct tatcacctcc tccttctgtg
3481 gattcaaatt acccaacgag agagagagca tctttcaaca gaatggtcat gcatagtgct
3541 gcttctccaa cacaggcacc aatccttaat ccctctatgg ttacaaatga aggacttggt
3601 cttacaacta cagcttctgg aacagacatc tcttctaata gtctaaaaga ttgtcttcct
3661 aaatcagcac aacttttgaa atctgttttt gtgaaaaatg ttggttgggc tacacagtta
3721 actagtggag ctgtgtgggt tcagtttaat gatgggtccc agttggttgt gcaggcagga
3781 gtgtcttcta tcagttatac ctcaccaaat ggtcaaacaa ctaggtatgg agaaaatgaa
3841 aaattaccag actacatcaa acagaaatta cagtgtctgt cttccatcct tttgatgttt
3901 tctaatccga ctcctaattt tcattgactc gagtctagag ggcccgttta aacccgctga
3961 tcagcctcga ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct
4021 tccttgaccc tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca
4081 tcgcattgtc tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag
4141 ggggaggatt gggaagacaa tagcaggcat gctggggatg cggtgggctc tatggcttct
4201 gaggcggaaa gaaccagctg gggctctagg gggtatcccc acgcgccctg tagcggcgca
4261 ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg ctacacttgc cagcgcccta
4321 gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca cgttcgccgg ctttccccgt
4381 caagctctaa atcgggggct ccctttaggg ttccgattta gtgctttacg gcacctcgac
4441 cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc catcgccctg atagacggtt
4501 tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg gactcttgtt ccaaactgga
4561 acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat aagggatttt gccgatttcg
4621 gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta acgcgaatta attctgtgga
4681 atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa
4741 gcatgcatct caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca
4801 gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc
4861 ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc gccccatggc tgactaattt
4921 tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct ctgcctctga gctattccag aagtagtgag
4981 gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aaaagctccc gggagcttgt atatccattt
5041 tcggatctga tcaagagaca ggatgaggat cgtttcgcat gattgaacaa gatggattgc
5101 acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga
5161 caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt
5221 ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca ggacgaggca gcgcggctat
5281 cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg
5341 gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg
5401 ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc
5461 cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga
5521 tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag
5581 ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc
5641 atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct ggattcatcg
5701 actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct acccgtgata
5761 ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg
5821 ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc tgagcgggac
5881 tctggggttc gaaatgaccg accaagcgac gcccaacctg ccatcacgag atttcgattc
5941 caccgccgcc ttctatgaaa ggttgggctt cggaatcgtt ttccgggacg ccggctggat
6001 gatcctccag cgcggggatc tcatgctgga gttcttcgcc caccccaact tgtttattgc
6061 agcttataat ggttacaaat aaagcaatag catcacaaat ttcacaaata aagcattttt
6121 ttcactgcat tctagttgtg gtttgtccaa actcatcaat gtatcttatc atgtctgtat
6181 accgtcgacc tctagctaga gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa
6241 ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg
6301 gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca
6361 gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg
6421 tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg
6481 gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
6541 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa
6601 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
6661 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
6721 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
6781 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
6841 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
6901 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
6961 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
7021 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc
7081 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
7141 caccgctggt agcggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc
7201 tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg
7261 ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta
7321 aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca
7381 atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc
7441 ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc
7501 tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc
7561 agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat
7621 taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt
7681 tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc
7741 cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag
7801 ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat cactcatggt
7861 tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac
7921 tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg
7981 cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag tgctcatcat
8041 tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga gatccagttc
8101 gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc
8161 tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa
8221 atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc agggttattg
8281 tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg
8341 cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt c
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P2838/pREDCas9大肠敲除质粒 |
| P3064/pET-28b-Cas9-His大肠编辑质粒 |
| P0705/pBPK2101-saCas9-gRNA大肠编辑质粒 |
| P1183/pY001 (pFnCpf1_full)大肠敲除质粒 |
| P1736/6-His-MBP-TEV-FnCpf1大肠敲除质粒 |
| P2440/pJYS1Ptac大肠敲除质粒 |
| P2638/pJYS1Peftu大肠敲除质粒 |
| P2884/p46Cpf1-OP2大肠编辑质粒 |
| P1206/pRH2502大肠敲除质粒 |
| P0841/pET302-6HIS-dCas9-Halo大肠敲除质粒 |
| P0843/pC001 - huLshC2C2-MBP for bacterial expression大肠敲除质粒 |
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验入 DMSO 或 2-巯基乙醇,混合后加入 L 连接反应液 (含重组质粒),温和混匀,置冰上 30 min;2. 42 ℃ 水浴 45 秒,然后迅速放回冰中 1~2 min;3. 加入 2 mL LB 培养液,37 ℃ 轻摇荡培养 1 h;4. 4,000×g 离心 10 秒钟,弃上清,用 LB 培养液重悬菌体;5. 将菌液铺于含有适当抗生素的 LB 琼脂培养板上,涂匀,室温放置 20~30 min,倒置于 37 ℃ 孵箱中培养 12~16 h。(三)转化细胞的筛选【实验原理】1、 蓝白筛选:以 TA
毒载体。 2.慢病毒包装与纯化 慢病毒包装采用三质粒或四质粒系统进行包装,收集细胞培养上清,通过超速离心浓缩纯化和收集病毒。 3.慢病毒滴度检测 检测方法:定量PCR检测干扰后细胞基因组中外源DNA拷贝数 实验原理:慢病毒介导外源基因以逆转录方式整合进目的细胞基因组 4.慢病毒载体优势 ① 表达时间长:慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上,实现基因长时间稳定的表达,不随细胞分裂传代而丢失,是细胞实验的首选,常用于构建稳转株 ② 安全性高:未发现致病性,慢病毒载体改造T细胞用于CAR-T
良好的的基因治疗效果,在美国已经开展了临床研究,效果非常理想,因此具有广阔的应用前景。 慢病毒转染优点:1.外源基因表达水平较高、表达稳定;2.转染效率高,可感染分裂和不分裂的细胞,几乎可以感染所有类型的细胞,特别适合质粒载体转染效率低的细胞;3.慢病毒基因容易操作,易于制备大量病毒且滴度高;4.病毒基因组可整合到细胞基因组,易于构建稳定细胞株。 慢病毒包装技术:慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。将外源基因克隆进入表达载体,同时与包装质粒(表达病毒包装所需辅助蛋白)一起转染










