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pECMV-3×FLAG-pLK4人源基因质粒

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  • Xybio
  • 上海
  • P1374
  • 2025年07月14日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20

    • 保质期

      2年

    • 英文名

      SAK;STK18

    • 库存

      100

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 规格

      干粉/液体

    基本信息
    名称:pECMV-3×FLAG-pLK4人源基因质粒
    别称: SAK;STK18
    启动子:CMV
    复制子: pUC
    终止子:   bGH poly(A) signal
    质粒分类:  基因文库质粒;人源基因质粒;人源真核质粒
    质粒大小:8371bp
    质粒标签:N-3×FLAG
    原核抗性: Amp
    筛选标记:G418
    克隆菌株: DH5a
    培养条件: 37度
    表达宿主:   293T等哺乳细胞

    质粒属性
    载体宿主:哺乳细胞
    载体用途:蛋白表达
    基因种属:
    基因类型:ORF
    原核抗性:Amp
    真核抗性:Neo/G418
    荧光蛋白:

    质粒简介
                  pECMV-3×FLAG-pLK4质粒是一个哺乳细胞过表达质粒,CMV强启动子驱动3×FLAG标签和pLK4人源基因的融合表达。pECMV-3×FLAG-pLK4质粒由武汉淼灵生物科技有限公司构建并分享至淼灵质粒平台。

    质粒图谱
    产品细节图片1

    质粒序列
    LOCUS       Exported                8371 bp ds-DNA    circular SYN 17-八月-2017
    KEYWORDS    pECMV-3×FLAG-pLK4
    SOURCE      synthetic DNA construct
      ORGANISM  synthetic DNA construct
    REFERENCE   1  (bases 1 to 8371)
    FEATURES             Location/Qualifiers
         source          1..8371
                         /organism="synthetic DNA construct"
                         /mol_type="other DNA"
         enhancer        235..614
                         /note="CMV enhancer"
                         /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
         promoter        615..818
                         /note="CMV promoter"
                         /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                         promoter"
         promoter        863..881
                         /note="T7 promoter"
                         /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
         CDS             922..987
                         /codon_start=1
                         /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
                         enterokinase cleavage site"
                         /note="3xFLAG"
                         /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
         CDS             1015..3927
                         /codon_start=1
                         /note="pLK4"
                         /translation="MATCIGEKIEDFKVGNLLGKGSFAGVYRAESIHTGLEVAIKMIDK
                         KAMYKAGMVQRVQNEVKIHCQLKHPSILELYNYFEDSNYVYLVLEMCHNGEMNRYLKNR
                         VKPFSENEARHFMHQIITGMLYLHSHGILHRDLTLSNLLLTRNMNIKIADFGLATQLKM
                         PHEKHYTLCGTPNYISPEIATRSAHGLESDVWSLGCMFYTLLIGRPPFDTDTVKNTLNK
                         VVLADYEMPSFLSIEAKDLIHQLLRRNPADRLSLSSVLDHPFMSRNSSTKSKDLGTVED
                         SIDSGHATISTAITASSSTSISGSLFDKRRLLIGQPLPNKMTVFPKNKSSTDFSSSGDG
                         NSFYTQWGNQETSNSGRGRVIQDAEERPHSRYLRRAYSSDRSGTSNSQSQAKTYTMERC
                         HSAEMLSVSKRSGGGENEERYSPTDNNANIFNFFKEKTSSSSGSFERPDNNQALSNHLC
                         PGKTPFPFADPTPQTETVQQWFGNLQINAHLRKTTEYDSISPNRDFQGHPDLQKDTSKN
                         AWTDTKVKKNSDASDNAHSVKQQNTMKYMTALHSKPEIIQQECVFGSDPLSEQSKTRGM
                         EPPWGYQNRTLRSITSPLVAHRLKPIRQKTKKAVVSILDSEEVCVELVKEYASQEYVKE
                         VLQISSDGNTITIYYPNGGRGFPLADRPPSPTDNISRYSFDNLPEKYWRKYQYASRFVQ
                         LVRSKSPKITYFTRYAKCILMENSPGADFEVWFYDGVKIHKTEDFIQVIEKTGKSYTLK
                         SESEVNSLKEEIKMYMDHANEGHRICLALESIISEEERKTRSAPFFPIIIGRKPGSTSS
                         PKALSPPPSVDSNYPTRERASFNRMVMHSAASPTQAPILNPSMVTNEGLGLTTTASGTD
                         ISSNSLKDCLPKSAQLLKSVFVKNVGWATQLTSGAVWVQFNDGSQLVVQAGVSSISYTS
                         PNGQTTRYGENEKLPDYIKQKLQCLSSILLMFSNPTPNFH"
         polyA_signal    3971..4195
                         /note="bGH poly(A) signal"
                         /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
         rep_origin      4241..4669
                         /direction=RIGHT
                         /note="f1 ori"
                         /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                         indicates direction of (+) strand synthesis"
         promoter        4683..5012
                         /note="SV40 promoter"
                         /note="SV40 enhancer and early promoter"
         rep_origin      4863..4998
                         /note="SV40 ori"
                         /note="SV40 origin of replication"
         CDS             5079..5873
                         /codon_start=1
                         /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                         /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                         /note="NeoR/KanR"
                         /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                         (Geneticin(R))"
                         /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                         VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                         SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                         GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                         LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
         polyA_signal    6047..6168
                         /note="SV40 poly(A) signal"
                         /note="SV40 polyadenylation signal"
         rep_origin      complement(6619..7204)
                         /direction=LEFT
                         /note="ori"
                         /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                         replication"
         CDS             complement(7375..8235)
                         /codon_start=1
                         /gene="bla"
                         /product="beta-lactamase"
                         /note="AmpR"
                         /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                         related antibiotics"
                         /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                         ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                         PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                         EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                         LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                         LIKHW"
         promoter        complement(8236..8340)
                         /gene="bla"
                         /note="AmpR promoter"
    ORIGIN
            1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
           61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
          121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
          181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
          241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
          301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
          361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
          421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
          481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
          541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
          601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
          661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
          721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
          781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
          841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
          901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
          961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccgagc tcggatccgc caccatggcg
         1021 acctgcatcg gggagaagat cgaggatttt aaagttggaa atctgcttgg taaaggatca
         1081 tttgctggtg tctacagagc tgagtccatt cacactggtt tggaagttgc aatcaaaatg
         1141 atagataaga aagccatgta caaagcagga atggtacaga gagtccaaaa tgaggtgaaa
         1201 atacattgcc aattgaaaca tccttctatc ttggagcttt ataactattt tgaagatagc
         1261 aattatgtgt atctggtatt agaaatgtgc cataatggag aaatgaacag gtatctaaag
         1321 aatagagtga aacccttctc agaaaatgaa gctcgacact tcatgcacca gatcatcaca
         1381 gggatgttgt atcttcattc tcatggtata ctacaccggg acctcacact ttctaacctc
         1441 ctactgactc gtaatatgaa catcaagatt gctgattttg ggctggcaac tcaactgaaa
         1501 atgccacatg aaaagcacta tacattatgt ggaactccta actacatttc accagaaatt
         1561 gccactcgaa gtgcacatgg ccttgaatct gatgtttggt ccctgggctg tatgttttat
         1621 acattactta tcgggagacc acccttcgac actgacacag tcaagaacac attaaataaa
         1681 gtagtattgg cagattatga aatgccatct tttttgtcaa tagaggccaa ggaccttatt
         1741 caccagttac ttcgtagaaa tccagcagat cgtttaagtc tgtcttcagt attggaccat
         1801 ccttttatgt cccgaaattc ttcaacaaaa agtaaagatt taggaactgt ggaagactca
         1861 attgatagtg ggcatgccac aatttctact gcaattacag cttcttccag taccagtata
         1921 agtggtagtt tatttgacaa aagaagactt ttgattggtc agccactccc aaataaaatg
         1981 actgtatttc caaagaataa aagttcaact gatttttctt cttcaggaga tggaaacagt
         2041 ttttatactc agtggggaaa tcaagaaacc agtaatagtg gaaggggaag agtaattcaa
         2101 gatgcagaag aaaggccaca ttctcgatac cttcgtagag cttattcctc tgatagatct
         2161 ggcacttcta atagtcagtc tcaagcaaaa acatatacaa tggaacgatg tcactcagca
         2221 gaaatgcttt cagtgtccaa aagatcagga ggaggtgaaa atgaagagag gtactcaccc
         2281 acagacaaca atgccaacat ttttaacttc tttaaagaaa agacatccag tagttctgga
         2341 tcttttgaaa gacctgataa caatcaagca ctctccaatc atctttgtcc aggaaaaact
         2401 ccttttccat ttgcagaccc gacacctcag accgaaaccg tacaacagtg gtttgggaat
         2461 ctgcaaataa atgctcattt aagaaaaact actgaatatg acagcatcag cccaaaccgg
         2521 gacttccagg gccatccaga tttgcagaag gacacatcaa aaaatgcctg gactgataca
         2581 aaagtcaaaa agaactctga tgcttctgat aatgcacatt ctgtaaaaca gcaaaatacc
         2641 atgaaatata tgactgcact tcacagtaaa cctgagataa tccaacaaga atgtgttttt
         2701 ggctcagatc ctctttctga acagagcaag actaggggta tggagccacc atggggttat
         2761 cagaatcgta cattaagaag cattacatct ccgttggttg ctcacaggtt aaaaccaatc
         2821 agacagaaaa ccaaaaaggc tgtggtgagc atacttgatt cagaggaggt gtgtgtggag
         2881 cttgtaaagg agtatgcatc tcaagaatat gtgaaagaag ttcttcagat atctagtgat
         2941 ggaaatacga tcactattta ttatccaaat ggtggtagag gttttcctct tgctgataga
         3001 ccaccctcac ctactgacaa catcagtagg tacagctttg acaatttacc agaaaaatac
         3061 tggcgaaaat atcaatatgc ttccaggttt gtacagcttg taagatctaa atctcccaaa
         3121 atcacttatt ttacaagata tgctaaatgc attttgatgg agaattctcc tggtgctgat
         3181 tttgaggttt ggttttatga tggggtaaaa atacacaaaa cagaagattt cattcaggtg
         3241 attgaaaaga cagggaagtc ttacacttta aaaagtgaaa gtgaagttaa tagcttgaaa
         3301 gaggagataa aaatgtatat ggaccatgct aatgagggtc atcgtatttg tttagcactg
         3361 gaatccataa tttcagaaga ggaaaggaaa actaggagtg ctcccttttt cccaataatc
         3421 ataggaagaa aacctggtag tactagttca cctaaggcct tatcacctcc tccttctgtg
         3481 gattcaaatt acccaacgag agagagagca tctttcaaca gaatggtcat gcatagtgct
         3541 gcttctccaa cacaggcacc aatccttaat ccctctatgg ttacaaatga aggacttggt
         3601 cttacaacta cagcttctgg aacagacatc tcttctaata gtctaaaaga ttgtcttcct
         3661 aaatcagcac aacttttgaa atctgttttt gtgaaaaatg ttggttgggc tacacagtta
         3721 actagtggag ctgtgtgggt tcagtttaat gatgggtccc agttggttgt gcaggcagga
         3781 gtgtcttcta tcagttatac ctcaccaaat ggtcaaacaa ctaggtatgg agaaaatgaa
         3841 aaattaccag actacatcaa acagaaatta cagtgtctgt cttccatcct tttgatgttt
         3901 tctaatccga ctcctaattt tcattgactc gagtctagag ggcccgttta aacccgctga
         3961 tcagcctcga ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct
         4021 tccttgaccc tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca
         4081 tcgcattgtc tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag
         4141 ggggaggatt gggaagacaa tagcaggcat gctggggatg cggtgggctc tatggcttct
         4201 gaggcggaaa gaaccagctg gggctctagg gggtatcccc acgcgccctg tagcggcgca
         4261 ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg ctacacttgc cagcgcccta
         4321 gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca cgttcgccgg ctttccccgt
         4381 caagctctaa atcgggggct ccctttaggg ttccgattta gtgctttacg gcacctcgac
         4441 cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc catcgccctg atagacggtt
         4501 tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg gactcttgtt ccaaactgga
         4561 acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat aagggatttt gccgatttcg
         4621 gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta acgcgaatta attctgtgga
         4681 atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa
         4741 gcatgcatct caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca
         4801 gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc
         4861 ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc gccccatggc tgactaattt
         4921 tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct ctgcctctga gctattccag aagtagtgag
         4981 gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aaaagctccc gggagcttgt atatccattt
         5041 tcggatctga tcaagagaca ggatgaggat cgtttcgcat gattgaacaa gatggattgc
         5101 acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga
         5161 caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt
         5221 ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca ggacgaggca gcgcggctat
         5281 cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg
         5341 gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg
         5401 ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc
         5461 cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga
         5521 tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag
         5581 ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc
         5641 atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct ggattcatcg
         5701 actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct acccgtgata
         5761 ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg
         5821 ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc tgagcgggac
         5881 tctggggttc gaaatgaccg accaagcgac gcccaacctg ccatcacgag atttcgattc
         5941 caccgccgcc ttctatgaaa ggttgggctt cggaatcgtt ttccgggacg ccggctggat
         6001 gatcctccag cgcggggatc tcatgctgga gttcttcgcc caccccaact tgtttattgc
         6061 agcttataat ggttacaaat aaagcaatag catcacaaat ttcacaaata aagcattttt
         6121 ttcactgcat tctagttgtg gtttgtccaa actcatcaat gtatcttatc atgtctgtat
         6181 accgtcgacc tctagctaga gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa
         6241 ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg
         6301 gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca
         6361 gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg
         6421 tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg
         6481 gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
         6541 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa
         6601 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
         6661 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
         6721 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
         6781 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
         6841 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
         6901 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
         6961 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
         7021 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc
         7081 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
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    质粒菌株产品操作说明书
    一、扩增流程
             收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
             1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
                  1100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
                  加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37培养45min
                  6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
                  将平板正向培养1h,再倒置37培养14h。如果要求是30度则培养20h
    (菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
                  挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
            2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
                  四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
            3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
            4、菌落平板(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  直接挑取单菌落至液体培养基中。
            5、液体质粒(冰袋运输,存于-20,保质期90天)
                  单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
            6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。

    二、转化图片
    产品细节图片2
    产品细节图片3
    P2838/pREDCas9大肠敲除质粒
    P3064/pET-28b-Cas9-His大肠编辑质粒
    P0705/pBPK2101-saCas9-gRNA大肠编辑质粒
    P1183/pY001 (pFnCpf1_full)大肠敲除质粒
    P1736/6-His-MBP-TEV-FnCpf1大肠敲除质粒
    P2440/pJYS1Ptac大肠敲除质粒
    P2638/pJYS1Peftu大肠敲除质粒
    P2884/p46Cpf1-OP2大肠编辑质粒
    P1206/pRH2502大肠敲除质粒
    P0841/pET302-6HIS-dCas9-Halo大肠敲除质粒
    P0843/pC001 - huLshC2C2-MBP for bacterial expression大肠敲除质粒
     

     

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